Cours 2: Histologie du tissu nerveux Flashcards
Vrai ou faux? Les premières observations du cerveau étaient limitées car il n’y avait pas de méthodes/équipements pour voir ces structures
Vrai
Quels étaient les obstacles à surmonter? (3)
- Les cellules sont très petites (diamètre de 0,01 à 0,05 mm)
- Les tissus cérébraux, pour être vus au microscope, doivent être coupés extrêmement finement (Des coupes environ du diamètre des cellules)
- Les tissus cérébraux ont la consistance d’une gelée (Les tissus ne sont pas très fermes, comment les couper?
Qui suis-je? Je suis un nouveau domaine où l’on étudie la microscopie de la structure des tissus.
L’histologie
Comment les scientifiques ont-ils découvert comment fixer les tissus?
En les immergeant dans du formol
Qui suis-je? Je permet de faire des coupes de tissu fixé
Un microtome
Mais il restait tout de même un obstacle à régler pour qu’on puisse observer les cellules du cerveau. Quel est-il?
Le cerveau est de couleur crème, il n’y a aucune différence de pigmentations. Ainsi, on ne peut distinguer les cellules dedans.
Réviser la diapositive 7
Ok
Grâce à quels scientifiques l’histologie est-elle née? Qu’est-ce que ces scientifiques ont apporté au domaine?
L’étude de l’anatomie miscroscopique remonte au 19e siècle lorsque Cajal, Charcot et Alzheimer étaient au travail.
Ils ont utilisé des colorants nouvellement découverts pour identifier et étudier différents types de cellules et l’anatomie du SNC. Les résultats ont été une révélation et bon nombre de ces teintures sont encore utilisées aujourd’hui.
Qui a pu faire la première représentation d’un neurone pyramidal?
Cajal avec la teinture de Golgi.
Réviser la diapositive 8
Ok
Quelles sont les nouvelles technologiques qui aujourd’hui ont surpassé les colorations traditionnelles? Pourquoi?
Depuis le milieu du 20e siècle, les anticorps, les protéines fluorescentes, les colorants et les nouvelles technologies ont pris le relais des colorations traditionnelles en raison de leur diversité de cibles (protéines) et de leur spécificité.
Qu permettent les nouvelles technologies?
Cela a permis la visualisation simultanée de deux protéines/types cellulaires différents ou plus en utilisant des étiquettes fluorescentes de différentes couleurs
Réviser la diapositive 9
Ok
Quel est le rôle d’un neurone?
Transmettre l’information entre l’environnement (SNP) et le système nerveux (SNC) ainsi qu’entre les différentes régions du système nerveux lui-même
Combien a-t-on de neurones dans le cerveau?
100 milliards
Quels sont les trois compartiments principaux d’un neurone?
- Soma
- Axone
- Dendrites
Quelles sont les trois caractéristiques principales d’un neurone?
- C’est l’unité fonctionnelle du système nerveux
- Il se distingue par sa taille, sa forme, son emplacement et ses connections
- Il est hautement spécialisé et n’a plus la capacité de se diviser
Qui suis-je? Je sépare l’intérieur du neurone de son environnement
La membrane neuronale
Pourquoi le cytosquelette d’un neurone est important?
Il donne au neurone sa forme et son aspect particulier tridimensionnel (3D) dont il a besoin pour faire ses fonctions.
Par exemple, on ne retrouve pas cette trois dimension dans tous les types de cellules (peau, muscles, etc).
Réviser la diapositive 13
Ok
Quelles sont les trois caractéristiques principales du soma?
- La forme du soma est variable, mais plus souvent sphérique
- Il fait environ 20 micromètre de diamètre
- Le liquide à l’intérieur de la cellule s’appelle le cytosol.
Qu’est-ce que le cytosol?
Il s’agit d’une solution salée, riche en potassium
Que contient le soma?
Dans le soma (dans le cytosol) se trouvent des structures entourées de membranes dénommées globalement organites. Le corps cellulaire du neurone contient les mêmes organites que ceux présents dans d’autres cellules animales. Les plus importants sont le noyau, le réticulum endoplasmique rugueux (RER), le réticulum endoplasmique lisse (REL), l’appareil de Golgi et les mitochondries.
Qu’est-ce que le cytoplasme?
Tout ce qui se trouve à l’intérieur de la membrane, excepté le noyau incluant le cytosol.
Quels sont les 4 composantes du soma qui sont spécifiques au neurone?
- Neurofilaments
- Cône d’émergence de l’axone
- Segment initial de l’axone
- Dendrites
Quelles sont les 13 composantes du soma d’un neurone?
