Clon y transfo de bacterias Flashcards
Transformación de bacterias
Paso clave para clonar ADN, las copias de ADN se hacen en las bacterias.
Clonación de ADN
Proceso de hacer muchas copias de una parte de ADN , estas copias se suelen hacer en bacterias. La parte del ADN se inserta en un plásmido con enzimas de restricción y ligasas (cortan y pegan), se obtiene ADN recombinante
ADN RECOMBIANNATE
ADN ensamblado de
fragmentos provenientes de múltiples fuentes
Extremos cohesivos al unir las partes de ADN recomb
Se juntan pero quedan huecos
Extremos ROMOS al unir las partes de ADN recomb
Ligasa sella huecos.
Ejemplos enzimas restri y liagndo
Enzima EcoRI
Enzima SmaI
Ligasa ADN
Pasos de transformación de bacterias
En un vial con los plasmidos, hay genes con resistencia antibióticos (ampicilina), tendrá un elemento que va hacer una luz verde brillante, el marcador.
Ventajas de bacterias con el organismo antibiotic agregado
Van a crecer bacterias a pesar de haber antibx en algún cultivo.
Verdes fluorescentes con arabinosa.
Partes de un plasmido
Gen blanco
Gen de resistencia a antibx
Promotor para estimular expresión génica.
Errores en la transformación de bacterias
El plásmido se cierra antes de tiempo.
El gen entra en sentido inverso.
El ADN plasmídico de qué nos sirve?
se usa en pasos posteriores para clonar ADN (construir plásmidos complejos) o en diversos experimentos.
Ensayos clínicos de terapia genética en px con fibrosis quística.
Cómo de produce una proteína en bacteria?
La colonia crece
Se induce en expresión del gen bacteriano.
El gen se transcribe a ARNm
El ARNm se traduce a proteinas
