Chapitre 3 Flashcards
Qu’est-ce que l’électrophorèse?
C’est la migration d’ion à travers un champ électrique
VRAI OU FAUX
Pour qu’une molécule puisse migrer, Félectrique > Ffriction
VRAI
Donner l’équation de la force électrique.
Félectrique = qE
Donner l’équation de la force de friction
Ffriction = vf
v= vitesse de migration
f= coefficient de friction
Le coefficient de friction dépende de quoi?
De la taille, de la forme de l’ion et de la viscosité de la solution
Comment appelle-t-on la vitesse à laquelle un ion se déplace?
La mobilité électrophorétique
u = v / E = q / f
VRAI OU FAUX
Au point isoélectrique, la mobilité électrophorétique est maximale
FAUX
Elle est nulle (q=0)
Qu’est-ce que l’électrophorèse en zone?
L’échantillon se déplace dans une phase solide comme le papier filtre, la cellulose ou un gel
Quels sont les avantages de cette technique?
1- On élimine l’agitation crée par la convection
2- Faible quantité de matériel
De quoi est constitué le gel utilisé pour l’électrophorèse sur gel?
L’agarose et le polyacrylamide (constitués de pores)
La séparation des protéines est basée sur quoi?
1- La mobilité électrophorétique
2- principe de filtration sur gel (tailles moléculaire)
VRAI OU FAUX
Les protéines les plus grosses migreront en premier dans un gel d’électrophorèse
FAUX
Ce sont les plus petites qui passeront en premier
Quel tampon faut-il utiliser afin de procéder au processus d’électrophorèse?
Un tampon ayant un pH d’environ 9 afin que toutes les protéines aillent une charge négative.
Par quelles procédures doit-on passer afin d’augmenter la résolution?
1- Un gel de séparation (running gel)
2- Un gel de concentration (stacking gel)
Quelle est la particularité du gel de concentration?
A une plus grande porosité que le gel de séparation
VRAI OU FAUX
Les Tampons sont pareils dans tous le gel d’électrophorèse
FAUX
Le Tampon dans le gel de concentration à un pH d’environ 2 unités de moins
VRAI OU FAUX
Les protéines migrent beaucoup plus rapidement dans un gel de concentration
VRAI
Puisque le champ électrique est plus important
Pourquoi?
Les ions rencontrent un pH inférieur à leur pKa, l’acide faible (glycine) devient neutre et immobile. Cela crée une haute résistance électrique (selon la Loi de Ohms E=IR).
Par la suite, les protéines ralentissent dans le gel de séparation. Pourquoi?
Les anions atteignent le gel de séparation ayant un pH supérieur au pKa de la glycine. Alors, ils retrouvent leurs charges.
Que permettent le gel de séparation et de concentration?
- Créer des bandes qui sont minces et ordonnées selon leur mobilité.
- Minimiser la diffusion dispersive des protéines.
Que permet la présence de détergent, comme le SDS, dans un gel d’électrophorèse?
Permet de dénaturer la structure des protéines, chaque sous-unité de la protéine va avoir une conformation étendue
VRAI OU FAUX
Grâce au SDS le rapport charge/masse sera le même pour toutes les protéines.
VRAI
Ce sera uniquement le phénomène gel-filtration qui permettra la séparation
Pourquoi est-ce avantageux d’utiliser un gel SDS-PAGE?
1- Le SDS dissous les agrégats et les particules insolubles qui peuvent bloquer les pores
2- La mobilité électrophorétique possède une relation directe avec le poids moléculaire
Quelles méthodes sont utilisées afin de visualiser la migration des protéines dans le gel?
1- Bleu de Coomassie brillant
2- Nitrate d’argent
3- Autoradiagraphie
Quelle méthode de coloration est toutefois la plus spécifique?
Utilisation du Western Blot (utiliser un anti-corps qui reconnaît la protéine à l’étude)
