Manipulation des acides nucléiques Flashcards
Quels sont les deux polymères d’acides nucléiques ?
ADN et ARN
Quels sont les quatre nucléotides pour l’ADN ?
A, C, G et T
Quels sont les quatre nucléotides pour l’ARN ?
A, C, G et U
Quelle est la charge des polymères d’acide nucléique ?
Fortement négative
Pourquoi est-ce que l’ADN est très soluble dans l’eau ?
Molécule très chargée et peu de groupement hydrophobes
De quoi dépend la solubilité de l’ADN ?
Des concentrations salines et/ou la présence de substances organiques
Quelle est la façon habituelle de précipiter l’ADN pour le concentrer ou changer de tampon.
La précipitation à l’éthanol ou à l’isopropanol
En quoi consiste la précipitation à l’éthanol ?
On ajoute l’éthanol et de l’acétate de sodium pour éviter la séparation des brins d’ADN. La solution est mise à froid puis centrifugée. Des lavages subséquents permettront de retirer le sel qui aura aussi précipité.
Qu’est-ce que la méthode de partition de phase ?
Les acides nucléiques sont retrouvés dans la phase aqueuse et les protéines, pour la plupart dénaturées, partitionnent dans le phénol.
Comment faire une partition de phase ?
À pH 8, ajouter le phénol et extraire. Les traces de phénol sont éliminé acec du chloroforme immédiatement après.
Qu’est-ce que l’électrophorèse de l’ADN ?
On utilise des gels d’agarose dans lesquels on fait passer un courant qui attire les acides nucléiques et protéines. Puisque ces macromolécule pénètre difficilement dans le gel selon leur taille, il est possible de les dissocier. pH 8. Ainsi, les petits fragments migrent plus rapidement que les grands.
Qu’est-ce qu’on utilise dans le gel d’électrophorèse pour colorer les bandes d’ADN ?
Des colorants comme le bromure d’éthium.
Lorsque l’on veut purifier des acides nucléiques avec une échangeur d’ions, quel type d’échangeur doit on utiliser ?
Échanger anionique
Pourquoi utilise-t-on la filtration sur gel ?
Dessaler des oligonucléotides
Pour quel type de polymère de nucléotide utilise-t-on la chromatographie par affinité ?
Les ARNm
