détection et purification-protéine

Question 1

Quel est l’intérêt de purifier les protéines? 6

Answer 1

Recherche fondamentale:

• structure/fonction
• inhibiteurs de réactions
• modifier l’Activité/génie génétiques
• préparer des Ac

Question 2

Quels sont les avantages de l’expression protéique in vitro 4

Answer 2

• pas de clonage nécessaire
• rapide (1-4h)
• plrs expression simultanés
• production des prot. difficiles ou toxiques

Question 3

Quels sont les désavantages de l’expression protéiques in vitro?

Answer 3

cout
instable
faible quantité
cDNA pour les protéines eucaryote

Question 4

Pourquoi ajoute-t-on un Tag au protéines exprimer dans les bactéries?

Answer 4

facilie la purification

Question 5

Quels sont les désavantage des méthodes de lyse physique?

Answer 5

Possibilité de dénaturation

Question 6

Quels sont les avantage des méthodes de lyse chimique?

Answer 6

moins de chance de dégradation

volume plus large

Question 7

Pourquoi le sulfate d’ammonium est-il un bon précipitant?/

Answer 7

Très haute teneur ionique

Question 8

Qu’est-ce qu’un kosmotrope?

Answer 8

• ion stabilisant
• concentration élevé permet une précipitation stable
• ex:sulfate d’ammonium

Question 9

Qu’est-ce qu’un chaotrope?

Answer 9

• ion dénaturant
• concentration élevée donne une perte de la structure quaternaire, tertiaire et secondaire
• ex:urée

Question 10

Quel est l’avantage et le désavantage de l’ultrafiltration

Answer 10

plus vite que la dialyse, mais on risque de bloquer les filtres

Question 11

Qu’est-ce qui détermine la charge des protéines?

Answer 11

la séquence en AA

le pH

Question 12

Vrai ou faux:
Dans la chromatographie aux interactions hydrophobes, comme dans la chromatographie échangeuse d’ion, on part d’une faible concentration vers une haute concentration

Answer 12

Faux: dans la la chromatographie aux interactions hydrophobes, ont a un radient décroissant

Question 13

Sur quel principe se base la chromatographie d’affinité?

Answer 13

sur des liaisons spécifiques d’une protéine pour un ligand

Question 14

Comment peut-on mesurer l’activité protéique?

Answer 14

Par l,activité enzymatique
Liaison de la protéine
Définition d’un unité d’activité

Question 15

Quels sont les charactéristiques d’un Immunobavardage? (western)

Answer 15

Permet la détection d’une protéine spécifique
• Interactions protéine-anticorps
– Faut avoir un anticorps contre la protéine
– Interaction spécifique
• Quantitative
• Méthodes de détection colorimétrique,
fluorimétrique, chimioluminescente,
radioactive

Question 16

Comment peut-on stabiliser les protéines avant et après la purification? 7

Answer 16

-solutions tamponnés (maintient pH)
• Réduire la température 
• Travailler rapidement
• Éviter l’agitation et les dénaturant
• Inhibition des protéases 
• Conservation: -70C, -20C, 4C, lyophilisation
• Agents stabilisants
(Glycerol, sucres et PEG)
(BSA stabilise les interactions protéineprotéine)