Cours # 6 Flashcards
L’activité enzymatique est influencé par deux groupements de choses. nomme les
- des propriétés spécifiques à l’enzyme
- des effets non spécifique de l’enzyme
Donne 3 exemples de propriétés spécifique à l’enzyme qui peuvent affecter son activité
- concentration du substrat
- activateur
- inhibiteur
Donne 5 exemples d’effet non spécifique à l’enzyme qui peuvent affecter son activité
- des sels et tampons
- pH
- température
- autre protéine
- force ionique
Généralement, dans un organisme, toutes les conditions sont arrangé d’une façon pour permettre à l’enzyme de faire quoi?
Performer à son meilleur (Activité maximale)
Dessine l’équation de michealis-menten
V = Vmax* [S]/ (km + [S])
Écrit l’équation d’une enzyme avec son substrat
k1 k2
E + S ⇄ ES –> P + E
k-1
Dans l’équation d’une enzyme avec son substrat, donne un autre nom plus scientifique à la constante K2
Kcat
Que signifie le Kcat
elle représente la constante de vitesse qui est égale au nombre de molécules de substrat transformées par chaque molécule d’enzyme par seconde (turnover number)
Est ce que Vmax est une constante?
Non car elle dépend de la concentration d’enzyme
Le Km signifie quoi?
l’affinité du substrat pour l’enzyme
Complète la phrase:
Le Km est la concentration en substrat nécessaire pour …
concentration en substrat nécessaire pour saturer la moitié des sites catalytiques de l’enzyme)
Explique la courbe du graphique quand on du substrat en XS
yalla shed 7elak
Km élevé siginifie quoi?
une grande concentration de
substrat est nécessaire pour atteindre la moitié de la vitesse maximale de réaction et donc, que l’enzyme possède une affinité relativement faible pour le substrat
Pourquoi est-il important que la vitesse de réaction soit linéaire pendant la période d’incubation utilisée?
pour détecter convenablement la formation du produit de la réaction SLIDE 10 SI C PAS GOOD
Quels sont les trois types d’inhibiteurs?
compétitifs, incompétitifs et non-compétitifs
Qu’est ce qu’un inhibiteur compétitif?
Les inhibiteurs compétitifs sont en compétition avec le substrat pour fixer le site actif de l’enzyme. Ils empêchent ainsi la liaison entre le substrat et l’enzyme
Dans un inhibiteur compétitif, décrit la valeur de Km et du Vmax
Toutefois, si le substrat se fixe à une enzyme, la réaction se fait normalement, aussi vite qu’en absence
d’inhibiteur. Par conséquent, le Vmax n’est pas
modifié par la présence de l’inhibiteur. Le Km, quant à lui, augmente
Qu’est ce qu’un inhibiteur incompétitif?
Les inhibiteurs incompétitifs se lient au complexe Enzyme-Substrat (ES) mais pas à l’enzyme libre (E).
Dans un inhibiteur incompétitif, décrit la valeur de Km et du Vmax
Dans ce cas ils diminuent la vitesse de la réaction puisque les complexes ES sont inhibés. Toutefois, en bloquant la réaction, ils augmentent l’affinité
apparente du substrat pour l’enzyme. Ainsi, le Vmax ainsi que le Km diminuent.
Qu’est ce qu’un inhibiteur non-compétitif?
Les inhibiteurs non-compétitifs se lient à l’enzyme libre ainsi qu’au complexe EnzymeSubstrat.
Dans un inhibiteur non-compétitif, décrit la valeur de Km et du Vmax
la fixation entre le substrat et l’enzyme n’est pas affectée par la présence de l’inhibiteur. Toutefois, la vitesse de la réaction est diminuée. Ainsi, le Km reste le même et le Vmax diminue.
Quel est la conséquence d’une accumulation de produit dans une réaction enzymatique?
la vitesse de la réaction peut être compromise par la réaction de retour (retro-inhibition)
Que pouvons nous faire pour empêcher la réaction inverse (5)
- Mesurer la réaction enzymatique pour une courte durée afin de minimiser l’accumulation du produit
- L’utilisation de hautes concentrations de substrat
- Utiliser des pH non physiologiques (basiques si le produit de la réaction est un proton) pour enlever le proton et déplacer la réaction dans la direction de la formation du produit
- L’utilisation de méthodes très sensibles pour détecter le produit afin de minimiser sa concentration
- l’inhibition par le substrat à des hautes concentrations peut aussi être due à la formation d’interactions non appropriées au site actif et qui mènent à l’inhibition de l’activité enzymatique
est ce que les enzymes fonctionnent tous au maximum au pH physiologique ?
Non, la valeur maximale de l’activité de certaines enzymes peut être très loin du pH
physiologique
Explique une utilité qui peut être exploité dans un tampon dans une réaction enzymatique?
Certains tampons peuvent agir comme inhibiteurs.
Donne un exemple où un tampon agi comme un inhibiteur
le phosphate et certaines tampons anioniques, possédant des charges multiples tel que le citrate, compétitionnent avec des substrats possédant des charges négatives pour lier le site actif
Donne une relation quantitative entre la température et la concentration
La vitesse d’une réaction augmente en règle
générale d ’ un facteur 2 pour chaque
augmentation de 10°C
Plus la période d’incubation est courte, plus la
température apparente de l ’ activité
maximale peut être élevée. Pourquoi?
Car il y a moins de temps pour que l’enzyme se dénature
Quel est la température physiologique?
37°C
Quels sont les deux façons de mesurer l’activité enzymatique?
- des méthodes discontinues (flot arrêté)
- des méthodes continues
Explique très généralement la méthode discontinue
L’enzyme est incubé avec ses substrats pendant une certaine période de temps et la réaction est ensuite arrêtée
Pour vérifier si la réaction est linéaire qu’est il essentiel de faire?
Il est essentiel de faire plusieurs incubations à des temps différents afin de vérifier si la réaction est linéaire
Comment on provoque la discontinuité dans la méthode discontinue?
la réaction est arrêtée par une méthode qui provoque la dénaturation instantanée de l’enzyme
donne une méthode pour arrêter une réaction enzymatique
- la précipitation par acide trichloracétique- perchlorique
- dénaturation thermique de l’enzyme
- on peut également utiliser le SDS pour dénaturer l’enzyme
- des méthodes non dénaturantes qui
inactivent l’enzyme
Donne trois méthodes pour détecter les produits d’une réaction enzymatique
- convertir le produit directement ou indirectement en un autre produit qui lui est plus facile à détecter
- spectrophotométrie
- fluorométrie
la détection du produit final dépend de
la production de ….
d’un chromatophore ou fluorophore important et qui est facile à détecter
Explique la détection directe du produit
un des produits de la réaction enzymatique absorbe la
lumière
Explique la détection indirecte du produit
ajoute une enzyme qui utilise le produit de la réaction
pour former du NADH par couplage avec une autre réaction
