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Biomol ⭐️ > DNA recombinante > Flashcards

DNA recombinante Flashcards

1
Q

¿Cuáles son los 2 tipos de ADN que tiene una bacteria?

A
  • ADN cromosómico (escencial)
  • plásmido (no escencial)
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Q

¿Qué hace el plásmido?

A

Molécula de DNA que da características nuevas a las bacterias

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3
Q

Pasos para hacer una DNA recombinante

A
  1. Localizar el gen eucarionte que se desea transferir
  2. Corte del DNA con ezinmas de restricción
  3. Insterar gen en el otro segmento (plásmido) de una bacteria → apoyo de ligasa
  4. Introducir DNA recombinando en célula a proliferar
  5. Confirmar que la célula tiene las nuevas propiedades
  6. Multiplicar células
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4
Q

¿De dónde vienen las enzimas de restricción?

A

Bacterias

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5
Q

V/F

¿Todas las bacterias tienen sus propias enzimas de restricción?

A

Verdadero

Enzima de restricción → endonucleasas (rompen enlace fosfodiester)

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6
Q

¿Para que se usan la enzimas de restricción de manera natural?

A

Mecanismo de defensa de las bacterias frente a la entrada de ADN exógeno

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7
Q

Nomenclatura enzimas de restricción

A
  • 1er letra: género de la bacteria
  • 2a y 3a letra: especie de la bacteria
  • Última letra: cepa
  • Número romano: # de acuerdo a su cronologia en que se aislaron (descubrimiento)
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8
Q

¿Qué hace un bacteriófago en la bacteria?

A

Inyecta el ADN en la bacteria para que se pueda replicar, transcribir y traducir muchos virus

Ejemplo → Lamda

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9
Q

Componentes de las enzimas de restricción

A
  • Endonucleasa: corta enlaces fosfodiester (degrada ADN)
  • Metilasas: modifica ADN cromosómico de la bacteria para que no sea degradado (en adenina o citosina)

DNA bacteriófago no metilado → degradación

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10
Q

Tipos de corte hechos por las enzimas de restricción

A
  • Cohesivo: distintas posiciones (3 a 5 nt de diferencia)
  • Romo: simetrías entre ambas cadenas
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11
Q

Principios del DNA recombinante

A
  • Dos fuentes distintas de DNA tratadas con enzimas de restricción
  • Fragmentos complementarios
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12
Q

Vector

A

Molécula de dsDNA que pueden combinarse con un fragmento exógeno de DNA

dsDNA → DNA bicatenario

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13
Q

Tipos de vector

A
  • Clonación: almacena secuencias, se obtienen grandes cantidades de DNA
  • Expresión: produce transcrito o proteínas
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14
Q

Ejemplos de vectores de clonación

A
  • Plásmidos
  • Bacteriófagos
  • Fagémidos
  • Cósmidos
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15
Q

Ejemplor de vectores de expresión

A
  • Plásmidos
  • Bacteriófagos
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16
Q

Elementos de un vector de clonación

A
  • Origen de replicación
  • Sitio múltiple de clonación: secuencia reconocida por e. de restricción → agregan DNA complementarios
  • Marcador de selección
17
Q

Elementos de un vector de expresión

A
  • Origen de replicación
  • Sitio múltiple de clonación
  • Marcador de selección
  • Promotor
  • IRES (sitio de entrada a ribosoma)
  • Secuencia de poliA
18
Q

Marcador de selección

A

Nos permite conocer si el DNA se ha recombinado con éxito

  • Resistencia antibióticos (si el DNA sigue siendo 100% de bacteria → muerte)
  • Proteínas verde fluorecente
  • Gen lacZ- β-galactosidasa (solo células con DNA recombinantes lo expresan)

β-galactosidasa rompe X-Gal → compuesto se vuelv azul

19
Q

Plásmido

A
  • dsDNA y circular
  • Se separa del DNA cromosómico
  • Se obtiene de bacterias y levaduras

Contiene: origen de replicación + AMPR + DNA exógeno

AMPR → Ampicilina Resistencia

20
Q

Bacteriófago

A
  • Virus que infecta a bacteria
  • Se modifican geneticamente
  • Elimina genes innecesarios para replicación y empaquetamiento
21
Q

Cósmido

A

Vector híbrido

  • Plásmido (gen de resistencia ab + sitio de origen)
  • Bacteriófago (extremo cos → formación de círculo a partir de molécula lineal)
22
Q

Fagémidos

A
  • Plásmido al que se le incorpora el origen de replicacion de un bacteriofago
  • No tienen sitios cos
23
Q

Tipo de enzima de restricción utilizada

A

II → busca secuencia palindrómica y el sitio de reconocimiento es igual que el de corte

Se buscan cortes cohesivos, no romo

24
Q

Cromosomas artificiales

A
  • BAC (bacterias)
  • YAC (levaduras)

DNA muy grande

25
Q

El gen de resistencia antibioticos puede ser utilizado como marcador de ……….

A

Selección de cx. transformadas

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