- Membrane nucléaire
- Pores de la membrane nucléaire
- Intérieur du noyau (nucléoplasme)
- Nucléole (Chromatine)
- Appareil de Golgi
- Réticulum endoplasmique lisse
- Réticulum endoplasmique rugueux
- Mitochondrie (membrane double)
- Microtubules
- Neurofilaments
- Cône d’émergence de l’axone
- Segment initial de l’axone
- Péricaryon (soma)
- Dendrites
Réviser et apprendre le schéma de la diapositive 15
Ok
Quel est le rôle de la membrane neuronale?
La membrane neuronale délimite le pourtour cellulaire. Elle maintient le cytoplasme à l’intérieur du neurone et garde certaines substances hors du neurone.
Quelles sont les trois caractéristiques principales de la membrane neuronale?
- 5 nm d’épaisseur et contient de nombreuses protéines
- La composition protéique de la membrane varie selon sa localisation: soma, dendrites ou l’axone
- C’est la membrane qui confère aux neurones sa capacité à véhiculer et de transmettre l’influx nerveux
Que peut-on dire des protéines membranaires présentes dans la membrane neuronale?
Certaines protéines membranaires agissent pour maintenir un gradient, entre l’intérieur et l’extérieur du neurone. D’autres forment les pores qui sélectionnent les substances qui vont pénétrer à l’intérieur du neurone.
Vrai ou faux? Les gradients créées par ces protéines sont super important pour les potentiels d’actions
Vrai
Quelles sont les fonctions principales du cytosquelette?
- Le cytosquelette donne au neurone sa forme 3D caractéristique
- Transport rétrograde et antérograde d’organelles, de protéines et de molécules.
Vrai ou faux? On peut comparer le cytosquelette à une autoroute pour transporter les molécules
Vrai
De quoi est constitué le cytosquelette? (3)
Il est constitué de différents éléments:
- Les microtubules (20 nm)
- Les neurofilaments (10 nm)
- Les microfilaments (filaments d’actines) (5 nm)
Vrai ou faux? Le cytosquelette est flexible
Faux
Vrai ou faux? Certains éléments du cytosquelette agissent comme support au transport des protéines le long de l’axone
Vrai
Réviser la diapositive 18
Ok
Quel constituant du cytosquelette est impliqué dans le transport axonal?
Les microtubules
Quelle protéine est responsable du transport antérograde (du corps cellulaire vers la terminaison axonale)? Que transport-elle?
La kinésine
Elle transporte des vésicules, des mitochondries, etc.
Quelle protéine est responsable du transport rétrograde (De la terminaison axonale vers le corps cellulaire)? Que transporte-elle?
La dynéine
Elle transporte les déchets, des vésicules, etc.
Réviser la diapositive 19
Ok
Vrai ou faux? L’axone est propre aux neurones
Vrai
Quel est l’origine de l’axone?
L’origine se situe dans le cône axonique (cône de croissance), qui s’amincit pour former le segment initial de l’axone
Quelles sont les deux particularités de l’axone en ce qui concerne les protéines?
- La composition protéique de la membrane de l’axone est différente de celle du soma (différences structurales = différences fonctionnelles)
- Le RER ne s’étend pas dans l’axone. Il y a donc peu de ribosomes libres (et donc peu de synthèse protéique)
Vrai ou faux? La longueur de l’axone peut être de moins d’un millimètre et peut atteindre plus d’un mètre, selon le type de neurone
Vrai
Les motoneurone inférieurs sont souvent très long
Qu’est-ce qu’un efférence?
L’axone qui s’éloigne du neurone dont il est issu représente une efférence
Qu’est-ce qu’un afférence?
L’axone qui contacte un neurone particulier et lui apporte une information s’appelle une afférence
Qu’est-ce que les collatérales axonales?
Lorsque les axones se divisent souvent en branches multiples
Qu’est-ce que les collatérales récurrentes?
La collatérale revient parfois vers la cellule qui lui a donné naissance. Ces branches d’axone qui reviennent vers leur région d’origine.
Quel est le diamètre moyen de l’axone chez un homme?
Le diamètre de l’axone est variable, de 1 à 25 micromètre.
Quel est l’effet de ces variations dans le diamètre?
Ces variations dans la taille sont importantes car la vitesse de l’influx nerveux varie selon le diamètre axonal. Plus l’axone est gros, plus la vitesse de conduction de l’influx nerveux est rapide.
