Cours 3 - Examen 2 Flashcards
Qu’est-ce que la réplication de l’ADN?
le processus de doublement du contenu en ADN d’une cellule-mère en mitose afin de créer 2 cellules filles identiques
Quand ce produit la réplication (quelle phase)?
Dans la phase S de la mitose
Pourquoi dit-on que la réplication s’effectue selon un mode semi-conservatif?
Chaque brin de la molécule sert de matrice à la synthèse d’un brin complémentaire, pour 2 molécules d’ADN. Chaque nouvelle fille conserve la moitié du bagage de la cellule mère. Les autres brins sont néoformés
Quelle est la vitesse de réplication de l’ADN chez les procaryotes vs les eucaryotes?
Pro = 20-30 minutes
Euc = 1h
Pourquoi la vitesse de réplication des eucaryotes est 2x moins longue que celle des procaryotes?
L’ADN eucaryotes est linéaire, beaucoup plus long et empaqueté. De ce fait, il y a un stock d’ADN polymérise beaucoup plus important avec plusieurs origines de réplication. Il faut donc des étapes additionnelles que les procaryotes à cause des modifications de structure de la chromatine.
Qu’est-ce que l’ADN polymérase?
enzymes qui font un nouveau brin d’ADN à partir d’un brin matrice. Elles catalysent la formation de liaison phosphodiester entre l’extrémité 5’P du nucléotide incorporé et l’extrémité 3’OH de la chaîne en croissance
Qu’est-ce que tous les ADN polymérase ont besoin pour fonctionner?
Une amorce et une matrice
Quelles est la différence entre une amorce d’ADN et une amorce d’ARN?
ADN: réparation ou recombinaison
ARN: réplication
Quelle est la principale enzyme impliquée dans la réplication du chromosome bactérien?
L’ADN polymérase III: elle intervient dans l’élongation du brin avancé et dans la synthèse des fragments d’Okazaki
Apprendre tableau polymérase procaryote
Apprendre tableau polymérase chez les eucaryotes
De quoi dépend la correction de copie et par quoi est-elle fait?
de l’activité 3’→5’ exonucléase de l’ADN polymérase III
Où se produit la correction de copies?
À l’endroit où l’enzyme se sépare de son site d’activité 5’→ 3’ polymérase
Comment on sait quand il doit y avoir une correction de copies?
Quand un nucléotide désapparié s’introduit dans le domaine de polymérisation, la synthèse d’ADN arrête afin de permettre l’excision du mauvais nucléotide et de le remplacer par le bon nucléotide
À quoi sert la technique PCR?
À amplifier, de façon exponentielle, un fragment d’ADN, car la quantité double à chaque cycle
Combien de temps dure un cycle de PCR?
1 cycle = 3 étapes = 2-3h pour faire 30 cycles
Quelles sont les étapes de la technique PCR?
- Dénaturation
- Hybridation des amorces
- Élongation
En quoi consiste la dénaturation lorsqu’il est question de PCR?
Chauffer le mélange à 94˚C pendant 2 minutes pour séparer les deux brins d’ADN
En quoi consiste l’hybridation des amorces lorsqu’il est question de PCR?
La température est descendu (en fonction des amorces) pendant 2 minutes. Alors, les amorces s’attachent à leur séquence complémentaire
En quoi consiste l’élongation lorsqu’il est question de PCR?
Le fragement d’ADN est amplifiée, car l’enzyme a une excellente activité au dessus de 70˚C
Quelle est la différence entre la PCR classique et la RT-PCR?
La PCR classique se produit à un endroit précis (une mutation) afin d’amplifier cet endroit (pour trouver anomalie/génotype/clonage/empreinte génétique) tandis que la RT-PCR se produit sur un tout un ARN où il est nécessaire d’avoir de la transcription inversée (remettre ARN en ADN)
Quelles sont les 3 principales étapes de la réplication?
- Initiation
- Élongation
- Terminaison
Qu’est-ce que des facteurs d’initiation?
Des protéines qui vont reconnaître les origines de réplication afin de faciliter la fixation de d’autres protéines qui elles aussi vont se fixer à ces origines de réplication. Ces protéines permettent l’ouverture des deux brins de l’ADN et ainsi « faire apparaître » des fourches de réplication
Comment se produit l’étape d’initiation?
C’est l’ouverture de la double hélice:
1. Les facteurs d’initiation de la transcription reconnaissent l’origine de réplication
2. La protéine DnaA forme la fourche en brisant les liaisons H = OEIL DE RÉPLICATION
3. L’hélicase sépare les deux brins (casent les liaisons H)
4. La topoisomérase enlèvent les supertours positifs engendrés par la formation de l’œil de réplication
5. SSB (protéine) se fixent pour stabiliser les simples brins d’ADN et empêchent la reformation du double brin (RPA chez eucaryotes)
Qu’est ce que le primosome?
Seulement chez les procaryotes, le complexe multienzymatique composé de l’hélicase et de la primase
Au cours de quelle phase il y a formation du réplisome et la synthèse de l’ADN?
