Cour 8 - Autoimmunité I Flashcards
Auto-immunité - Généralités
Quelles cellules sont dirigé contre le corps (leurs Ac) dans une réponse autu-immunitaire?
Les maladies auto-immunes sont des états pathologiques causés par une réponse auto-immunitaire a__________e.
Affecte plus la femme ou l’homme? En dessous de quel âge?
Quel est la 1ère étape pour le Dx de ces maladies?
Cellules T & cellules B
Les maladies auto-immunes sont des états pathologiques causés par une réponse auto-immunitaire adaptative.
La femme < 65 ans
La démonstration d’auto-Ac est généralement la 1ère étape pour le Dx de ces maladies.
Auto-immunité - Généralités
Auto-Ac sont communs chez les individus immunologiquement ‘‘______’’ (peuvent _ de façon non spécifique durant une infection, une maladie ou une blessure).
La présence d’auto-Ac ne permet-elle d’établir une relation de cause à effet?
La présence ou l’absence d’auto-Ac a une grande valeur pour le Dx et le pronostic?
Auto-Ac sont communs chez les individus immunologiquement ‘‘normal’’ (peuvent ↑ de façon non spécifique durant une infection, une maladie ou une blessure).
La présence d’auto-Ac ne permet pas nécessairement d’établir une relation de cause à effet considérant que ceux-ci peuvent être le résultat d’une maladie en développement.
La présence d’auto-Ac a une grande valeur pour le Dx et le Px.
Contexte de l’auto-immunité
Les auto-Ac peuvent être présents plusieurs _______ avant le Dx d’une maladie.
IMPORTANT à prendre en considération pour Dx
Auto-Ac présence associé à:
1.
2. H…
3.
4. Présence de…
Les auto-Ac peuvent être présents plusieurs années avant le Dx d’une maladie.
IMPORTANT à prendre en considération pour Dx
Auto-Ac présence associé à:
1. Information génétique
2. Histoire familiale
3. Signes/symptômes cliniques
4. Présence d’auto-Ac pour un désordre auto-immunitaire peut être hautement prédictif des conditions qui se développeront dans le futur.
Les études démontrent que l’incidence des maladies auto-immunes augmentent chaque année.
Pourquoi cette augmentation au Canada? (2)
On fait bcp plus de dépistage.
On n’a pas les même cut-off Dx.
Quel sont trois paramètre favorisant le développement de désordres auto-immuns ?
- Génétique
- Environement (Infections, stress, pollution, gluten, Mx)
- Facteurs endogènes (Puberté, grossesse, ménopause, microbiome, déficience vitaminique)
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
L’approche par immunofluorescence indirecte (IIF) est caractérisé par… Une bonne ou une mauvaise spécificité?
Une bonne ou une mauvaise sensibilité?
Comment amélioré ce dosage? (2 mesures à prendre)
La sensibilité n’est pas très bonne (bcp de faux +)
Excellente sensibilité (peu de faux négatifs)
Pour améliorer le dépistage:
1. Avoir de bonnes indications au dépistage (clinique et biologique évoque un état auto-immun).
2. Évaluer les profils et la concentration des Ac anti-nucléaires.
ie: Les faux positifs sont rarement à des taux très ↑.
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Quel type de cellules est utilisé en laboratoire pour le dépistage d’Ac Anti nucléaire par IIF? Pourquoi?
Ces cellules ont des propriétés qui permet de mettre en relief plus de 200 auto-Ac dirigés contre des antigènes n______s, c_________s et m__________s.
Cellules Hep-2 fixées sur lame
Lignée cancéreuse qui ont cycle de meillose/mitose présent. Certains Ac se fixe seulement dans certains phases du cycle cellulaire.
Ces cellules ont des propriétés qui permet de mettre en relief plus de 200 auto-Ac dirigés contre des antigènes nucléaires, cytoplasmiques et membranaires.
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Décrit les 5 étapes Thierry
1)
2)
3)
4)
5)
1) Dépôt de l’échantillon sur une lame qui contient des cellules exprimant l’Ag ciblé par l’auto-Ac (IgG ANA)
2) Lavage pour retirer les Ac non fixés aux cellules
3) Incubation avec des Ac anti-IgG marqués à la fluorescéine qui fixeront les IgG ANA.