Qui suis-je? Je suis la partie distale et terminale de l’axone
La terminaison axonale ou le bouton terminal
Qui suis-je? Je suis un gonflement le long de l’axone
Les varicosictés axonales ou les boutons en passant
Vrai ou faux? La varicosité axonale et terminaison axonale sont des sites privilégiés où l’axone entre en contact avec d’autres cellules
Vrai
Qui suis-je? Je suis un point de contact qui présente une spécialisation membranaire
Une synapse
Réviser la diapositive 23
Ok
Quels sont les 4 différences entre le cytoplasme des varicosités axonales et des terminaison axonales et de l’axone?
- Les microtubules ne s’étendent pas jusque dans la partie terminale de l’axone
- Les varicosités et terminaison axonales contiennent de nombreuses vésicules synaptiques
- Un revêtement dense en protéines couvre la surface intérieure de la membrane qui fait face à la synapse
- Les varicosités et terminaison axonales présentent un nombre important de mitochondries, ce qui révèle un grand besoin d’énergie
Que reflète le champ récepteur d’un neurone?
L’arborisation dendritique (les branches) qui augmentent la surface de réception
Qu’est-ce qu’un neurones épineux ou un neurone de projection?
Les dendrites de nombreux neurones sont recouvertes de structures particulières, les épines dendritiques. Ces neurones sont qualifiés de neurones épineux
Quelles sont les trois caractéristiques des épines dendritiques?
- Les épines dendritiques sont disposées sur la partie distale des dentrites
- Les épines dendritiques sont des sites privilégiés pour établir des contacts synaptiques. Elles sont très plastiques (dynamiques).
- Les dendrites peuvent être ordonnées selon leur position par rapport au somal (dendrite primaire, secondaire, de troisième ordre, etc.)
Vrai ou faux? On retrouve beaucoup plus d’épine dendritique sur les dendrites primaires que secondaires
Vrai
Relire et réviser les diapositives 26-27-28-29
Ok
Comment en est-on venu à la conclusion que les épines dendritiques sont dynamiques?
Plusieurs chercheurs/scientifiques ont observé que les épines changent avec les maladies, les conditions physiologiques, l’âge, etc.
Des altérations de la forme et du nombre d’épines dendritiques sont modifiées dans les maladies du système nerveux central (SNC)
Réviser la diapositive 30
Ok
Quelles sont les deux faces distinctes retrouvées dans la synapse? Décris chacune d’entre elle brièvement.
- La face présynaptique: Elle est généralement sur une varicosité ou terminaison axonale.
- La face postsynaptique: Elle peut être présente sur une branche dendritique, une épine dendritique, le soma ou même l’axone d’un autre neurone.
Qui suis-je? Je suis l’espace entre la membrane présynaptique et la membrane postsynaptique
La fente ou l’espace synaptique
Qui suis-je? Je transmet de l’information d’un neurone à l’autre au niveau de la synapse constitue une série d’opération compexes
La transmission synaptique
Qu’est-ce que la synapse?
L’information, sous forme d’impulsions électriques, se propageant jusqu’à l’extrémité de l’axone, est transformée dans la varicosité ou terminale axonale en un signal chimique (libération du neurotransmetteur
Qu’est-ce qui donne une bonne capacité d’intégration des informations aux neurones?
La transformation de l’information nerveuse électrique à chimique puis de chimique à électrique
Vrai ou faux? Il existe également des synapses électriques ou le signal est transmis électriquement
Vrai
Vrai ou faux? Les synapses électriques peuvent également passer par les fentes synaptiques
Faux, elles passent par l’intermédiaire d’une jonction communicante (gap-junction)
Quels sont les trois constituants de la synapse chimique?
- La membrane présynaptique
- La membrane postsynaptique
- La fente synaptique
Décris brièvement la membrane présynaptique
Elle est formée par le bouton terminal d’un axone.
Elle se compose de vésicules synaptiques contenant des neurotransmetteurs, des récepteurs, entre autres organites, des protéines, des ions (canaux ioniques) et de petites molécules
Décris brièvement la membrane postsynaptique
Elle est composé d’un segment de dendrite ou de corps cellulaire.
Elle se compose de récepteurs pour les neurotransmetteurs, entre autres, organites, protéines, ions et petites molécules
Réviser la diapositive 33
Ok
Quels sont les 5 types de classification des neurones?
- Classification d’après le nombre de neurites
- Classification basée sur les dendrites
- Classification basée sur les connexions
- Classification basée sur la longueur de l’axone
- Classification selon les neurotransmetteurs utilisés
Qu’est-ce qu’un neurite?
