Chapitre 3

Question 1

Qu’est-ce que l’électrophorèse?

Answer 1

C’est la migration d’ion à travers un champ électrique

Question 2

VRAI OU FAUX

Pour qu’une molécule puisse migrer, Félectrique > Ffriction

Answer 2

VRAI

Question 3

Donner l’équation de la force électrique.

Answer 3

Félectrique = qE

Question 4

Donner l’équation de la force de friction

Answer 4

Ffriction = vf

v= vitesse de migration
f= coefficient de friction

Question 5

Le coefficient de friction dépende de quoi?

Answer 5

De la taille, de la forme de l’ion et de la viscosité de la solution

Question 6

Comment appelle-t-on la vitesse à laquelle un ion se déplace?

Answer 6

La mobilité électrophorétique
u = v / E = q / f

Question 7

VRAI OU FAUX

Au point isoélectrique, la mobilité électrophorétique est maximale

Answer 7

FAUX

Elle est nulle (q=0)

Question 8

Qu’est-ce que l’électrophorèse en zone?

Answer 8

L’échantillon se déplace dans une phase solide comme le papier filtre, la cellulose ou un gel

Question 9

Quels sont les avantages de cette technique?

Answer 9

1- On élimine l’agitation crée par la convection
2- Faible quantité de matériel

Question 10

De quoi est constitué le gel utilisé pour l’électrophorèse sur gel?

Answer 10

L’agarose et le polyacrylamide (constitués de pores)

Question 11

La séparation des protéines est basée sur quoi?

Answer 11

1- La mobilité électrophorétique
2- principe de filtration sur gel (tailles moléculaire)

Question 12

VRAI OU FAUX

Les protéines les plus grosses migreront en premier dans un gel d’électrophorèse

Answer 12

FAUX

Ce sont les plus petites qui passeront en premier

Question 13

Quel tampon faut-il utiliser afin de procéder au processus d’électrophorèse?

Answer 13

Un tampon ayant un pH d’environ 9 afin que toutes les protéines aillent une charge négative.

Question 14

Par quelles procédures doit-on passer afin d’augmenter la résolution?

Answer 14

1- Un gel de séparation (running gel)
2- Un gel de concentration (stacking gel)

Question 15

Quelle est la particularité du gel de concentration?

Answer 15

A une plus grande porosité que le gel de séparation

Question 16

VRAI OU FAUX

Les Tampons sont pareils dans tous le gel d’électrophorèse

Answer 16

FAUX

Le Tampon dans le gel de concentration à un pH d’environ 2 unités de moins

Question 17

VRAI OU FAUX

Les protéines migrent beaucoup plus rapidement dans un gel de concentration

Answer 17

VRAI

Puisque le champ électrique est plus important

Question 18

Pourquoi?

Answer 18

Les ions rencontrent un pH inférieur à leur pKa, l’acide faible (glycine) devient neutre et immobile. Cela crée une haute résistance électrique (selon la Loi de Ohms E=IR).

Question 19

Par la suite, les protéines ralentissent dans le gel de séparation. Pourquoi?

Answer 19

Les anions atteignent le gel de séparation ayant un pH supérieur au pKa de la glycine. Alors, ils retrouvent leurs charges.

Question 20

Que permettent le gel de séparation et de concentration?

Answer 20

• Créer des bandes qui sont minces et ordonnées selon leur mobilité.
• Minimiser la diffusion dispersive des protéines.

Question 21

Que permet la présence de détergent, comme le SDS, dans un gel d’électrophorèse?

Answer 21

Permet de dénaturer la structure des protéines, chaque sous-unité de la protéine va avoir une conformation étendue

Question 22

VRAI OU FAUX

Grâce au SDS le rapport charge/masse sera le même pour toutes les protéines.

Answer 22

VRAI

Ce sera uniquement le phénomène gel-filtration qui permettra la séparation

Question 23

Pourquoi est-ce avantageux d’utiliser un gel SDS-PAGE?

Answer 23

1- Le SDS dissous les agrégats et les particules insolubles qui peuvent bloquer les pores
2- La mobilité électrophorétique possède une relation directe avec le poids moléculaire

Question 24

Quelles méthodes sont utilisées afin de visualiser la migration des protéines dans le gel?

Answer 24

1- Bleu de Coomassie brillant
2- Nitrate d’argent
3- Autoradiagraphie

Question 25

Quelle méthode de coloration est toutefois la plus spécifique?

Answer 25

Utilisation du Western Blot (utiliser un anti-corps qui reconnaît la protéine à l’étude)