COURS 11

Question 1

quantité et pureté requise en immunologie

Answer 1

ug-mg et haute pureté

Question 2

quantité et pureté requises pour la structure (cristallographie)

Answer 2

mg-g et haute pureté

Question 3

cette utilisation nécessite des g-kg et une très haute pureté

Answer 3

pharmaceutique

Question 4

quantité et pureté requises pour utiliser des enzymes industriels

Answer 4

kg-tonnes et pureté variable

Question 5

Comment augmenter la production d’ADN?

Answer 5

Augmenter le taux de transcription

Question 6

étapes générales pour purifier une protéine

Answer 6

1. lyse cellulaire
2. centrifugation du débris cellulaire et composants insolubles = on garde fraction soluble sans débris
3. précipitation des acides nucléiques (liquide visqueux= ADN + ribosomes éliminés) = reste fraction protéique
   4.séparation brute par précipitation = reste fraction protéique enrichie
4. chromatographie en phase liquide= protéine purifiée

Question 7

Nommer 5 procédés de séparation utilisé pour séparer des protéines

Answer 7

1. précipitation (sulfate d’ammonium et polyéthyènelimine)
2. chromatographie
3. électrophorèse
4. centrifugation
5. ultrafiltration

Question 8

2 méthodes principales de lyse cellulaire et leur désavantage

Answer 8

1. Physique (Gel/dégel, pression: sonication, french press)
   Désavantage: possibilité de dénaturation
2. Chimique/enzymatique (lysozyme+nucléases) Désavantage: moins de chances de dégradation; volumes plus larges

Question 9

Pourquoi précipiter

Answer 9

1. préparer les cellules à une prochaine étape (ex. chromatographie)
2. méthode de purification pour éliminer de la concentration
3. concentrer les protéines

Question 10

molécule la plus utilisé pour précipiter

Answer 10

sulfate d’ammonium permet une précipitation stable

Question 11

“salting out”

Answer 11

les changements de la concentration de sel en solution peuvent avoir un effet sur la solubilité des protéines

Question 12

qu’est-ce qu’un ion kosmotropique

Answer 12

ion stabilisant

Question 13

qu’est-ce qui arrive si on utilise de l’urée pour précipiter?

Answer 13

augmenter la concentration = dénaturation de la protéine, seulement la structure primaire est maintenue et solubilisation de la protéine précipitée

Question 14

qu’est-ce qu’un ion chaotropique

Answer 14

ion dénaturant

Question 15

Que faire si la solution a trop de sel

Answer 15

dialyse utilisant une membrane semi-perméable dans un tampon spécifique

Question 16

qui suis-je, même principe que la dialyse, sauf utilisant une centrifugeuse

Answer 16

ultrafiltration

Question 17

la charge des protéines dépend de quoi?

Answer 17

1. la séquence en a.a. (point isoélectrique)
   2.le pH de la solution

Question 18

Cette méthode de purification illustre des protéines qui interagissent avec une matrice avec des propriétés différentes

Answer 18

chromatographie

Question 19

comment calculer pI

Answer 19

différence entre la somme des a.a. acidiques - somme des a.a. basiques

Question 20

flow through (1er pic)

Answer 20

protéines qui ne collent pas

Question 21

Quelle est l’absorbance utilisée lors d’une chromatographie sur tamis moléculaire pour l’identification des fractions possédant des protéines

Answer 21

280nm

Question 22

lors de la chromatographie sur tamis moléculaire quelle est l’ordre d’élution des protéines

Answer 22

grosses protéines, moyennes, petites

Question 23

cette méthode permet aussi de faire des dosages enzymatiques

Answer 23

chromatographie sur tamis moléculaire

Question 24

combien d’a.a. sont hydrophobes sur 20

Answer 24

8

Question 25

vrai ou faux, la majorité des a.a. hydrophobes sont cachés à l'intérieur de la protéine

Answer 25

vrai

Question 26

type de gradient utilisé lors d'une chromatographie aux interactions hydrophobes

Answer 26

Gradient décroissant [Beaucoup sel]-->[Moins sel]-->0

Question 27

cette méthode est souvent utilisé après l'étape de traitement au sulfate d'ammonium

Answer 27

chromatographie aux interactions hydrophobes

Question 28

Qui suis-je, basée sur des liaisons spécifiques d'une protéine pour un ligand

Answer 28

chromatographie d'affinité

Question 29

l'immunoaffinité (Ag-Ac) appartient à quel type de chromatographie

Answer 29

chromatographie d'affinité