4) Lavage des Ac non fixés
5) Lecture au microscope des profils
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
On peut divise les profils de observer au microscope en quatre catégories. Quel sont-elles?
Combien de scénario/profil y a-t-il?
Négatif, nucléaire, cytoplasmique et mitotique.
29 profils
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Qualitatif
Comment identifier quel type d’auto Ac est présent?
Comment évaluer le titre?
Le patron cellulaire permet d’identifier un ou plusieurs auto-Ac possible.
L’intensité de la fluorescence en comparaison à un contrôle permet d’attribuer un titre/concentration.
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Cycle cellulaire - Quel phase de la méiose est-ce que c’est ici?
Pendant cette phase, la chromatine se condense. La membrane nucléaire disparaît pendant que la cellule passe en métaphase.
L’intervalle entre la naissance d’une cellule et le moment où elle se divise à nouveau. Cette phase comprend 2 phases de croissance (G) et une phase de synthèse de l’ADN (phase S).
Les chromosomes atteignent les pôles. La membrane nucléaire commence à se rassembler. La cellule ne s’est pas divisée.
Les chromosomes sont alignés au centre de la cellule.
Les chromatides (bras chromosomiques) se séparent et sont tirées
vers les pôles.
Prophase
Interphase
Télophase
Métaphase
Anaphase
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Cycle cellulaire - Dans quel ordre en partant de l’interphase est-ce que ces phases vont?
- Interphase
Prophase
Télophase
Métaphase
Anaphase
La plupart des cellules sur une lame en IIF sont en quelle phase?
Quel antigène est exprimés à ce cycle la?
Les antigènes qui sont exprimés pendant des périodes limitées du cycle cellulaire sont nommés antigènes …
- Interphase
- Prophase
- Métaphase
- Anaphase
- Télophase
La plupart des cellules sur lame son en interphase. PCNA.
Antigènes dépendants du cycle cellulaire
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF - Cycle cellulaire
Qu’est-ce qui se passe à l’interphase? Comprend 2 phases de? et une phase de ?
Qu’est-ce qui se passe à la prophase? (2)
Qu’est-ce qui se passe à la métaphase?
Qu’est-ce qui se passe à la Anaphase?
Qu’est-ce qui se passe à la Télophase? (2)
Interphase: L’intervalle entre la naissance d’une cellule et le moment où elle se divise à nouveau. Cette phase comprend 2 phases de croissance (G) et une phase de synthèse de l’ADN (phase S).
Prophase: Pendant cette phase, la chromatine se condense. La membrane nucléaire disparaît pendant que la cellule passe en métaphase.
Métaphase: Les chromosomes sont alignés au centre de la cellule.
Anaphase: Les chromatides (bras chromosomiques) se séparent et sont tirées vers les pôles.
Télophase: Les chromosomes atteignent les pôles. La membrane nucléaire commence à se rassembler.
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Coloration des microtubules par la? Coloration de couleur?
Coloration des chromosomes par ? Coloration de couleur?
Rouge : coloration des microtubules via la Rhodamine
Vert : coloration des chromosomes via le colorant d’ADN Hoechs
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Quelle image en coin représente quelle cycle cellulaire?
Prophase, Télophase, Métaphase et Anaphase
Coin en haut à gauche: Prophase (picots)
Coin en haut à droite: Métaphase (super fluo)
Coin en bas à gauche: Télophase (2 bandes vertes éloignées)
Coin en bas à droite: Anaphase (2 bandes vertes large et rapprochés)
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
A-F quelles cellules sont en division?
A-F quelles cellules sont au repos?
G) Profil: N_______ (H________e et/ou m________é)
A) Cellules au repos ont une fluorescence uniforme.
B) Cellules en cours de division, la fluorescence de la chromatine est
uniforme et intense.
C) Les noyaux des cellules au repos ont une fluorescence mouchetée.
D) Cellules en cours de division, PAS de fluorescence intense.
E) Les noyaux des cellules au repos ont de nombreux grains discrets.
F) La chromatine des cellules en cours de division a une fluorescence en ‘‘zipper’’.
G) Sur les noyaux des cellules au repos, les régions nucléolaires sont colorées.
