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Cours # 2 Flashcards

1
Q

Qu’elles sont les deux phases de la chromatographie?

A

La phase stationnaire (phase où les substances sont séparer) et mobile (substance à séparer)

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2
Q

Nomme les propriétés communément utilisées pour effectuer le fractionnement

A
  1. taille (chromatographie par gel-filtration)
  2. Charge (chromatographie par échangeur d’ion)
  3. Spécificité (chromatographie d’affinité)
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3
Q

L’affinité avec laquelle une protéine se lie à un échangeur d’ions dépend de deux choses. Nomme-les

A
  1. Dépend du pH car il affecte la charge net
  2. Dépend de la nature et concentration des autres ions en concentration qui peuvent compétitionner pour les sites de liaison des échangeurs d’ions
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4
Q

les échangeurs utilisés en chromatographie des protéines dépendent de deux caractéristiques importantes:

A
  1. Nature de la matrice
  2. Des groupements fonctionnels qui vont participer au liaison de la protéine à la phase stationnaire.
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5
Q

Qu’est ce qu’une matrice

A

des polymères insolubles qui sont en forme de billes appelé résine

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6
Q

Qu’elle est le polymère le plus utilisé?

A

La cellulose

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7
Q

L’échangeur d’ion fonctionne grâce à quel type d’interaction?

A

Interaction electrostatique

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8
Q

Qu’elles sont les deux classes d’échangeur?

A

Échangeur anionique (charge positif)
Échangeur cationique (charge négatif)

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9
Q

Explique la différence entre un échangeur fort et un échangeur faible?

A

Un échangeur fort est un échangeur qui ne vari pas de charge facilement. Par exemple, il va garder la même charge. Ex: meme charge pour pH de 3-10

Échangeur faible peut seulement avoir une charge dans une faible variation de pH.

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10
Q

Un QAE c’est quoi? tu dois être spécifique

A

C’est un échangeur anionique fort

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11
Q

le sulfonate c’est quoi?

A

C’est un échangeur cationique fort

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12
Q

le DEAE c’est quoi?

A

Un échangeur anionique faible

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13
Q

le CM c’est quoi?

A

C’est un échangeur cationique faible

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14
Q

Comme la protéine est également neutralisée par des contre-ions, la protéine doit posséder une plus GRANDE OU PETITE affinité pour l’échangeur que pour les contre-ions qu’elle doit déplace

A

grande

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15
Q

Qu’elle est l’étape qui suit l’addition de la substance a analysé ?

A

Lavage avec une solution tampon

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16
Q

Lorsque la protéine se lie à l’échangeur d’ion à l’aide d’une concentration saline plus élevé que la solution tampon, qu’elle est la prochaine étape?

A

une élution fractionnée

17
Q

qu’elles sont les deux solutions utilisées pour l’élution?

A

KCl et NaCl

18
Q

Dans une chromatographie par gel-filtration, les molecules sont séparés par quoi?

A

Selon leur taille et forme

19
Q

Dans une chromatographie par gel-filtration, la matrice est fait de quoi?

A

Dextran, agarose ou polyacrylamide

20
Q

Qu’est ce que la limite d’exclusion?

A

La limite de taille que les pores peuvent laisser passer

21
Q

Les protéines qui ne pénètre pas dans les pores traversent plus vites ou plus lentement? Explique pourquoi

A

Ils traversent plus vite puisqu’ils ne sont pas retenus

22
Q

Qu’elles sont les matrices les plus utilisées?

A

Le dextrane, l’agrose ou le polyacrylamide pour le gel de filtration

23
Q

La porosité des gels dépend de quoi?

A

De la masse moléculaire du polymère
Des liaisons qui se croisent

24
Q

Une grosse masse molaire signifie une descente dans gel plus rapide ou plus lente?

A

Plus rapide

25
Q

Qu’est-ce que le volume d’élution?

A

C’est le volume de solvant nécessaire pour éluer la protéine après son dépôt sur la colonne

26
Q

Comment on mesure le volume d’élution relatif?

A

Ve/Vo

27
Q

À quoi sert de savoir le volume d’élution?

A

Estimer la masse moléculaire d’une protéine

28
Q

Qu’est ce qu’une dialyse?

A

Séparation des molécules par la taille grâce a l’utilisation de membrane semi-permeable

29
Q

Donne un exemple important de l’utilisation de la dialyse

A

utilisée pour éliminer les sels présents dans
un échantillon de protéine obtenu après précipitation

30
Q

Explique comment fonctionne la chromatographie d’affinité

A

On utilise un ligand dans la phase stationnaire qui se lie spécifiquement à la protéine d’intérêt

31
Q

Qu’elles sont les deux avantages de l’utilisation de la chromatographie d’affinité?

A
  1. Permet l’utilisation de propriété biochimique spécifique à la protéine
  2. Permet la purification de la protéine d’intérêt à un très haut degré de pureté en une seule étape
32
Q

Comment on élimine le ligand de la protéine?

A
  • en ajoutant un excès de ligand libre dans la colonne ( celui-ci entre en compétition pour la liaison de la protéine)
  • en changeant le pH, la force ionique et/ou la température
33
Q

la matrice utilisée pour la chromatographie d’affinité doit:

A
  • chimiquement inerte
  • avoir une grande porosité
  • présenter de nombreux groupes fonctionnels capables de former des liens covalents avec les ligands
34
Q

Qu’elle est le polymère le plus utilisé dans une chromatographie d’affinité?

A

l’agarose

35
Q

la liaison par lien de covalence du ligand sur la matrice d’agarose se fait en deux étapes. Que sont-ils?

A

1) réaction de l’agarose avec du bromure de cyanogène,
qui produit un intermédiaire “activé” et stable
2) le ligand réagit avec l’agarose activé pour donner un produit lié par coval ence

36
Q

Nomme un problème avec l’utilisation de l’agarose et la solution

A

plusieurs protéines sont incapables de se lier à leur ligand couplé au bromure de cyanogène à cause d’interférence stérique avec la matrice d’agarose. Donc, on utilise un bras “espaceur.

37
Q

De quoi est généralement constitué le bras “espaceur

A

Epoxy (6 atomes de carbones)

38
Q

Qu’elle est l’étape qui précède la chromatographie ?

A

une méthode qui permette de la ou les détecter quantitativement et spécifiquement dans les différentes fractions de l’éluat

tp biochimie intra Real (6 decks)

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