Duplicazione del DNA e Biotecnologie Flashcards
A cosa serve l’elicasi?
Serve a rompere i legami H presenti tra le due emieliche dei filamenti di DNA
Cosa serve per il sequenziamento del DNA (Sanger)?
-Dideossiribonucleotidi trifosfato marcati (DDNTP)
-Primer
-Deossiribonucleotidi trifosfato
-DNA polimerasi
Cosa serve nel processo della PCR?
Una DNA polimerasi batterica
Dimmi 4 situazioni in cui interviene la DNA ligasi?
Nei meccanismi di ricombinazione
Nell’unione dei frammenti di Okazaki
Nella sintesi del filamento corto di DNA
Unione di vettori plasmidici
Dimmi 4 cose sulla duplicazione del DNA
È semiconservativa
Entrambi i filamenti di DNA sono utilizzati come stampo
Il legame tra l’innesco a RNA e il relativo frammento di Okazaki è di tipo covalente
Da ogni origine si formano due forcelle
Chi scoprì la duplicazione del DNA?
Meselson e Stahl
Dimmi 4 cose sulla duplicazione del DNA
E’ semiconservativa
Avviene nella fase S del ciclo cellulare
Avviene in direzione 5’–>3’
E’ catalizzata da diversi enzimi, tra cui la DNA polimerasi
Quali sono gli enzimi della replicazione che necessitano di ATP?
Elicasi e ligasi
Quale reazione catalizza la DNA polimerasi?
Formazione di legami fosfodiesterici tra deossiribonucleotidi adiacenti
Qual è la differenza tra esonucleasi e endonucleasi?
Nucleasi=taglio di DNA
Esonucleasi=tagliano DNA partendo dall’estremità del filamento
Endonucleasi=possono tagliare il DNA da qualsiasi punto del filamento
Dimmi 3 cose sulla DNA polimerasi
Agisce solo in direzione 5’->3’
Aggiunge nucleotidi al carbonio 3’-OH
Per iniziare la sintesi necessita di un primer
Cos’è il primer?
E’ una breve sequenza di DNA che funge da innesco per la DNA polimerasi
Dimmi 3 cose sui plasmidi
Sono molecole circolari extra di DNA
Sono circolari
Grazie a essi, i batteri presentano resistenza agli antibiotici grazie al gene R
Cos’è un enzima di restrizione?
È una proteina che riconosce sequenze palindrome di DNA e applicano un taglio netto su quella specifica sequenza
Dimmi 2 cose sugli enzimi di restrizione
Il più conosciuto è l’EcoRI, che taglia il legame G/A
Riconoscono sequenze palindrome
Dimmi 4 OGM noti
Batterio che produce l’insulina
Soia resistente al glifosfato
Golden rise
Mais BF
Cos’è la libreria genomica?
Consiste nell’insieme di frammenti di DNA ottenuti dal genoma di un organismo e inseriti in opportuni vettori
Cos’è la clonazione?
È il processo artificiale secondo cui una cellula somatica di un organismo, inserita in una cellula uovo di un altro organismo, e poi asportata in un altro organismo, darà vita a un organismo uguale al primo organismo
Qual è la differenza tra plasmide e vettore plasmidico?
Il plasmide è DNA circolare che può dare caratteristiche extra
Il vettore plasmidico è un vettore modificato da utilizzare in laboratorio
Parlami dell’esperimento di Hershey e Chase
Essi misero inizialmente un isotopo 32 del P per gli acidi nucleici, l’isotopo 35 del S era per le proteine
Dimmi 4 cose sugli RFLP
Rilevano differenze tra genomi negli studi filogenetici
Possono individuare l’autore di un crimine
Possono eseguire test di paternità
Localizzano il gene responsabile di una malattia
Cos’è la trasduzione?
È il trasferimento di geni mediato da virus
Cosa fa la topoisomerasi?
É un enzima che taglia e unisce il DNA per regolarne il superavvolgimento
Quale enzima produce il DNA complementare da RNA?
Trascrittasi inversa
Dimmi 5 applicazioni della PCR
Ingegneria ricombinante
Test di paternitá
Identificazione di crimini
Analisi espressione genica
Diagnosi di infezioni molecolari (tamponi)
Cos’è la PCR?
È una tecnica di laboratorio che permette di amplificare una porzione di DNA, in modo da conoscere nucleotidi di partenza e nucleotidi terminali
Cos’è un OGM?
È un orgnamismo a cui è stato inserito un frammento di gene estraneo nel suo genoma.
Include organismi cisgenici (organismi che variano il genoma con un genoma di organismo della stessa specie) e transgenici (specie diversa)
Dimmi l’ordine delle proteine nella duplicazione
Elicasi
SSBP
Topoisomerasi
Primasi
DNA Polimerasi
Ligasi
Dimmi 4 vettori del DNA ricombinante
Vettori virali
Plasmidi
Cosmidi
Cromosomi artificiali
Dimmi le 2 funzione della RNA polimerasi
-forma legami esterici tra ribonucleotidi
-sintetizza una molecola di RNA partendo da uno stampo di DNA
Dimmi le DNA polimerasi presenti negli eucarioti e nei procarioti
Nei procarioti è presente la DNA polimerasi III
Negli eucarioti è presente la DNA polimerasi gamma e delta
Nei mitocondri è presente la DNA polimerasi y
