Cours 6 Flashcards
Transfert vertical vs transfert horizontal
vertical : entre un parent et sa descendance (après divisn)
horizontal: entre deux organismes distincts
pneumocoques sauvages (FORME S)
- entourés de capsules de polysaccharides
- Virulents
- Forment sur un milieu solide des colonies dont le contour est lisse
Pneumocoques mutant (FORME R)
-sans capsule
- non virulent
- colonie à contour dentelé sur colonie
Expérience de griffith: description
des souris inoculés de pneumocoques sauvage mort et de pneumocoques mutant sont retrouvés morts et on retrouve chez eux des traces de pneumocoques sauvages vivants
Expérience de griffith: transformation
Un agent transformant de la pneumocoque sauvage mort a pu transformé la pneumocoque mutant vivant en forme S
C’est quoi l’agent de transformation qui découle d’expérience de Griffith?et qui?
ADN
AVERY a démontré que c’est le seul élément qui a pu transformé les bactéries
les lipides et les protéines they could never
Qu’a-t-on conclu de l’ADN dans l’expérience de Griffith
ADN = susbstance hérédité
On pensait que ctai protéine pcq plus complexe
C’est quoi la transformation et comment?
Bactérie absorbe fragemnt ADN nu libéré dans le milieu d’une bactérie donneur
souvent par la lyse accidentelle ou provoquée
Fragments ADN absorbé dans la bactérie réceptrice pour produire des transformants (recombinants bactériens)
C’est quoi la compétence bactérienne
Aptitude de certaines bactéries à absorber des fragments ADN libre et de les incorporer dans son génome
Quels sont les facteurs de compétences (élément que la bactérie doit avoir pour etre compétent)
récepteurs, nucléases, protéines liant l’ADN simple brin
Paramètres pouvant influencer la compétence (4)
- Espèce bactérienne
- Phase de croissance
- Milieux de culture
- Changement rapide de température
Procédure étape par étape de la transformation bactérienne
- Absorption de ADN (se lie au récepteur)
- Entrée un seul brin (lautre détruit par nucléase) et protégé par les protéines liant l’ADN dans le cytoplasme et guide vers l’adn BACTÉRIEN
- Recombinaison homologue (FAUT QUE CA SOIT HOMOLOGUE)
- Bactérie transformée (transformant ou recombinant)
Transformation avec un plasmide
Plasmide rentre à part entière
Comment rendre par génie génétique des bactéries non transformable en transformation?
- Traitement au CaCl₂ + choc thermique :
- Le chlorure de calcium rend la membrane plus perméable.
- Ensuite, on chauffe soudainement → cela ouvre temporairement la paroi → l’ADN entre.
- -Entrée forcée par la déstabilisation de la paroi par un choc électrique
(électroporation) (crée de pores)
génie génétique: clonage
On peut prendre de l’ADN d’une autre espèce, le mettre dans un plasmide (petit ADN circulaire), puis introduire ce plasmide dans la bactérie transformée.
→ Résultat : la bactérie produit des protéines qu’elle ne produisait pas avant (comme de l’insuline humaine, par exemple).
l’expérience de J. Lederberg et E. Tatum:
Mélange de deux souches bactérienne auxotrophe ayant des besoins et des capacités de synthèse compatibles
Dans le témoin où pas de mélange: pas de croissange dans un milieu pauvre
mais dans le mélange: croissance dans un milieu pauvre -> bactérie prototrophe
prouve donc que cette nouvelle colonie de type prototrophe sont des bactéries recombinants résultant probabelemnt d’un échange de matériel génétique entre les deux souches bactérinnes
Caractéristiques essentielles
de la conjugaison bactérienne
- Contact physique
- Facteur de fertilité dans bactéries donneuse
- Transfert linéaire de ADN (plasmide ou chromosome) de la bactérie donneuse dans la bactérie receveuse F-
Nécessite un contact physique entre les bactéries: expérience et par qui
comment le contact physique se fait
B. Davis 1950
- Un contact physique entre les deux souches est essentiel pour produire
des bactéries prototrophes (recombinants) (Expérience du tube en U)
Par le pillus sexuel
Facteur de fertilité des bactéries receveuses
F- sans facteur de fertilité
Bactéries donneuses F+
et le devenu de la descendance
Lors d’un croisement F+ x F-, les descendants ne sont que rarement modifiés dans leur auxotrophie, mais les souches F- deviennent fréquemment F+
Transfert de plasmide
Facteur F est sur un plasmide
Bactéries donneuses: Hfr (haute fréquence
de recombinants)
- Transfert des gènes chromosomique et recombinaison bactérienne
- Transforme pas les bactéries receveuse en F+
- Le facteur de fertilité F est intégré dans le
chromosome bactérien à des sites spécifiques
Bactéries donneuses F’
- ## Plasmide F’: le plasmide fait une erreur d’excision et emporte une portion du chromosome (emporte avec lui gène ex HFR), génétiquement différent du plasmide F
Origine de transfert
Le chromosome circulaire (Hfr) ou le plasmide F ou F’ de la donneuse est
transféré dans la receveuse F- de façon linéaire à partir d’un point spécifique
appelé origine de transfert [
C’est quoi le plasmide F
Type de plasmide qui a le facteur de fertibilité
petite molécule d’ADN bicaténaire circulaire de 95-100 kpb,
extra ou intrachomosomique (épisome)
autoréplicable
autotransférable