Profil: Nucléolaire (homogène, moucheté)
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Associé A-F aux bonnes caractéristiques
Caractéristiques:
-Nucléolaire (homogène, moucheté)
-Anti-Points nucléaires
-Anti-centromère
-Homogène
-Moucheté granulaire
-Anti-membrane périphérique
A & B; Homogène
C & D; Moucheté granulaire
E & F; Anti-centromère
G; Nucléolaire (homogène, moucheté)
H; Anti-membrane périphérique
I & J; Anti-Points nucléaires
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Quel différence entre un profil d’ac anti nucléaire et cytoplasmique?
Cytoplasmique :
-Plusieurs profils (ex: diffus, moucheté fin, granulaire, etc.)
-Anti-Jo1 (anti-Histidyl-ARNt synthétases)
-Anti-SRP
-Anti-mitochondrie
-Anti-muscles lisses
-Anti-Golgi (Sjögren)
-Anti-Ribosome P (neurolupus )
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Évaluation de l’intensité des lames
Comment savoir si la fluorescence d’un sample est suffisante pour être considéré comme étant positive? Comment tu arrange ton __?
Si l’intensité du CQ est correcte, __ % seulement des échantillons
normaux analysés devraient indiquer une intensité ≥ à celle du CQ.
Tu utilise un CQ. L’intensité d’un CQ est fixée a/n de fluorescence minimum considéré comme (+).
Si l’intensité du CQ est correcte, 5 % seulement des échantillons
normaux analysés devraient indiquer une intensité ≥ à celle du CQ.
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
Évaluation de l’intensité des lames
La concentration d’Ac est mesurée _____-quantitativement en tant que
«_____». Analyse de d_____s de sérum du patient. À mesure que l’Ac est d____, l’intensité de la fluorescence _. La plus forte d_____n de sérum qui produit une fluorescence ≥1+ est nommée ‘‘point de fin de titrage’’.
Si l’on utilise un CQ, la dilution la plus _ de l’échantillon qui produit une fluorescence équivalente au CQ s’appelle le titre.
La concentration d’Ac est mesurée semi-quantitativement en tant que
«titre». Analyse de dilutions de sérum du patient. À mesure que l’Ac est dilué, l’intensité de la fluorescence ↓. La plus forte dilution de sérum qui produit une fluorescence ≥1+ est nommée ‘‘point de fin de titrage’’.
Si l’on utilise un CQ, la dilution la plus ↑ de l’échantillon qui produit une fluorescence équivalente au CQ s’appelle le titre.
Dosage des AAN (Ac anti-nucléaires) - IIF
IMPORTANT
Interprétation de profils à l’IIF:
Connaissances de base :
1) Connaître les e…
2) Connaître le r…
3) Connaître les p…
Étapes/stratégies de l’interprétation :
1) Évaluation du …
2) Com…
3)
Connaissances de base :
1) Connaître les entités cellulaires (organites, localisations/domaines cellulaires, etc.)
2) Connaître le rôle/fonction des éléments cellulaires.
3) Connaître les phases du cycle cellulaire, ainsi que leurs résentations au microscope.
Étapes/stratégies de l’interprétation :
1) Évaluation du profil (patron et intensité de la fluorescence)
2) Comparaison avec un profil contrôle sur la lame
3) Tests réflex selon des algorithmes (en fct. de la pertinence clinique)
Dosage des ENA - Méthode semi-quantitative
Méthode FEIA
Différence entre FEIA et ELISA?
Quel sont les 6 étapes?
- I…
- L…
- I…
- L…
- I…
- M…
L’essai immunoenzymatique (Fluorescence Enzyme ImmunoAssay (FEIA)) est basé sur le même principe que la méthode ELISA, mais ici nous utilisons un marqueur fluorescent pour la révélation.
Étapes:
1. Sérum (auto-Ac) + Ag (immob) → incubation
2. Lavage (Élimine protéines non fixées).
3. Ajout 2ième Ac marqué avec enzyme → incubation.
4. Lavage (Élimine Ac non fixés sur les Ag).
5. Ajout d’un substrat pour l’enzyme liée → incubation.
6. Mesure de la fluorescence émise qui sera proportionnelle à la concentration d’auto-Ac.
Dosage des ENA - Méthode quantitative Multiplex
Immobilisation d’un? Sur des?
Quel technique est-ce que ca exploite?