Des prolongements de type axonal et dendritique qui se forment depuis le soma
Quels sont les cinq classes existantes dans la classification selon le nombre de neurites? Décris brièvement chacune d’entre elle.
- Unipolaire: Un neurone avec un seul neurite
- Bipolaire: Un neurone avec deux neurites
- Multipolaire: Un neurone en comprend 1 axone et 2 dendrites ou plus, ce qui est le cas de la plupart des neurones
- Anaxonique: Un neurone où l’axone ne peut pas être différencié des dendrites
- Pseudounipolaire: Un neurone en comprend 1 neurite qui fonctionne comme axone et dendrite
Réviser les diapositives 35-36
Ok
Décris brièvement la classification basée sur les dendrites
Les neurones peuvent être classés selon certaines propriétés morphologiques de leur dendrites (morphologie et organisation 3D de l’arborisation dendritique, présence ou absence d’épines dendritiques)
Généralement, quels types de neurones sont excitateurs? Inhibiteurs?
Les neurones épineux sont généralement des neurones excitateurs et les neurones sans épines sont généralement inhibiteurs.
Réviser les diapositives 37-38
Ok
Relire et réviser les diapositives 39-40
Ok
Qu’est-ce qu’un neurone sensoriel?
L’information est transmise au système nerveux par les neurones qui comportent des neurites au niveau des zones sensorielles du corps, comme la peau ou la rétine de l’oeil. Ces cellules sont des neurones sensoriels
Qu’est-ce qu’un neurone moteur (motoneurone)?
D’autres neurones voient leur axone innerver directement les muscles. Ils contribuent directement à la commande du mouvement et sont des neurones moteurs.
Qu’est-ce que les interneurones?
La plupart des neurones sont cependant en relation avec d’autres neurones. Ces cellules sont des interneurones
Quelles sont les différentes classes de la classification des neurones en fonction de leurs connexions? (4)
- Neurone sensoriel
- Neurone moteur
- Interneurone
- Neurone de projection (Capillaire, sécrétion. etc.)
Réviser la diapositive 42
Ok
Vrai ou faux? Les neurones intègrent une très grande quantité d’information qu’ils reçoivent par l’intermédiaire de leur neurite
Vrai
Qu’est-ce que les neurones cholinesgiques? GABAerngique? Doapminergique?
- Les neurones moteurs, l’acétylcholine
- Les neurones inhibiteurs, GABA
- Dopamine
Qu’est-ce qui permet de l’initiation d’un potentiel d’action?
Les neurones reçoivent énormément de signaux électriques par l’intermédiaire de leur dendrite des autres neurones. Un potentiel d’action sera déclenché par une somme de ces potentiels suffisantes pour déclencher ce processus.
Réviser la diapositive 46
Ok
Relire et réviser la diapositive 47
Ok
Quelles sont les deux classes contenues dans la classification basée sur la longueur de l’axone? Décris brièvement chacune d’entre elle.
- Les neurones de projection, soit des neurones qui possèdent un axone très long, qui s’étend d’une partie du cerveau à un autre (Cellule de Golgi de type I)
- Les interneurones, soit des neurones qui possèdent des axones courts qui ne dépassent pas le voisinage immédiat de la cellule. (Cellule de Golgi de type II)
Réviser la diapositive 48
Ok
Grâce à quelle technique de marquage peut-on identifier les neurones selon le neurotransmetteur qu’ils contiennent?
Grâce à l’utilisation de marquages immunohistochimiques
Comment forme-t-on les systèmes neuronaux?
Les ensembles de cellules utilisant le même neurotransmetteur forment les systèmes neuronaux
Vrai ou faux? La classification selon les neurotransmetteurs permet une classification de populations neuronales homogènes sur le plan de leur contenu neurochimique
Vrai
Vrai ou faux? Certains neurones ont la possibilité de libérer plus d’un neurotransmetteur
Vrai
Quelles sont les différentes classes retrouvées dans la classification selon les neurotransmetteurs? (3)
- Glutamate (excitation)
- GABA (Inhibition)
- DA et 5-HT (motricité et cycle éveil/sommeil)
Faire un exercice d’identification avec la diapositive 50
Ok
Vrai ou faux? Les cellules gliales participent beaucoup plus au traitement de l’information dans le cerveau que ce qui est normalement considéré
Vrai
Autres que les cellules gliales, quelles sont les autres cellules que nous pouvons retrouver dans le cerveau? (3)
- Artères
- Veines
- Capillaires
Quels sont les types de cellules gliales présentes dans le SNC? (4)
- Les cellules gliales épendymaires
- Les astrocytes
- Les oligodendrocytes
- Les microglies
Quels sont les types de cellules gliales présentes dans le SNP?
