Diagnostic moléculaire

Question 1

Les analyses du laboratoire de diagnostic moléculaire sont basées sur quelle technique?

Answer 1

technique d’amplification des acides nucléiques par PCR

Question 2

Le diagnostic moléculaire est l’interrogation du matériel génétique présent dans un échantillon biologique pour:

Answer 2

• évaluer la prédisposition de développer une maladie génétique
• identifier le Type de tumeur et cancer
• évaluer pronostic pour un cancer
• identifier le meilleur traitement pour une tumeur
• suivre l’évolution du TRT et identifier les rechutes
• determiner la présence d’un pathogene

Question 3

quels sont les types d’outil disponible en diagnostic moléculaire?

Answer 3

• PCR (conventional et en temps réel)
• FISH et karyotype
• Séquencage

Question 4

quel est la majeure différence entre le PCR conventionnelle et en temps réel?

Answer 4

le PCR en temps réel est quantitatif

Question 5

quelle sorte de PCR peut apporter des informations sur la présence de mutations?

Answer 5

PCR en temps réel

Question 6

quels sont les 4 grandes étapes du PCR en temps réel?

Answer 6

1. Des primer et une probe sont mis ensemble dans le tube (Lorsque que quencher et rapporteur sont sur le probe ensemble aucune fluorescence est émise)
2. Les brins d’ADN sont allonger après les primer
3. Lorsque le brin s’approche du probe, la polymerase clive le probe libérant lamolécule rapporteuse ce qui émet de la fluorescence
4. Fluorescence est émise et pirse en note pour faire une courbe

Question 7

Comment est-ce que le FISH et le karyotype fonctionne?

Answer 7

FISH: chromosomes sont exposés a une molécule d’ADN qui est lié avec une molécule fluorescente (Probe), Lorsque le probe se lie il émet de la fluorescence nous démontrant que la séquence d’ADN est présente
Karyotype: regarde l’apparence des chromosomes voir s’ils sont normal

Question 8

Pourquoi est-ce qu’il serait mieux d’utiliser un PCR à la place du FISH ou karyotype lorsqu’on est à la recherche D’une mutation précise?

Answer 8

Parce-que le PCR est plus sensible, s’il ya 1/100000 qui ont la mutation on va être capable de l’observer en raison de l’amplification whereas avec le fish ou le karytype il faudrait passer chaque cellule une après l’autre pour l’observer

Question 9

quels sont les 6 étapes pré-analytiques du diagnostic moléculaire?

Answer 9

1. obtient specimen
2. fractionnement cellulaire si nécessaire
3. lyse des cellules et purification des acides nucléiques
4. dosage
5. amplification
6. detection et analyse

Question 10

quels sont les 4 exigences d’une analyse en biologie moléculaire ?

Answer 10

• sensible
• spécifique
• reproductible
• robuste

Question 11

comment est-ce qu’on peut s’assurer de la sensibilité d’une analyse de biologie moléculaire?

Answer 11

en mettant un contrôle positif près de la limite de détection du test

Question 12

comment est-ce qu’on peut s’assurer de la spécificité d’un analyse en biologie moléculaire?

Answer 12

mettre des contrôles négatifs et des contrôles de contamination

Question 13

quels sont les moyens employable pour s’assurer de la robustesse d’une analyse?

Answer 13

Mesure de sensibilité à des changements potentiels

Question 14

quels sont les moyens pour s’assurer de la reproductibilité d’une analyse?

Answer 14

Suivre les contrôles sur plusieurs analyses avec des indicateurs quantifiable et avoir des procédures écrites qui doivent être suivie

Question 15

quels sont les 5 moyens de réduire les risques de contamination lors d’un PCR?

Answer 15

1. zone de confinement avec ventilation adéquate avant et après le PCR
2. Port de gants en tout temps
3. utiliser du matériel jetable
4. utiliser des aliquotes
5. Nettoyer régulièrement

Question 16

que sont les néoplasies hématologiques ?

Answer 16

des maladies malignes qui sont dérivés des cellules myéloïdes ou lymphoïdes

Question 17

quels sont les 3 sortes de néoplasies hématologiques vue dans le cadre du cours?

Answer 17

• leucemie myeloide chronique
• leucémie myéloïde aigue
• néoplasies myeloproliferatives

Question 18

La leucémie myéloïde chronique est causer par la translocation de quels chromosomes? comment est-ce que ça s’Appelle?

Answer 18

9 et 22, le chromosome de Philadelphie

Question 19

lors de la leucémie myéloïde chronique, la fusion du gene BCR avec le gel ABL cause quoi?

Answer 19

une tyrosine kinase qui est toujours actives ce qui promouvoir la proliferation cellulaire et réprime l’apoptose des cellules

Question 20

comment pouvons nous suivre l’efficacité des traitements contre la LMC?

Answer 20

en mesurant les niveaux de BCR-ABL

Question 21

Pourquoi est-ce que lorsqu’on suit le niveau de BCR-ABL en PCR on utilise les ARNm et non les ADN?

Answer 21

Parce que dans l’ADN il y a beaucoup d’exon, donc le réarrangement des chromosomes peut être fait un petit peu n’importe ou, dans les ARNm il n’y a pas d’exonération donc il est facile de le repérer

Question 22

la mutation V617F de la JAK2 est associé à quels trois syndromes myéloproliferatifs?

Answer 22

1. polycythémie vrai
2. thrombocythemie essentielle
3. myelofibrose

Question 23

La mutation v617F de la protéine JAK2 cause quoi?

Answer 23

une maladie des cellules souches hématopoïétiques dans la moelle osseuse

Question 24

comment marche la détection par PCR allèle-specifique ?

Answer 24

Nous avons deux sets de primers, un set “muté” et un set non, les derniers nucleotides de ces primers sont soit le nt muté ou pas. on expose ensuite les allèles a ces deux différentes conditions. lorsque le primer muté est introduit avec les allèles et retrouve l’allele muté il se lie avec ce dernier mais pas avec le WT, l’allele muté sur donc amplifié. Meme chose pour le primer WT il amplifiera seulement l’allele WT. Ensuite nous faisons migrer dans deux différents puits ces deux différentes conditions et observons la position de la bande

Question 25

quel est la grande différence entre la leucémie myéloïde chronique et aigue?

Answer 25

dans la aigue les cellules souches et progenitrices n’ont pas le temps de se différencier il y’a donc un manque de cellule immunitaire dans le sang

Question 26

quel est l’avantage du séquence à haut débit lorsqu’on parle d’une tumeur?

Answer 26

on peut faire une analyse pour plusieurs biomarqueurs (mutations)

Question 27

pourquoi est-ce qu’on effectue une analyse de chimisme pré et post greffe?

Answer 27

Pré: pour repère des allèles qui sont informatives, qui ont différentes mutations
Post: utilise les allèles trouvés pré-greffe pour distinguer les ADNs du donneur et receveur puisque s’il y a beaucoup d’ADN du receveur la maladie risque fortement de revenir, si non la maladie est toujours “disparu”