Chaque micro_____ est d’une différente c______.
Immobilisation d’Ac spécifique à une Auto-Ac pour chaqie microbille magnétique.
ELISA+cytomètre de flux
Chaque microbille est d’une différente couleur.
Dosage des ENA - Méthode quantitative Multiplex
Quel sont les 7 étapes?
- A.A.
- A.D.+I
- L…
- I…
- L…
- Resu
- Étape la plus importante à bien décrire/comprendre
1) Ajout automatique de l’éch du patient (5 µL) au récipient de rx
2) Ajout du diluant d’écha & des billes, Δ 37°C
3) Lavage
4) Ajout du conjugué, puis Δ 37°C
5) Lavage
6) Resuspension des billes dans le tampon de lavage
7) Le mélange de billes passe au travers du détecteur, où un laser identifie l’analyte des billes et un autre mesure la concentration de
l’analyte.
Associe au bon patron:
Lupus érythémateux disséminé (LED)
Lupus érythémateux cutané chronique
Lupus érythémateux cutané subaigu
Diagnostic du LED
Critère Dx de la SLICC 2012 demande quoi pour dx?
Critères Dx de la 2019 European League Against heumatism/American College of Rheumatology classification criteria for systemic lupus erythematosus demande quoi pour Dx?
Présence de ≥ 4 critères sur 17
Doit inclure :
≥ 1 critère clinique et
≥ 1 critère immunologique
OU
Une biopsie positive pour une glomérulonéphrite lupique anti-DNdb+
Présence de ≥10 points
Doit inclure :
Positivité d’ANA (≥1:80) et
≥ 1 critère clinique et
≥ 1 critère immunologique
Diagnostic du LED version facile
Se caractérise par quoi au laboratoire?
Indices
FSC(…)
Auto-Ac (6) augmente ou diminue?
Si atteintes au foie 3 analytes changent…
CRP?
Complément?
Protéinurie?
Procédure chirurgicale commune au SLICC…
Diagnostic du LED version difficile
Se caractérise par quoi au laboratoire? (7)
Sclérodermie
Quels sont les types de sclérodermie?
Sclérodermie Localisée (ScL) (forme en coup de sabre/linéaire)
Sclérodermie Systémique (ScS) Limitée (Syndrome de CREST)
Sclérodermie Systémique (ScS) Diffuse
Diagnostic de Sclérodermie systémique (ScS)
Critères Dx établis par un score:
Patient ayant un score ≥_ est diagnostiqué avec une ScS
La forme _______ associée à une atteinte des organes internes plus précoce (≤ 5 ans).
Ac Scs diffus vs limité ?
Patient ayant un score ≥9 est diagnostiqué avec une ScS.
La forme diffuse associée à une atteinte des organes internes plus précoce (≤ 5 ans).
Diagnostic de Sclérodermie systémique (ScS) au labo
Associe aux patrons stp.
Nucléolaire h…
Nucléolaire gr…
Centromérique…
Nucléolaire m…
Polyarthrite rhumatoïde Dx
Commence par exclure quoi?
Au minimum il faut avoir au moin 1 quoi?
Dosage de quels analytes et Ac qui augmentent?
Dosage des ANA (+) : ? (2)
Le dx est surtout clinique ou analytique (dosage)?
Toutes les autres pathologies pouvant provoquer des douleurs articulaires. Ex: goutte, arthrose
Il faut avoir au moins 1 articulation qui présente une synovite cliniquement certaine (gonflement - inflammation de l’enveloppe).
Facteur rhumatoïde, Ac antipeptide anticyclique citrulliné
(anti-CCP) et CRP
Dosage des ANA (+) : anti-Histone, U1-nRNP
Dx est surtout clinique.
Polyarthrite rhumatoïde Dx
Polyarthrite rhumatoïde ou arthrose
Les cercles noirs indiquent les zones à investiguer et leurs grosseurs le degré d’importance.
Profil IIF?
Les cercles noirs indiquent les zones à investiguer et leurs grosseurs le degré d’importance.
Profil nucléaire homogène pour IIF.
Maladie du tissu conjonctif indifférencié (UCTD)
C’est quoi?
C’est quand les patients ne remplissent pas les critères diagnostiques établis pour une maladie en particulier…