- Les cellules gliales satellites
- Les cellules de Schwann
Réviser la diapositive 52
Ok
Quel est le rôle des cellules gliales?
Les cellules gliales supportent et assistent de multiples façons les neurones dans leur fonction signalétique.
Vrai ou faux? Sans les cellules gliales, le cerveau ne pourrait pas fonctionner
Vrai
Vrai ou faux? Les cellules gliales sont 10x plus nombreuses que les neurones. Par contre, ensemble, elles occupent un volume équivalent aux neurones
Vrai
Quelle est une caractéristique essentielle des cellules gliales que les neurones n’ont pas?
Contrairement aux neurones, les cellules gliales ont la capacité de proliférer tout au long de la vie adulte.
Quels sont les rôles des astrocytes? (3)
- Les astrocytes comblent l’espace situé entre les neurones et, en conséquence, l’extension ou la rétraction des neurites pourrait étroitement dépendre des astrocytes.
Les astrocytes peuvent changer de forme, ce qui leur permet de mieux contrôler le milieu et l’espace des neurones. - Les astrocytes participent à la régulaton de la composition du milieu extracellulaire. Ces cellules entourent les partenaires synaptiques et contrôlent la diffusion des neurotransmetteurs (récupération)
- Les astrocytes sont un élément essentiels de la barrière hémo-encéphalique
Quelles sont les trois caractéristiques des astrocytes qui leur permettent d’exercer leur deuxième fonction?
- Les astrocytes sont des cellules actives. Elles présentent des transporteurs membranaires qui captent certains neurotransmetteurs.
- Les membranes astrocytaires présentent des récepteurs pour certains neurotransmetteurs qui peuvent générer des phénomènes électrique et biochimiques.
- Les astrocytes contrôlent la concentration extracellulaire de d’autres substances qui peuvent empêcher le bon fonctionnement des neurones.
Vrai ou faux? Les astrocytes sont les cellules gliales les plus nombreuses
Vrai
Vrai ou faux? Les astrocytes représentent l’essentiel de l’environnement dans lequel baignent les neurones. Cet environnement est ainsi davantage formé par ces cellules que par un liquide présent dans l’espace intercellulaire.
Vrai
Réviser la diapositive 56
Ok
Quel est le rôle des oligodendrocytes et des cellules de Schwann?
Les oligodendrocytes forment des couches de membrane (gaine de myéline) qui entourent et isolent les axones
Qui suis-je? Par endroits, la gaine est discontinue sur une courte distance; Je me trouve donc exposée au milieu ambiant.
Le noeud de Ranvier
Quel est le rôle de la gaine de myéline?
En isolant l’axone du milieu extracellulaire, la myéline contribue à accélérer la propagation des influx nerveux.
Vrai ou faux? Les oligodendrocytes sont confinés au SNC, alors que les cellules de Schwann ne sont présentes que dans le SNP
Vrai
Quelle est la différence ultime entre les oligodendrocytes et les cellules de Schwann?
Un même oligodendrocyte contribue à la formation de la myéline pour plusieurs axones.
Chaque cellule de Schwann ne myélinise qu’un seul axone
Vrai ou faux? Les axones sont tous myélinisés
Faux
Réviser la diapositive 58
Ok
Vrai ou faux? La microglie est un élément important dans les réactions immunitaires du cerveau
Vrai
Quel est le rôle des microglies?
Les cellules microgliales jouent le rôle de phagocytes afin d’éliminer les débris laissés par les neurones et les cellules gliales en dégénérescence.
Réviser la diapositive 59
Ok
Quels sont les cellules gliales satellites?
Ce sont des cellules gliales qui couvrent la surface des corps des cellules nerveuses dans les ganglions sensoriels, sympathiques et parasympathiques
Quels sont les rôles des cellules gliales satellites? (2)
- Les CGS ont des rôles tels que le contrôle du microenvironnement des ganglions sympathiques
- Ils sont présentées dans le système nerveux périphérique (SNP) et jouent un rôle similaire à celui des astrocytes dans le système nerveux central
Réviser la diapositive 61
Ok
Qu’est-ce que les cellules épendymaires?
Les cellules épendymaires tapissent les ventricules cérébraux et participent à la formation des plexus choroïdiens qui sécrètent le liquide céphalorachidien
Quel est le rôle des cellules épendymaires?
