Cours 4 - Centrifugation Flashcards
Pour qu’une molécule subit une sédimentation, qu’elle relation doit-elle avoir avec la solution?
Densité de la molécule doit être plus gros que la densité du liquide
Qu’elle est le but de la centrifugation?
séparation des constituants lorsqu’ils sont émis à des hautes vitesses.
Qu’elles sont les trois types de centrifugeuses?
- Centrifuge de table (Eppendorf de 1.5 mL)
- Centrifuge à haute vitesse (40,000 g pour des volumes allant jusqu’à 50 ou 100 mL)
- Ultracentrifugeuses (1 000 000g)
est ce que les macromolécules se sédiments sans centrifugation?
non, ils ont besoin d’une grande vitesse.
Pourquoi les macromolécules ne se sédiments pas avec une centrifugeuse normale?
Puisque l’agitation thermique est suffisante à les garder dispersées de façon homogène en solution
L’ultracentrifugeuse peut attendre une force gravitationnelle de combien de g?
1 000 000 X g
Qu’est ce que l’ultracentrifugeuse a prouvé dans le domaine des macromolécules?
démontrer que les protéines sont des macromolécules de composition homogène et qu’un grand nombre de protéines sont composées de sous-unités.
La vitesses de sédimentation d’une particule dépend de quoi?
De sa masse
Qu’elle est la formule de la force de sédimentation?
Fsedimentation = Force de centrifugation - force de flottaison
Comment attaint-on la phase stationnaire?
Quand les forces sont contre balancer (Fsedimentation = Force de friction)
A quoi sert l’ultracentrifugation analytique?
Mesure la masse des macromolécules et le coefficient de sédimentation
Qu’est ce que le volume partiel spécifique?
le changement en volume lorsque 1g sec de particules est dissous dans une soluté à volume infini
1 Svedburgs c’est quoi?
10^-13 secondes
On peut déterminer la masse d’une solution à l’aide de quoi?
Du coefficient de sédimentation et du coefficient de friction
Les masses obtenu par centrifugation son exprimer par quelle unité de mesure?
Svedburgs
Dans une centrifugation différentiel, la séparation des particules se fait selon quoi?
leur taille
Une centrifugation différentielle se fait en une étape ou plusieurs étapes? Explique
elle se fait en plusieurs
en augmentant l’accélération (g)
on utilise la centrifugation préparative quand on a quoi??
une volume significatif à centrifuger
Dans une centrifugation préparative, que pouvons-nous utiliser pour augmenter la résolution?
une solution inerte comme le saccharose et le chlorure de césium. Ces solutions causent un gradient de densité ce qui augmente la résolution
Explique la différence entre la centrifugation en zone et en gradient de densité
centrifugation en zone sépare la substance selon la masse alors que la centrifugation en gradient de densité par la densité des solutés.
Explique la centrifugation en zone
la solution de macromolécules est déposée sous forme
de couche en haut d’un gradient de densité préparé au préalable. De cette manière, les macromolécules vont être séparés selon leur coefficient de sédimentation. On récolte les macromolécules à l’aide d’une aiguille
Dans une centrifugation par gradient de densité, une particule de densité spécifique sera entraînée vers le fond pendant la centrifugation jusqu’au point où …
la densité de la solution environnante est identique à celle de la particule (point isopycnique).
Les échantillons ont mixer avec quoi dans une centrifugation par gradient de densité
CsCl et Cs2SO4
Explique comment on fait pour faire une chromatographie par gradient de densité:
L’échantillon est dissout dans une solution concentrée d’une substance dense qui diffuse relativement vite comme les sels CsCl et Cs2SO4, et qui est subie à des hautes vitesses de rotation
Le fort champ centrifuge génère un gradient important de sel dans lequel les composantes de l’échantillon se retrouvent en zone de densités égales à celle de la
solution de sel;
