Cours 18 Flashcards

1
Q

Les archées du superembranchement TACK sont

A

Pensés d’avoir les ancetres des eucaryotes
Possèdent des PTM comme glycolysation très similaires à nous
Leurs enzymes sont très diversifiées

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2
Q

Qu’est-ce qu’on étudie dans cet article?

A

La structure et fonction d’un glycosyltransférase de P. calidifontis qui crée un N-glycane similaire aux eucaryotes

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3
Q

Qu’est-ce que rend le N-glycan de P. calidonfontis si important? Qu’est ce que rend sa structure différente?

A

Elle est très similaire au N-glycan eucaryotes.
Elle possède un porteur où elle s’assemble DolP ou PP
alpha1-4 entre GlcNac au lieu de beta1-4
Possède un coeur de chitobiose (chitine)

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4
Q

Où s’assemble le N-glycan chez les archés et les eucaryotes

A

DolPP dans face cytoplasmique du RE et translocation vers ER (eucaryotes)
DOlP ou DolPP dans face cytoplasmique

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5
Q

Comment le mannosyltransférase fonctionne?

A

Il donne un mannose d’un donneur `à un accepteur de mannose

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6
Q

Quels sont les types de donneur de mannose?

A

Leloir: Sucre-nucléotide (comme GDPaMan)

Non-leloir: Sucre-nonnuclétoide (comme sucrePPdolichol)

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6
Q

Comment sont fait le Dol P ou PP

A

C’est fait par le DPMS ce qui est lipide-dépendante (dolp mannose synthase)

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7
Q

Quels sont et que font les détergents?

A

Ce sont LSAO et LAPAO

Ils créent des bicelles ou nos protéines seront stables

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8
Q

Comment les bicelles sont faits? Pourquoi?

A

C’est fait avec les détergents, apoA et des phospholipides, pour créer un environnement plus stable pour notre GT transmembranaire

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9
Q

Quels sont les lipides utilisés dans l’étude

A

PG et PS ont une charge négative

PC Pe et PEG

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10
Q

La cristallisation de rayon X nous a donné la structure de l’enzyme avec GDP et Mn2+. Elle contient?

A
La partie catalytique
3 hélices transmembranaires (TMH1-3)
2 hélices interface 
1 hélice sub-interface
Mn2+ a été vue comme nécessaire après des tests de cation (augmente Ka)
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11
Q

Quels boucles (qui bougent souvent pendant catalyse) sont importantes?

A

Boucle A large qui bouge pendant catalyse

Boucle entre TMH 2 et 3

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12
Q

Quel est le but des tests de titrage calorimétrique isotherme?

A

Elle a donné des constantes de dissociation entre:
les nucléotides et PcManGT
les sucres-nucléotides et PcManGT

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13
Q

Qu’a donné les tests de iso…. ITC

A

Le donneur de mannose est un GDP-Man donc l’enzyme est un enzyme Leloir

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14
Q

La crystallisation en rayon X de PcManGT+Mn+GDP sans et avec Man avait comme but de?

A

Trouver comment le ManGDP intéragit avec le PcManGT dans les bicelles.

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15
Q

Quels sont les intéractions en absence de mannose

A

Motif DAD lie bien le ribose
D137 et Mn2+ coordine le diphosphate
D135 empile le ribose (ce qui empile un proline)

Le Guanoside = liaisons H avec SR
OH de ribose = liaison H avec PYQ

16
Q

Quels sont les intéractions en présence de mannose

A

La constante d’affinité augmente
Là, c’est D135 et non D137 qui lie au Mn2+
R112 se lie aux guanine

17
Q

Pourquoi le guanine (et non les autres nucléotides) est spécifique pour l’entrée?

A

C’est car le guanine fait des empilements et il y a une profusion d’intéractions avec le guanine (le donneur en général)

18
Q

Quels sont les effets des lipides sur LLO quand ca vient à la stabilité thermique de PcManGT et DPMS?

A

Dol55 et 95P augmente stabilité
PS et PG négative augmente aussi
PC et PE neutre ont pas d’effet

19
Q

Quel est le point de tester les enzymes en présence ou absence de PS, DOl95P, et bicelles?

A

C’est pour trouver si elles augmentent l’activité de clivage de GDP-Man

20
Q

Le mutant D135 ou 137A a

A

Eu aucune activité qui montre l’importance de DAD

21
Q

En présence de glucose, l’activité…

A

n’était pas présente.

Mais en comparaison avec mannose, GDP-Man est plus INSTABLE

22
Q

En présnce de PS, l’activité

A

Reste pareil mais ca stabilise thermiquement l’enzyme

23
Q

En présence de Dol 55 ou 95 P, l’activité

A

augmente (en absence ou préence de PS)

La longueur du Dol ne dérange pas

24
Q

En présence de bicelle et Dol 55 et 95, l’activité

A

Augmente beaucoup!!

25
Q

En comparaison avec les autres enzymes avec la meme topologie, est-ce que DAD est conservé?

A

Oui

26
Q

RsBscA (cellulose synthase) ressemble PcManGT mais possède 6 TMH au lieu de 3. Quel est son but et que fait sont boucle?

A

Elle synthèse le cellulose (une longue chaine) qui va dans le tunnel de 6 TMH.

En présence de ligand, le boucle TMH1-2 recouvre l’ouverture du site de transfert, ce qui montre l’implication du boucle,

27
Q

Que suggère le RsBSCA pour le PcManGT

A

La moitié structure de TM de PcManGt est un endroit ou le DolPP long pourrait se retrouver.