Les cellules épendymaires jouent un rôle important dans la migration cellulaire au cours du développement cérébral
Réviser la diapositive 62
Ok
Quelles sont les différents types d’approche histologiques pour observer un tissu? (3)
- Marquage fluorescence
- Marquage chromogène et colorants
- Analyse physique
Quelles sont les trois techniques englober par le marquage fluorescence?
- Immunohistochimie: Anticorps ou nanoparticule
- Fluorophores: Protéines de fusion GFP
- Colorants fluorescents: Dil, colorant diO, BODIPY
Quels sont les avantages et les inconvénients de ces techniques de marquage fluorescence?
Ce sont des marquage très dynamique.
Nous pouvons également faire plusieurs marquages à la fois pour différentes molécules.
En revanche, la fluorescence n’est pas éternelle, elle diminue avec le temps.
Quelles sont les techniques/produits englober par le marquage chromogène et colorants? (6)
- Immunohistochimie: Anticorps
- Nissl: Corps cellulaire
- H&E: Corps cellulaire et noyaux
- Coloration de Golgi: Structure et morphologie des neurones
- Teinture bleue rapide Luxol: Myélinisation
- Autres colorations: Coloration à l’argent de Schofield (structure des neurones; violet de crésyl (corps cellulaire)
Quels sont les avantages et inconvénients du marquage chromogène et colorants?
Ce sont des marquages très stable à travers le temps, mais ils sont beaucoup moins dynamique.
Il est possible de faire 2-3 marquages dans le même échantillons, mais ces marquages ne sont pas toujours très spécifiques.
Quelle est la technique englober par les analyses physiques?
La microscopie électronique avec les microscopes TEM et STEM
Quels sont les avantages et inconvénients des analyses physiques?
Cette technique nous permet d’obtenir des détails de haute résolution des protéines et structures observées.
En revanche, cela n’est pas dynamique dans le temps et le processus de fixation est assez élaborer.
Comment prépare-t-on un tissu histologique en général? (6) Décrire chacune de ces étapes brièvements
- Fixation: permet de conserver le tissu et sa morphologie
- Traitement: Un lavage à l’eau pour retirer le fixatif.
- Intégration: Enrober le tissu dans la paraffine, le déshydrater et effectuer impregnement de la paraffine.
- Sectionnement: Coupage du tissu et on retire la paraffine
- Coloration: Utilisation de colorants voulu en fonction de l’objectif de l’observation
- Montage: Montage de la coupe sur une lame
Vrai ou faux? Après leur coloration, les tissus peuvent être conserver plusieurs années.
Vrai
Comment prépare-t-on un tissu histologique pour une observation sous un miscroscope électronique? (5)
- Fixation: Avec un agent fixatif tel le formalperamadahide. Permet de conserver le tissu et sa morphologie
- Traitement: Lavage de l’échantillon, perméabilisation des membranes et bloquage de ces dernières.
- Coloration: Avec des anticorps, des fluorophores ou des colorants
- Sectionnement: Les microscopes électroniques ont besoin des sections très très fine
- Montage: Mettre des produit permettant de réduire les signaux abérrants.
Réviser les diapositives 65-66
Ok
Décris brièvement l’immunohistochimie
C’est un marquage d’anticorps ou des nanoparticules conjugué à des fluorophores.
Ces marquages sont très spécifiques et permettent de voir la distance entre des molécules
Qu’est-ce que le marquage à l’aide de fluorophores?
Les fluorophores proviennent de la fusion d’une protéine avec GFP. On fait une modification génétique pour y intégrer le gène de fluorescence.
Qu’est-ce que le marquage à l’aide de colorants fluorescents?
Ce sont des molécules qui sont naturellement fluorescentes. Ces colorants vont donc se lier à certaines parties du neurone et nous permettre de les observer.
Exemples:
- DAPI (Acide nucléique -> noyau)
- GFAP (Astrocytes)
- BODIPY (Lipides)
Réviser à la diapositive 68
Ok
Lors de la détection des protéines par immunohistochimie, il y a deux possibilités d’immunofluorophores. Quels sont-ils?
- Les anticorps conjugué à un fluorophores. Dans cette situation, nous avons alors seulement besoin d’un anticorps pour viser la protéine désiré.
- Les anticorps multiples. Parfois, les anticorps ne sont pas conjugués à des fluorophores. Il faut donc un deuxième anticorps, plus général, (anticorps secondaire) possédant un fluorophore afin de visualiser l’anticorps primaire attaché à la protéine ciblée.
