Chapitre 6 Flashcards
Qu’est-ce que la cinétique enzymatique?
C’est l’étude des paramètres cinétique d’une enzyme par le suivi de la réaction enzymatique
Quels sont les principaux paramètres qui sont analysés?
Vmax, Km, la température optimale, le pH optimale
L’activité enzymatique peut être influencée par quoi?
1- des propriétés spécifiques à l’enzyme (concentration des substrats, activateurs et inhibiteurs)
2- par des effets non spécifiques (des sels et tampons, pH, force ionique, température, et dans certains cas d’autres protéines)
Que représente la Kcat (turn over number)?
Nombre de molécules de substrat transformées par chaque molécules d’enzyme par seconde
Que représente Km?
La quantité de substrat nécessaire pour atteindre la moitié de la vitesse maximale
Quels sont les trois types d’inhibiteurs?
1- Inhibiteur compétitif
2- Inhibiteur incompétitif
3- Inhibiteur non-compétitif
Inhibiteur compétitif?
Compétition avec le substrat pour fixer le site actif de l’enzyme (Vmax ne change pas, le Km augmente)
Inhibiteur incompétitif?
Se lie au complexe Enzyme-Substrat (Vmax et Km diminuent)
Inhibiteur non-compétitif?
Se lie à l’enzyme libre et au complexe enzyme-substrat (Km reste le même, Vmax diminue)
Les valeurs de Km et Vmax peuvent être influencées par quels paramètres?
Le pH, la température et la force ionique
pH?
La valeur maximale de l’activité enzymatique de certains enzymes peut être très loin du pH physiologique.
Force ionique?
Certains tampons peuvent agir comme inhibiteur
Température?
Incuber l’enzyme à haute température permet d’accélérer l’activité enzymatique sans nécessairement dénaturer celle-ci
Quelles sont les méthodes utilisées afin d’analyser l’activité enzymatique?
1- Méthodes discontinues
2- Méthodes continues
Expliquer la méthode discontinue
1- L’enzyme est incubé dans le substrat et la réaction est ensuite arrêtée
Quelle relation mathématique est importante à vérifier lors de la réaction enzymatique?
Relation linéaire (concentration de produit en fonction du temps)
Quelles sont les méthodes utilisées afin de provoquer une dénaturation instantanée de l’enzyme?
1- Précipitation par acide trichloroacétique ou perchlorique
2- Dénaturation thermique
3- SDS
4- Méthodes non-dénaturantes qui inactivent l’enzyme
5- Changement de pH
6- Ajout de EDTA
Que peut-on faire lorsque les produits sont difficiles à détecter?
1- Convertir le produit directement ou indirectement en un autre produit qui est plus facile à détecter
2- Spectrophotométrie
3- Fluorométrie
Qu’est-ce que la spectrophotométrie?
Mesurer l’absorbance ou la densité optique d’une substance chimique donnée.
Quel est le but de cette méthode?
La détection du produit final dépend de la production d’un chromatophore ou fluorophore important et qui est
facile à détecter.
Détection directe?
Un des produits de la réaction absorbe la lumière
Détection indirecte?
Ajout d’une enzyme qui utilise le produit de la réaction pour former du NADH par couplage avec une autre réaction.
Expliquer la méthode continue?
Le progrès de la réaction est observé pendant toute la réaction et généralement de manière instantanée
