Cours # 3 Flashcards
Qu’elle est l’équation de la force électrique sur un ion q et un champ électrique E?
F electrique = qE
La migration électrophorétique de l’ion à travers la solution est opposée par quelle force?
force de friction
Qu’elle est la formule de la force de friction?
F friction = Vf
Que se passe-t-il au protéine à leur point isoélectrique dans un gel?
une mobilité électrophorétique nulle car q = 0
Qu’elle est la méthode d’électrophorèse la plus couramment utilisée?
l’électrophorèse en zones
Explique l’électrophorèse en zones
l’échantillon est contraint de se déplacer en zone
Qu’elles sont les avantages de l’électrophorèse en zone?
1) on élimine largement l’agitation provoquée par la convection
2) requiert une quantité faible de matériel permettant ainsi la migration des composantes en bandes discrètes.
Qu’elles sont les deux types de gel les plus utilisé?
agarose et polyacrylamide
qu’elle est la différence entre le gel de filtration et l’electrophorèse?
-les gels d’électrophorèse retardent les molécules de taille plus grande (ce qui est l’inverse de la filtration par gel)
Que signifie PAGE
PolyAcrylamide Gel Electrophoresis
Qu’elles sont les étapes dans l’utilisation d’un gel?
1) on coule le gel entre deux vitres et on laisse polymériser
2) On dépose les échantillons dans le gel
3) On coule le tampon pour recouvrir les plaques contenant le gel (pH - 9 pour que toutes les charges soit négatives)
4) On fait passer un courant de 100 à 200 V (ils vont migrer vers l’anode + selon leur charge/masse ration)
Que pouvons-nous faire au gel pour améliorer la finess et la résolution?
l’utilisation d’un gel plus long
Nomme un moyen populaire d’améliorer la résolution?
l’utilisation 2 gel dans des tampons différents
Qu’elles sont les deux gels utilisés pour améliorer la résolution?
Gel de concentration (stacking gel)
Gel de séparation (running gel)
le tampon du gel de séparation et du gel de concentration diffère en général de combien de pH?
2– Le pH du tampon de gel de concentration a un pH de 2 unités plus petit que le tampon du gel de séparation
Explique en détail l’utilisation du stacking gel?
le stacking gel est fait d’un tampon de 6.8 de pH. Donc, la glycine à une charge neutre donc elle est immobile dans le gel. Des ions CL- vont pousser les protéines contre la glycine. Cela assure que les protéines sont tus au même niveau. Puis, quand il touche le gel de séparation, le pH de 9 permet à la glycine de regagner sa charge négative ce qui permet la migration des protéines au même niveau
Qu’elle est le but derrière la réduction de la taille des bandes?
la réduction dans les bandes macromoléculaires en rentrant dans le gel de séparation augmente de façon très significative la résolution
Qu’est ce qu’un détergent d’un point de vue protéique?
Substance capable de dénaturer une protéine
Nomme un détergent? Donne le nom complet et non juste l’acronyme
SDS = Sodium Dodecyl Sulfate
Qu’elle est le ratio de liaison détergent-protéine?
1 molécule de détergent pour 2 résidus d’acides aminés
Nomme deux fonctions du SDS
- premet la dénaturation linaire
- permet une même charge pour les protéines
Le gel SDS-PAGE possède deux grands avantages par rapport à l’électrophorèse ordinaire. Lesquels?
- Permet la dissolution des agrégats de protéine
- La mobilité électrophorétique possède une relation directe avec le poids moléculaire
Qu’elles sont les trois approche de détection utilisé?
- bleu de coomassie
- nitrate d’argent
- autoradiographie si les protéines sont marquées avec des isotopes
