div

Question 1

cDNA Datenbank

Answer 1

• DNA, die mittels der Reverse Transkriptase aus RNA synthetisiert wurde
• nicht natürlich
• keine Introns, da auf Basis prozessierter RNA erstellt
• Verfielfältigung über PCR
• Sammlung von vielen cDNA, die aus mRNA einer bestimmten Zelle oder Gewebes isoliert wurde –> Transkriptom

Question 2

DNA-Bausteine und chemische Struktur

Answer 2

DNA ist Polymer aus Nukleotiden

Nukleotid = Base + Zucker + Phosphat

Basen: Purin abkömlinge: Adenin und Guanin

Pyrimidinabkömmlinge: Cytosin und Thymin (Uracil)

AT=2 H-Brücken

CG = 3 H-Brücken

Zucker: Pentosen - Desoxyribose (DNA) und Ribose (RNA)

Esterbindung des Zucker zu Phosphat über 3’ oder 5’

Question 3

DNA als Träger der Erbsubstanz (Entdeckung)

Answer 3

1944 Oswald Avery, Colin Mc Leod & MacLyn McCarty

versuche von Griffith verfeinert

R-Stamm

S-Stamm

Gemisch –> Proteine oder DNA

das lösten die obigen

Question 4

DNA-Konformationen

Answer 4

B-Form: physiologisch wichtigste, 10 Bp pro Windung, 3,4 nm, rechtsgewunden 2nm, hydratisiert, große und kleine Furche

A-Form: dehydriert, kompaktere Form, tiefe große Furche, flache kleine Furche, DNA-RNA-Hybride

Z-Form: linksgängig, Phosphatgruppen im ZickZack

Question 5

De- und Renaturierung der der DNA

Answer 5

irreversible Zerstörung vs rerversibles Aufbrechen der DNA-Doppelstränge (Wasserstoffbrückenbindungen)

chemisch oder thermisch

Renaturierung: Zusammenführen aufgetrennter Komplementärstränge

langsames Abkühlen

=Hybridisierung

Question 6

PCR

Polymerase Ketten Reaktion

Answer 6

Denaturierung 96 Grad

Abkühlen auf 55 bis 65 Grad

Primer binden ans 3’ Ende

Polymerase Bindung und DNA Synthese (72 Grad)

Vorgang wird wiederholt bis gewünschte Menge DNA Material

Question 7

Real Time PCR

Answer 7

zusätzliche beobachtung des fortschritts durch fluoresenz in echtzeit

Question 8

Enhancer

Answer 8

= Transkriptionsverstärker

etwa 800 Bp

regulieren bzw. fördern Initiation der Transkription

beeinflussen Anlagerung des Traskriptionsfaktors an Promoter

räumliche Orientierung des Enhancers zum Promoter entscheidend –> Supercoil

Question 9

Nachweis RNA Expression

Answer 9

Northern Blot

Gelelektrophorese, Blottiga uf Membran, markieren mit Sonden

In-situ Hybridisierung

mit künstlich hergestellter Sonde aus Nucleinsäuren

ggfs FISH

Question 10

DNA-Chip

Answer 10

Genmaterial auf Glasplatte fixiert

Hybridisierung mit fluoreszenzmarkierten cRNA/ cDNA

Detektion des Fluoreszenzsignal via Laser

Question 11

Aufbau eukaryotischer Gene

Answer 11

Enhancer, Promotoren, Introns, Exons

Start- und Stopcodons

URF und ORF (in Exon)