Cours 3 Flashcards
C’est quoi la cristallographie au rayon X
Qd faiseau rencontre cristal=diffraction a cause proprétés spécifique cristal
Mesure des ANGLES+ INTENSITÉ= obtenir structure du cristal +image 3D densité éléctronique. Px donc det. position moyenne des atomes, nature+liaisons chimique
C’est quoi les type de macromolécule, sont fait de quoi?
macromolécule assemblage monomère et sous unité plus simple
sucre=polysacchardide
acide gras=lipide
acide aminés=protéine
nucléotide=acide nucléique
L’ADN est formé de quoi, quel liaison et la protéine a quel rapport avec ADn
Nucléotide forment adn, relié un aux autre liaisons covalente
Lecture 5’ vers 3’= determiner séquence brin ADN.
Séquence précise ADN forme gène. Géne transcrit ARN,ARN traduit protéine. Chaque prot= gène avc séquence specifique
C’est quoi la purification des acides nucléiques
Acide nucléique purifié avc detergent(SDS), alcool(éthanolm isopropanol) et sel. Autre étape peuvent etre ajouté pr + purete
C’est quoi l’electrophorèse sur gel d’agarose
Avec le liquide acide nucléique rester on utilise ce genre de thecnique pour séparer différent fragement ADN en fonction TAILLE.
Acide nucléique=molécule polaire chargées - au ph de cellule. Utilisation charge négative pr faire migrer fragement intérieur gel d’agarose(polymere)
L’isolation, amplification et séquencage de différent gène ont permis de confirmer quoi?
Confirmer qu’un gène possède tjr mm séquence MUTATION POSSIBLE
chaque protéine= un gène
DNA=RNA=POLYPEPTIDE-PROT
les protéine ont composé de quoi? Décrit moi tout le processus en détails du début jusqua la formation des différente forme de prot.
Protéine= assemblage acide aminé.
A.a. module construction structure primaire prot. Unis par LIAISON PEPTIDIQUE(liaisons covalente) relis carboxyle d’un aa a une carboxyle d’une autre. Donc prot commence tjr par grp amine(N-terminal) + termine grp carboxyle(C-terminal)
aa très bien car grande diversité permet construction prot forme et fonction diff.
On a STRUCTURE PRIMAIRE SE REPLIE EN STRUCTURE SECONDAIRE, QUI SONT MODULE CONSTRUCTION TERTIAIRE. Structure tertiaire se forment SPONTANÉMENT ds eau grâce aux LIAISONS HYDROGÈNE qui se créent facielemt entre a.a
On a 2 forme Hélice a ou les chaine latérale sont vers l’extérieur
Feuillet B( chaine R vers haut et bas).
CARACTÉRISTIQUE CHAINE LATÉRALE font en sorte que chaque aa plus STABLE ds une ou autre structure.
La prot en cours synthèse ADOPTE SPONTANEMENT structure secondaire en fonction aa.
Structure tertiaire prot= arrangement hélice et ou feuillet. Possède DOMAINE FONCTIONNELS(régions ayant activité enzymatique et ou site liaisons autre molécuke)
Un domaine SE REPLIE TJR DE LA MÊME FACON, px importe le contexte ds lequel se trouve. C’EST LA FORME QUI DETERMINE FONCTION
un meme domaine px faire partie de pls prot et DONCTION PROT PT ETRE INTERPRÉTÉE PAR SES DOMAINES
FINALEMENT, CERTAINES PROTÉINE, possèdent structure quaternaire, s’agit INTERACTION ENTRE PLUSIEURS CHAINE PEPTIDIQUES pr former prot fonctionelle
Parle moi de la relation séquence-structure-fonction
Séquence spécifique se replie pr former structue spécifique avc fonction spécifique
séquence-structure-fonction
Parle moi de la relation séquence-strcuture-fonction en parlant du lysozyme
Type de prot: enzyme
strucutre: doit lier glucide conformation particulière
Fonction: accèlère reaction hydrolyse des sucres(ajout eau= briser lien)
Parle moi de la relation séquence-strcuture-fonction ADN et pk compl.mentratié base est bien pour replication
type de molécule acide nucléique
Structure: 2 brins complémentaire et antiparallèle
Fcontion: conserve et réplique info genetique
Complémentraité bien pour replication pr pa faire trop erreur biologique
Parle moi de la thecnique de purification d’une protéine
Prot echantillon cellule peuvent etre EXTRAIT.Ensuite, possible Separer milliers prot différent pr obtenir echantillon qui contient prot d’interet(PURIFICATION)
La thecnique est appelée la CHROMATOGRPAHIE SUR COLONNE.
Consiste a faire traverser colonne contenant une MATRICE SOLIDE POREUSE. les prot. seront PLUS OU MOINS RETARDÉES SELON LEUR INTERACTION AVC LA MATRCE
Prot sont purifie sur different type colone selon : charge, degre d’hydrophobicité, taille, leur capacité a se fixer a dautre molecule
A part chromato d’affinité sur colone qui px etre + specifique(p tjr), autre type de chromatographoe NE PERMETTENT PA DE PURIFIER une prot suffisament pr étudier, GÉNÉRALEMENT FAUT COMBINER 2 ou pls. types de chromatogrpahie
Vous voulez étudier in vitro l’activité d’une protéine hydrophile X de taille
moyenne. Vous avez testé différents types de chromatographie, mais vous
n’arrivez toujours pas à rendre votre protéine suffisamment pure pour tester
son activité. Que pouvez-vous faire ?
le génie genetique et purification prot
Par génie genetique, vous CLONEZ gène codant pr prot X dans un VECTEUR(PLASMIDE BACTÉRIEN) CONTENANT (HIS TAG= BCP D’HISTIDINE)
Une fois plasmide ds bactérie, ctt dernière devient usine a fabrication de prot X
Par la suite, extraction des prot de la bactérie et purification par chromatographie affinité. On a une matrice riche en Nickel et cuivre, histidines(his tag) ont grande affinité pr ca. Après on fait elution: on ajt une molécule qui se lie fortement avc matrice(détache prot taggée)
Parle moi de l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide
Sert a separer prot selon taille, SDS-PaGE: detergent puissant chargé negativement. B-mercatophénol: agent reducteur defait pont s-s.
Les protéines, TOUTES CHARGÉES NÉGATIVEMENT ET DÉNATURÉES migrent dans le gel en fonction taille
Parle moi du séquencage d’une prot
Cela se fait mais pas directement comme ADN.
1. prot sont coupés digérées.2. séparation des peptide. 3. analyse de la masse de chaque résidu de chaque peptide.4. comparaison avec la masse théorique des acides aminés,puis determination de séquence+ probable
