Électrophorèse Flashcards
Qu’est-ce qu’une électrophorèse ?
C’est la migration d’un ion dans un champ électrique.
Quelle est la condition pour qu’un ion puisse migrer dans le champ électrique ?
Il faut que la force électrique soit plus forte que la force de friction.
Comment calcule-t-on la force électrique ?
Félectrique = q (charge) * (dans un champ électrique de densité) E
Comment calcule-t-on la force de friction ?
Ffriction = v (vitesse de migration) * f (coefficiant de friction)
Qu’est-ce que le coefficient de friction ?
La mesure de la résistance exercée par la solution sur l’ion pendant sa migration.
Comment calcule-t-on la mobilité électrophorétique ?
mu = v/E où E=q/f
Qu’est-ce que l’électrophorèse en zones ?
Technique dans laquelle l’échantillon est contrait à se déplacer dans une phase solide, comme le papier filtre, la cellulose, ou d’un gel.
Quels sont les avantages d’une électrophorèse en zones ? (2)
1- On élimine largement l’agitation provoquée par la convection. 2- La technique requiert une faible quantité de matériel permettant ainsi la migration des composantes en bandes discrètes.
Qu’est-ce que l’électrophorèse sur gel ?
La séparation moléculaire est basée non seulement sur la mobilité électrophorétique, mais aussi sur le principe de filtration sur gel. Les gels d’électrophorèse retardent les molécules de taille plus grande.
Avec quel matière forme-t-on les gels d’électrophorèses habituellement ?
L’agarose et le polyacrylamide
Quelles sont les étapes pour une électrophorèse sur gel ?
1- Avant que le mélange réactionnel n’ait durci, il est coulé dans un récipient formé par deux plaques de verres et polymérisera en une couche mince de gel de quelques millimètres. 2- Les échantillons sont déposés dans des puits préformés au sommet du gel. 3- le tampon est le même dans les réservoirs du haut et du bas (PH-9 pour que toutes les protéines aient une charge négative). 4- Un courant continu de 100 à 200 volts parcourt le gel pendant la durée de la migration.
Dans quelle direction vont les protéines lors d’une électrophorèse ?
Vers le bas, anode (+)
Selon quelles propriétées physico-chimiques les protéines vont migrés dans le gel ?
Charge/masse
Pour avoir une meilleure finesse avec les bandes, que faudrait il faire au gel ?
Il faudrait qu’il soit le plus long possible.
Où se trouve le gel de concentration (stacking gel) et quelle est son utilité ?
Il se retrouve au dessus du gel de séparation et permet d’aplatir les bandes de protéines pour qu’elles commencent leur migration au même point de départ.
À quoi sert le gel de séparation (running gel) ?
À séparer les protéines et ainsi, les analyser.
Quel est le pH du gel de concentration ?
2 unités de moins que le gel de séparation
Par rapport à la vitesse, que se passe-t-il dans le gel de concentration ?
il augmente la résistance au courant électrique et ainsi, la vitesse. E=IR
Par rapport à la vitesse, que se passe-t-il dans le gel de concentration ?
On diminue la résistance au courant électrique et ainsi, la vitesse diminue.
De quoi dépendent les gels SDS PAGE ?
Du fait que certains savons ou détergents sont capables de dénaturer la structure d’une protéine.
Que veut dire SDS-PAGE ?
Sodium dodecyl sulfate PolyAcrylamide Gel Electrophoresis
Quel est le ratio de liaison du détergent aux acides aminés ?
Une molécule de détergent permet de lier 2 acides aminés
Qu’arrive-t-il donc au protéines dans le SDS PAGE ?
En présence de SDS, les protéines contenant des sous-unités sont désunies et la chaîne polypeptidique de chaque sous-unité adopte une conformation étendue (linéarisation).
Qu’arrive-t-il au rapport charge/masse dans le cas d’un gel SDS ?
La séparation électrophorétique du gel avec du SDS dépendra uniquement du phénomène de gel filtration par les pores du gel (donc de la masse)
Quels sont les deux grands avantages de l’utilisation de SDS ?
1- Il dissous les agrégats et les particules insolubles qui peuvent causer problèmes en bloquant les pores du gel. 2- La mobilité électrophorétique possède une relation directe avec le poids moléculaire.
Comment décrit on la relation entre la mobilité électrophorétique et le poids moléculaire ?
Linéaire avec le logarithme du poids moléculaire
Comment fait on pour visualiser les protéines ?
Coloration avec le bleu de Coomassie brillant, avec le nitrate d’argent, l’autoradiographie (pour les molécules marquées d’un isotope radioactif) ou immunobuvardage (anticorps).