Élongation
Quelle est la difficulté de l’élongation?
L’élongation se fait dans le sens 5’ vers 3’ pour le brin en création. Cependant, les deux brins d’ADN sont antiparallèle (enroulés sens opposés). Des mécanismes permettent de déroulé le brin pour la réplication
Quels sont les types de brins?
- Brin direct (précoce)
- Brin indirect (retardé, tardif) qui est créé de façon discontinue, sous forme de fragments d’Okazaki dans le sens 3’ vers 5’
Comment se fait l’élongation du brin?
- Primase: synthétise des amorces d’ARN (complexe primosome), déplace les SSB le long de la chaîne et effectue la polymérisation des amorces d’ARN
- Polymérase: ajoute des nucléotides le long de la chaîne
- Rnase H: élimine les jonctions ARN-ADN
- ADN polymérase: remplient les trous laissés par les amorces disparues
- ADN ligase: ie les fragments d’Okazaki
Comment se fait la terminaison?
- fourches de réplication rencontre un signal de terminaison
- La protéine Tus (signal) reconnaît la séquence d’arrête
- Tus bloque l’hélicase
- La topoisomérase sépare les 2 chromosomes
Quelles sont les conséquences d’une mutation chez un organisme unicellulaire?
- Modification gène: peut entraîner mort organisme
- Mutation gène: transmis à la descendance
Quelles sont les conséquences d’une mutation chez un organisme pluricellulaire?
- Modification gène: peut entraîner tumeur, perte de
fonction ou mort cellulaire - Mutation gène: pas transmise à la descendance sauf si elle touche le génome d’une cellule germinale
Quelles sont les méthodes de réparation de l’ADN?
- Réparation par excision de base
- Réparation par excision de nucléotïde
- Réparation des cassures doubles brins
- Réparation des mésappariements
- ADN polymérase de translésion
Qu’est-ce que la réparation par excision des bases?
- ADN glycosylase recconaît la base modifiée et coupe la liaison N-glycosidique
- Endonucléase et phosphodiesrtérase coupent le site actif
- La Pol beta remplace le mauvais nucléotïde
- ADN ligase referme le brin
Que permet la réparation par excision de nucléotide?
La réparation de d’amères de thymines induits par les rayonnements UV
Qu’est-ce que la réparation par excision de nucléotide?
- Protéines XP reconnaissent la lésion
- Protéines XP ont activité exonucléase donc elle coupe le brin endommagé à une dizaine de nucléotide de la lésion
- L’ADN pol delta et epsilon réparent le brin
Que peut-il se produire lors d’une défiance des protéines XP?
xéroderma pigmentosum: maladie héréditaire rare caractérisée par une sensibilité excessive de la peau aux rayons UV, des troubles oculaires et un risque fortement accru de développer un cancer de la peau ou des yeux, car les mutations causées par l’environnement s’accumulent au cours des mitoses successives, diminuant significativement l’espérance de vie du malade (protéines XP peuvent pas réparer l’ADN)
Que permet la réparation des mésappariements?
Lorsqu’on a pas remarqué qu’il y avait un ,mauvais appariement lors de la synthèse, la réplication continue, mais il est quand même possible de changer le nucléotide ensuite.
Grâce à quoi est possible la réparation par mésappariements?
L’activité exonucléase 3’ vers 5’ de relecture par les ADN Pol delta et epsilon qui permettent d’éliminer un nucléotide mal apparié et le remplacer par le complémentaire
Comment se produit la réparation par mésappariements?
- Un complexe MutS alpha (si il y a mésappariement d’une base) ou MutS beta (si il y a mésa-appariement de 2 à 14 bases) se fixent sur le site lésé
- MuTL (un autre complexe) active MUTS afin que ce dernier puisse se déplacer dans les deux sens (pour trouver erreur sur brin: brèche)
- L’erreur spécifie le brin néosynthétisé qui sera dégradé par une exonucléase
- Le brin matrice est protégé par RP-A
- Pol delta resymnthétise le brin dégradé
- L’ADN ligase referme le brin
Comment peut se faire la réparation des cassures doubles brins?
- Recombinaison homolgue
- Ligation des extrémités
Qu’est-ce que la recombinaison homologue?
Mécanisme lent qui utilise le chromosome
homologue non endommagé pour assurer une réparation fidèle
Qu’est-ce que la ligation des extrémités?
Mécanisme plus simple et majoritaire chez les mammifères qui consiste à relier les extrémités double brin (peut ajouter ou enlever des nucléotides au moment de la ligation)
Comment se fait la réparation par l’ADN polymérase de translésion?
- Blocage de la transcription en raison d’erreurs pas vues par la polymérase traditionnelle
- Recrutement de la polymérase de translésion
- Elle réplique la zone lésée
- La polymérase traditionnelle reprend son travail
Que peut produire les polymérises de translésion?
Elles ne possèdent pas d’activité de relecture et peuvent induire des mutations au niveau de la zone lésée lors de la réplication