Réviser les diapositives 69-70
Ok
Qu’est-ce que les injections neuronales unitaires in vivo avec des fluorophores? (3)
- Microtome à congélation ou vibratome (70 micromètre), coupe sériée
- Procédures immunohistochimiques permettant de révéler le traceur injecté
- Reconstruction de l’arborisation axonal et dendritique entière à l’aide d’un microscope à fluorescence et analysée par un logiciel neuroanatomique
Réviser la diapositive 71
Ok
Vrai ou faux? L’utilisation du marquage fluorescent permet de caractériser ls branches des dendrites
Vrai
Réviser les diapositives 72-73
Ok
Vrai ou faux? L’utilisation du marquage fluorescent permet également d’observer les connexions axonales pour observer le connectomes du cerveau
Vrai
Réviser les diapositives 74-75
Ok
Qu’est-ce qu’un colorant?
Les colorants sont solubles dans L’eau ou dans un solvant organique et fonctionnent en se liant à des éléments pour lesquels ils ont une affinité moléculaire (charge mes molécules par ex).
Qu’est-ce qu’un chromogène?
Un chromogène est un composé chimique incolore qui n’est pas converti en composé coloré que par une réaction chimique
Réviser la diapositive 77
Ok
Vrai ou faux? Nous pouvons utiliser les chromogène avec des anticorps
Vrai
Comment procède-t-on en comparaison avec un fluorophore?
En fait, nous utilisons le même principe que les anticorps primaire (détecte la protéine cible) et les anticorps secondaires (détecte l’anticorps primaire) à l’exception que l’anticorps secondaire n’est pas conjugué à un fluorophore, mais bien à une molécule tel la biotine (réactif) qui viendra réagir avec le chromogène qui lui aussi est lié à un anticorps afin de faire apparaitre la couleur.
C’est donc le même principe avec des anticorps à l’exception que la couleur apparait suite à une réaction chimique et non l’excitation du fluorophore et son émission de lumière
Réviser la diapositive 78
Ok
Réviser et comprendre les expériences décrites aux diapositives 79 à 86
Ok
Quelles sont les caractéristiques principales de la coloration de Nissl? (4)
- La méthode Nissl est utilisée pour colorer le corps cellulaire, et en particulier le réticulum endoplasmique rugueux (RER)
- Il est utilisé pour mettre en évidence les caractéristiques structurelles du neurone
- Nissl est un colorant basique
- Il est utilisé pour aider à différencier les neurones des cellules gliales car le RER est plus prononcé dans les neurones
Vrai ou faux? Avec la coloration de Nissl nous ne pouvons voir les dendrites des neurones
Vrai
Réviser la diapositive 87
Ok
Quelles sont les caractéristiques principales du colorant de l’hématoxyline et à l’éosine? (2)
- C’est la coloration la plus largement utilisée dans le diagnostic médical
- H & E est la combinaison de deux colorants histologiques: L’hématoxyline et l’éosine. L’hématoxyline colore les noyaux cellulaires en bleu violacé et l’éosine colore la matrice extracellulaire et le cytoplasme en rose, d’autres structures prenant différentes nuances, teinte et combinaisons de ces couleurs.
Vrai ou faux? On ne voit pas les structures, synapse ou autre structure du SNC
Vrai
Réviser la diapositive 88
Ok
Quelles sont les caractéristiques principales de la coloration de Golgi? (3)
- Un petit pourcentage de neurones a uniformément pris une coloration foncée, ce qui permet l’analyse du corps du neurone
- La méthode de Golgi est utilisée pour visualiser le tissu nerveux au microscope optique
- Cette coloration est utilisée aujourd’hui pour étudier comment les maladies affectent la morphologie neuronale
Réviser les diapositives 89-90-91
Ok
Quelles sont les caractéristiques principales de la coloration bleue rapide Luxol? (2)
- Le LFB est couramment utilisé pour détecter la démyélinisation dans le SNC, mais ne peut pas discerner la myélinisation dans le système nerveux périphérie
- La LFB est un colorant phtalocyanine de cuivre soluble dans l’alcool et attiré par les bases présentes dans les lipoprotéines de la gaine de myéline
Réviser la diapositive 92
Ok
Quelle est la caractéristique principale de la coloration à l’argent Schofield?
Pour les axones montrant des faisceaux d’axones de cellules ganglionnaires sensorielles
Quelle est la caractéristique principale de la combinaison de coloration de Bleu rapide de Luxol/violet de crésyle?
Coloration des corps des motoneurones chromotolytiques de la moelle épinière
Quelle est la caractéristique principale de l’immunomarquage?
