Cours 19

Question 1

Qu’est-ce que CEACAM1 (et leur structure)

Answer 1

Ce sont des molécules d’adhésion qui sont très glycosylées
Ils sont transmembranaires de type II (C-terminal cytosolique)
Posse un IgV et 3IGC
Peut soit etre C-terminal C (court) ou L (long, possède des immunoreceptor ITIM)

Question 2

Le CEACAM peut intéragir avec quels molécules (Igv)?

Answer 2

IdV avec un CEACAM sur le meme cellule ou avec une autre cellule

Il faut arreter la dimérisation Cis pour l’activer

Question 3

Quel est la stucture secondaire d’un IgV?

Answer 3

C’est un sandwich beta comprimé avec un feuillet ABED et GFCCC qui sont retenous par un pont salin

Question 4

Quel est le but de l’article? (2 buts)

Answer 4

Savoir la face où se passe la dimérization

Savoir l’effet de glycosylation de nos IgV sur sa dimérisation

Question 5

Comment les CEACAM1 IgV non-glycosylés sontproduits?

Answer 5

Dans des bactéries E.coli

Question 6

Comment les IgV glycosylés (de 3 sortes de glycosylation) sont formés&

Answer 6

Dans des cellules HEK293S

Met le avec endoglucosidase pour enlever des glycasn si voulu

Question 7

Comment les IgV non-glucylés sont observés en NMR?

Answer 7

On fait leur méida avec des 13N et 15C

Ensuite on fait HSQC de H et N

Question 8

Comment les IgV glycoslés sont observés en NMR?

Answer 8

On substitue les alanines avec des 13N (ils sont assezz dispersés) et on prend son spectre HSQC (transfert d’aimentation vers nos 15N)

Question 9

IMPORTANT: Qu’est–ce que les positions des alanines dans le spectre signifie?

Answer 9

Les positions changent presque pas donc la glycosylation ne change pas la structure 3D du IgV

Question 10

Qu’est-ce que le temps de correlation (TauC) trouvé par HSQC?

Answer 10

C’est le temps que prend une molécule de tourner d’un radiant
= moitié de la masse de protéine en KDA

Question 11

Les IgV non-glyc et glyc sont en monomères ou en dimères?

Answer 11

Non-glyc = monomère (6.5 ns)
Glyc = dimère (12.5)

Question 12

Est-ce que la présence de glycanes ajoute au TauC, donnant une fausse impression de dimérixation parfois?

Answer 12

Oui

Question 13

Comment on sait que c’est probablement un monomère en cas de glycolysation GlcNAc2 (2 raisons)

Answer 13

Une essai avec des N-glycan complets montre que le rapport de temps de correlation est dépendent sur la masse des glycans directement (mais pas exact)

La concentration de N-glycan n’a pas un grand effet sur les temps de correlations

Question 14

Qu’est-ce que la mutation de L18R dans ABED non-glycolysé signifie?

Answer 14

Il y a toujours la dimérization, donc ce n’est pas le site

Question 15

Qu’est-ce que la mutation de I91R dans GFccc non-glycolysé signifie?

Answer 15

Les IgV se monomérisent, ce qui signifie que GFCCC est la face de dimérisation.

Question 16

Comment le RDC fonctionne?

Answer 16

Le RDC est une intéraction directe entre deux noyaux qui ont un alignement partiel de leur champ magnétique.
Si on le compare avec la direction du champ magnétique externe, on peut voir l’orientation spatiale des liaisons (des protéines).

Question 17

Quels est le point d’avoir des deux média pour RDC?

Answer 17

les deux médias sont utilisés pour trouver une axe de symétrie pour les dimères symétriques présentes. Ils donnent des orientations différentes de tenseur d’alignement.

Question 18

Qu’est-ce que les graphiques de RDC observé vs. calculé nous montre?

Answer 18

Chaque point représente un 1H15N amide particulier.
Ca nous montre comment le dimère bouge de facon différente (alignement différente) dans plusieurs environnements
Avec des disques neutres (PEG) au lieu des phages (-), l’alignement n’est pas aussi large

Question 19

Qu’est-ce que les valeurs Q (facteur qualité) nous montre pour les RDC? ) = correspondance parfaite

Answer 19

Pour A, c’est 0.30 et pour B c’est 0.29. C,est très bon et ca nous montre que notre IgV est bien conservé en solution.

Question 20

Quel est le but de faire une projection Samson Flamstead? Comment ca fonctionne?

Answer 20

C’est pour trouver l’axe de symétrue de IdV dimérisé non-glycolysé.

Dans le cas d’un dimère dans un milieu légerement orientatant, l’un des axes de symétrie de la matrice (de tenseur d’alignemetn) DOIT coincider ave l’axe de symétrie du dimère, quel que soit le milieu.

Question 21

Quel est la rhombicité?

Answer 21

C’est l’assymétrie du mouvement du tenseur d’alignement

Question 22

Connaissant l’axe de symétrie, on a superposé ABED et GFCCC

Answer 22

ABED montre que les faces ABED se touchent s’ils serait en symtérie
Par contre GFCCC montre que la dimérization marche

Question 23

Quels sont les points de contact qui font les dimères entre les GFCCC

Answer 23

V
La longue boucle C C prime possède les acides aminés:
F fait un empilement pi (important)

Question 24

Les glycolysations sont loins de la face de dimérization. Comment ca cause la monom`risation?

Answer 24

C’est pensé de peut etre est faite par un effet lococal rpopagée.

Question 25

Qu’est-ce que le RMN de déplacement chimique très grand signifie

Answer 25

La strcture est presque tous en feuillets beta

Question 26

Qu’est-ce que l’étude de 2019 signifie?

Answer 26

La surface GDCCC a bcp d’a.a impliqués avec l’intéraction des ligands d’autres rx,

Question 27

Comment les mesures de RDC ;a partir de TROSY sont faits?

Answer 27

C’est fait en conditions isotropiques et en conditions avec l’alignement partie (en présence de battonets ou phages)