Electroforesis Capilar Flashcards
Describa la técnica de electroforesis capilar
Es un método de separación de componentes de una muestra que presentan carga, al aplicarse un campo eléctrico externo migran de manera diferencial por la columna.
Las separación se basan en la relación carga/tamaño, donde a mayor relación, mayor velocidad de migración adquieren los analitos.
Mencione cómo migran los electrolitos de carga positiva, negativa y/o neutra en la EC
- Cationes: migran hacia el polo negativo, CÁTODO.
- Aniones: migran hacia el polo positivo, ÁNODO
- Neutros: migran con el flujo electroosmótico.
Cuáles son las ventajas de la EC
- Volúmenes pequeños, nL
- Velocidad de análisis
- Alta resolución
- Automatización
- Uso de distintos solventes
- Bajo consumo de solventes orgánicos
Mencione los componentes de un equipo de EC
- Recipientes con buffer (BGE)
- Electrodos de platino
- Fuente de poder
- Columna capilar, de sílice fundida
- Detector
- Sistema de registro
Describa los métodos de introducción de muestra en EC
- PRESIÓN POSITIVA = consiste en ejercer una presión externa sobre el recipiente con la muestra, de manera que ascinde por el capilar.
- PRESIÓN NEGATIVA = se genera un “vacío” sobre el recipiente con BGE, entonces la muestra ingresa al capilar.
- HIDRODINÁMICA = se pone en diferencia de altura el recipiente con la muestra y el recipiente con BGE, de manera que la muestra estando más elevada ingrese por diferencia al capilar.
- ELECTROCINÉTICA = se aplica una diferencia de potencial, generando el ingreso de la muestra al capilar. Esta técnica es un método selectivo, ya que depende de la movilidad de los electrolitos.
¿Qué es el método de detección online?
Describa la detección directa e indirecta
Este es un método que permite detectar los electrolitos a medida que se separan en la columna capilar, el mismo permite disminuir los ensanchamiento de banda por fenómenos extracolumnares, mejorando la eficiencia.
Detección directa: cuando el analito en estudio es capaz de absorber a cierta longitud de onda.
Detección indirecta: cuando el analito tiene baja o nula absortividad molar, entonces se introduce en el buffer un cromóforo de alta absorbancia; cuando la muestra pasa por el detector la Abs car a un valor base.
¿De qué depende la velocidad de migración de un ion en EC?
La velocidad de migración puede calcularse como:
Ve = µe . E = µe . V/L
Donde a su vez, la movilidad electroforética (µ) es directamente proporcional a la carga del analito e inversamente proporcional a los factores de retardo por rozamiento.
A su vez, la aplicación de un potencial elevado acorta los tiempos de migración.
V o F
Para iones que presentan igual tamaño, aquel que presente menor carga tiende a tener una mayor velocidad de migración.
FALSO.
Teniendo en cuenta la relación carga/tamaño, para iones cuyo tamaño es el mismo se verá afectada µe por la carga que posean. Siendo aquellos que presentan mayor carga, los que posean una mayor µe y por ende, velocidad de migración.
¿Qué factores modifican la eficiencia en EC? Mencione cómo mejoraría la resolución
Difusión longitudinal, siendo que solo hay en juego una sola fase no se consideran fenómenos de transferencia de masa ni la difusión de Eddy. En este caso para disiminuir el efecto de la difusión longitudinal, es recomendable aplicar potenciales elevados para mejorar la eficiencia, y por ende, la resolución.
¿Qué es el flujo electroosmótico (FEO) y cómo se genera?
Cuando el BGE posee un pH>2,5, los grupos silanoles de la capa interna del capilar se ionizan y se cargan negativamente. Por el principio de electroneutralidad, se genera una diferencia de cargas positivas en el seno de BGE.
Las cargas positivas son atraidas por los bordes internos del capilar generando una primera capa atraida electrostáticamente, a medida que nos alejamos de la pared del capilar, la fuerza eectrostática es menor y las cargas positivas están móviles en el seno del BGE, por lo que, al aplicar una diferencia de potencial estas se movilizan hacia el cátodo y, como estan solvatadas, arrastran al resto de la solución causando el flujo electroosmótico.
Definición: es un flujo generado por la aplicación de un campo eléctrico que mueve el fluido interno en dirección al mismo.
Considerando el FEO, cómo se calcula la velocidad real de un ion
Vt = (µe + µeo) . E
- µe: movilidad electroforética del ion
- µeo: movilidad electroforética de FEO
- E: campo eléctrico aplicado