Des axones endommagés à la base du pont à l’aide d’un anticorps dirigé contre la protéine précurseur de la B-amyloide et de l’H&E
Vrai ou faux? En miscroscopie électronique, les images à haute résolution sont le résultat de l’utilisation d’électrons comme source d’éclairage.
Vrai
La résolution est d’environ 0,01 nanomètre (grossissement jusqu’à 300 000X)
Quels sont les deux principaux types de microscope électronique (EM)?
- Scanning EM (SEM)
- Transmission EM (TEM)
Qu’est-ce que le SEM?
Un faisceau d’électron à haute énergie est dirigé vers l’échantillon. Lorsqu’ils interagissent avec l’échantillon des électrons secondaires et des rayons X sont produits. Ces signaux sont collectés par les détecteurs et une image est formé sur l’écran de l’ordinateur.
Ainsi, ce qui crée l’image est la réfléchissement des électrons
Qu’est-ce que le TEM?
Un filament de tungtène est utilisé pour créer un faisceau d’électrons dans une chambre à vide, puis au lieu de rebondir sur la surface de l’échantillon, le faisceau le traverse. L’échantillon est une très fine tranche de matériau, inférieur à 100 nm. Lorsque les électrons traversent, ils frappent un écran phosphorescent, un CCD ou un film et une image est créé.
C’est ainsi la traversé des électrons au travers de l’échantillon qui crée l’image. Si on observe un couleur dense c’est que les électrons ne passe pas, donc l’image sera de couleur foncée.
Aller réviser et relire les diapositives 95-96-97-98
Ok
Qu’est-ce que l’ultramicrotome?
C’est un instrument permettant de tranché très finement (80 nm ou moins) un tissu ou un échantillon. On l’utilise principalement pour faire les lames des échantillons à observer sous le microscope électronique
Réviser le diapositive 99
Ok
Quelles sont les différentes coupes à effectuer avec un microtome? (3)
- Transversale
- Oblique
- Longitudinale
Réviser les diapositives 100-101-102
Ok
Réviser et savoir identifier les éléments observés par microscopie électronique des diapositives 103 à 108
Ok
Quel est le circuit typique d’un motoneurone?
Nous avons deux corps cellulaires d’un neurone moteur, soit le corps cellulaire du neurone supérieur et le corps cellulaire du neurone inférieur.
Le corps cellulaire du neurone supérieur se situe dans le cortex du cerveau. Son axone s’étend jusque dans la moelle épinière. Il fait alors un lien avec un interneurone, puis avec le corps cellulaire du neurone inférieur. L’axone de ce neurone s’étend alors jusque dans un muscle.
Vrai ou faux? Dans la sclérose latérale amyotrophique (SLA) ce sont les motoneurone inférieur et supérieur qui sont affecté
Vrai
Quels sont les deux types de SLA?
- La SLA spinale
- La SLA bulbaire
Quels sont les symptômes principaux de la SLA spinale?
Perte de la fonction motrice des membres supérieurs et/ou inférieurs
Quels sont les symptômes principaux de la SLA bulbaire?
Perte de la fonction motrice lors de la déglutition ou de la mastication
Vrai ou faux? L’âge moyen d’apparition de la SLA est d’environ 55 ans. De plus environ 50% des patients SLA présentent des caractéristiques cliniques de démence frontotemporale (DFT)
Vrai
Quel est la prévalence de la SLA? (2)
- 1 personne sur 100 000/an
- Rapport de 2:1 des hommes affectés aux femmes. Par contre, après 65 ans c’est égaux
Quel est le pronostic de cette maladie?
L’espérance de vie est de 3 à 5 ans après le diagnostic
Quelles sont les conséquences de perte de projections des motoneurones (dans le cadre de la SLA)?
Moins qu’il y a de projection, moins qu’il y a de myéline. Les messages sont donc beaucoup plus lent.
De plus, les muscles s’atrofi à cause de la connexion entre les neurones et les muscles
Réviser la diapositive 112
Ok
Comment caractérise-t-on la SLA juvénile?
La SLA juvénile se caractérise par des inclusions basophiles. On dit alors que c’est une protéinopathie FUS
Réviser la diapositive 113
Ok
Vrai ou faux? Les motoneurones supérieurs et inférieurs des patients atteins de SLA présentent un raccourcissement dendritique et une diminution de la densité de la colonne vertébrale
Vrai
Vrai ou faux? Les modèles animaux de la SLA montrent une attrition dendritique et une perte synaptique au début de la maladie avant l’agrégation des protéines
Vrai
Réviser la diapositive 114k
Ok
Aller réviser les expériences décrites sur la SLA au SEPTHON LAB aux diapositives 115 à 123
Ok
