Électrophorèse

Question 1

Qu’est-ce qu’une électrophorèse ?

Answer 1

C’est la migration d’un ion dans un champ électrique.

Question 2

Quelle est la condition pour qu’un ion puisse migrer dans le champ électrique ?

Answer 2

Il faut que la force électrique soit plus forte que la force de friction.

Question 3

Comment calcule-t-on la force électrique ?

Answer 3

Félectrique = q (charge) * (dans un champ électrique de densité) E

Question 4

Comment calcule-t-on la force de friction ?

Answer 4

Ffriction = v (vitesse de migration) * f (coefficiant de friction)

Question 5

Qu’est-ce que le coefficient de friction ?

Answer 5

La mesure de la résistance exercée par la solution sur l’ion pendant sa migration.

Question 6

Comment calcule-t-on la mobilité électrophorétique ?

Answer 6

mu = v/E où E=q/f

Question 7

Qu’est-ce que l’électrophorèse en zones ?

Answer 7

Technique dans laquelle l’échantillon est contrait à se déplacer dans une phase solide, comme le papier filtre, la cellulose, ou d’un gel.

Question 8

Quels sont les avantages d’une électrophorèse en zones ? (2)

Answer 8

1- On élimine largement l’agitation provoquée par la convection. 2- La technique requiert une faible quantité de matériel permettant ainsi la migration des composantes en bandes discrètes.

Question 9

Qu’est-ce que l’électrophorèse sur gel ?

Answer 9

La séparation moléculaire est basée non seulement sur la mobilité électrophorétique, mais aussi sur le principe de filtration sur gel. Les gels d’électrophorèse retardent les molécules de taille plus grande.

Question 10

Avec quel matière forme-t-on les gels d’électrophorèses habituellement ?

Answer 10

L’agarose et le polyacrylamide

Question 11

Quelles sont les étapes pour une électrophorèse sur gel ?

Answer 11

1- Avant que le mélange réactionnel n’ait durci, il est coulé dans un récipient formé par deux plaques de verres et polymérisera en une couche mince de gel de quelques millimètres. 2- Les échantillons sont déposés dans des puits préformés au sommet du gel. 3- le tampon est le même dans les réservoirs du haut et du bas (PH-9 pour que toutes les protéines aient une charge négative). 4- Un courant continu de 100 à 200 volts parcourt le gel pendant la durée de la migration.

Question 12

Dans quelle direction vont les protéines lors d’une électrophorèse ?

Answer 12

Vers le bas, anode (+)

Question 13

Selon quelles propriétées physico-chimiques les protéines vont migrés dans le gel ?

Answer 13

Charge/masse

Question 14

Pour avoir une meilleure finesse avec les bandes, que faudrait il faire au gel ?

Answer 14

Il faudrait qu’il soit le plus long possible.

Question 15

Où se trouve le gel de concentration (stacking gel) et quelle est son utilité ?

Answer 15

Il se retrouve au dessus du gel de séparation et permet d’aplatir les bandes de protéines pour qu’elles commencent leur migration au même point de départ.

Question 16

À quoi sert le gel de séparation (running gel) ?

Answer 16

À séparer les protéines et ainsi, les analyser.

Question 17

Quel est le pH du gel de concentration ?

Answer 17

2 unités de moins que le gel de séparation

Question 18

Par rapport à la vitesse, que se passe-t-il dans le gel de concentration ?

Answer 18

il augmente la résistance au courant électrique et ainsi, la vitesse. E=IR

Question 19

Par rapport à la vitesse, que se passe-t-il dans le gel de concentration ?

Answer 19

On diminue la résistance au courant électrique et ainsi, la vitesse diminue.

Question 20

De quoi dépendent les gels SDS PAGE ?

Answer 20

Du fait que certains savons ou détergents sont capables de dénaturer la structure d’une protéine.

Question 21

Que veut dire SDS-PAGE ?

Answer 21

Sodium dodecyl sulfate PolyAcrylamide Gel Electrophoresis

Question 22

Quel est le ratio de liaison du détergent aux acides aminés ?

Answer 22

Une molécule de détergent permet de lier 2 acides aminés

Question 23

Qu’arrive-t-il donc au protéines dans le SDS PAGE ?

Answer 23

En présence de SDS, les protéines contenant des sous-unités sont désunies et la chaîne polypeptidique de chaque sous-unité adopte une conformation étendue (linéarisation).

Question 24

Qu’arrive-t-il au rapport charge/masse dans le cas d’un gel SDS ?

Answer 24

La séparation électrophorétique du gel avec du SDS dépendra uniquement du phénomène de gel filtration par les pores du gel (donc de la masse)

Question 25

Quels sont les deux grands avantages de l’utilisation de SDS ?

Answer 25

1- Il dissous les agrégats et les particules insolubles qui peuvent causer problèmes en bloquant les pores du gel. 2- La mobilité électrophorétique possède une relation directe avec le poids moléculaire.

Question 26

Comment décrit on la relation entre la mobilité électrophorétique et le poids moléculaire ?

Answer 26

Linéaire avec le logarithme du poids moléculaire

Question 27

Comment fait on pour visualiser les protéines ?

Answer 27

Coloration avec le bleu de Coomassie brillant, avec le nitrate d’argent, l’autoradiographie (pour les molécules marquées d’un isotope radioactif) ou immunobuvardage (anticorps).