analyse de l'ARN Flashcards
Différence entre ARN des pro et de eucaryotes 4
- pro:instable/eu:stable
- pro:polycistronique/eu:monoicys.
- eu: coiffe en 5’, queue poly A, épissage
Vrai ou faux:
un opéron contient 1 promoteur et 1 séquence RBS
Faux, chaque gène à son propre RBS
Quelle proportion représente les ARNm?
1-5%
Quelles méthodes peuvent être utilisé pour analyser l’ARN et que mesurent-elles?
Électrophorèse(visualisation)
Spectophotomètre (concentration)
Fluorescence (Marquage/cytomètre)
Radioactivité (marquage/détection)
En spectrométrie, quel sera le ratio A260/A280 pour l’ARN
2.0 (>ADN)
Quels sont les 5 étapes du Northern?
- extraction
- électrophorèse sur gel dénaturant
- transfert sur membrane
- hybridation
- révélation
Quels sont les applications du Northern pour la détection (3) et la quantifiation (3)
- présence des molec. d’ARN spécifique
- localisation et distribution
- détecter différentes formes d’épissages
- déterminer l’abondance
- Mesurer l’expression
- Comparer l’expression
Sur quoi se base la méthode protection à la RNase
on hybride les ARN cherchés à une sonde puis ajout de RNase, si non dégrader=protéger.
Quel est l’avantage de la RT-PCR?
Permet de détecter lARN avec moins de produit de départ
Quelles sont les différences entre les RT à 1 ou 2 étapes
1 étape: amorce spécifique, permet de tester 1 seul gène
2 étapes: amorces aléatoires puis spécifiques. permet de tester plrs gènes
Quelle méthode est la plus puissante, sensible et quantitative pour la détection du niveau d’ARN
la q-RT-PCR (PCR en temps réel)
Quels sont les applications de CRISPR chez les bactéries
permet le typage des souches (évolution)
Permet de dater la souche
Permet de vacciner des souches utiles en industrie
Quel est la séquence cible de CRISPR
un protospacer de 20 bases et un PAM (NGG) qui est abondant dans l’ADN (permet de couper où on veut)
Quels sont les applicatons de CRISPR chez l’humain 6
- Criblage pour perte de fonction (tumeur)
- Réparation du génome
- Dégradation du génome
- Répression génomique (oncogène/récepteur pathogène)
- Activation du génome
- Localisation (fluorescence)
Quel est un danger de CRISPR?
Fait une coupure hors-cible 4X10^-22
