chap 1 Flashcards
quels sont les 3 elements définissant la qualité d une image ?
- grossissement ( rapport taille objet/image)
- contraste ( difference entre densité la plus forte et la plus faible )
- resolution (taille du pixel)
qu est ce que la résolution?
distance minimale qui doit séparer deux objets pour qu ils apparaissent distincts
par quoi un microscope est il caractérisé ?
par sa résolution
qu est ce qu une lentille convergente ?
loupe, sa forme fait converger la lumière en un point
qu est ce que la distance focale ?
distance entre lentille et point vers lequel converge la lumiere
que nous permet de déterminer la distance focale ?
si la lentille est tres grossissante ou non
qu est ce qui fait que l image de l objet se trouvant derrière la loupe se trouve elle meme derrière l objet ?
la lentille a déplacée les faisceaux lumineux
qu est ce qu un microscope composé?
formé d au moins 2 lentilles convergentes –> multiplication des effets grossissants entres eux
quel est le probleme de l association de plusieurs lentilles ?
imperfection des differentes lentilles s additionnent
–> aberrations chromatiques, ne devie pas toutes les longueurs d ondes de la meme façon
qu est ce qu un microtome ?
objet permettant de faire des coupes tres fines
quelle a été la solution face aux aberrations chromatiques ?
lentille achromatique –> peu sensible aux différentes longueurs d ondes
qu est ce qu un verre Chrown?
classique–> verre qui fait converger la lumiere
qu est ce qu un verre Flint ?
special, prorates differentes–> ne dévie pas les differentes lumiere comme le chrown
que se passe t il si on met un Chrown suivi d un Flint ?
la deuxième lentille corrige les défauts de la première –> fait tout converger au meme point
quel est le constituant principal d un etre vivant ?
cellule
comment calcul t on la limite théorique d un microscope optique ?
resolution optimale = lambda/2–> moitié de la longueur d onde
si on grossi un objet, cela nous permet il de gagner en resolution ?
NON
quelle est la meilleure résolution d un microscope optique ?
200nm
quel est le principe d un microscope électronique ?
objet éclairé avec faisceau d électrons puis on compte les électrons qui sont passe a travers la lentille électromagnétique
quelle est la resolution d un microscope électronique ?
1nm
par quoi un faisceau d électron peut il etre arrêté ?
par de l air –> pas possible de regarder des cellules vivantes
quelle doit etre la largeur de la coupe pour que le faisceau d electron passe sans etre absorbé ?
100nm–> coupes extra fines
quelle est la source de la miscroscopie optique ? électronique ?
optique : photons
électronique : électrons
avec quel microscope peut on observer ds cellules vivantes ?
optique
quelle largeur les coupes doivent elles faire pour que les photons passent a travers ?
10-20µm
pourquoi le microscope optique est il plus pratique ?
plus simple, rapide et moins couteux, meme si moins bonne resolution
qu est ce que le fractionnement cellulaire ?
on exerce une force mécanique sur une cellule pour la “casser” puis centrifugation pour séparer les compartiments
dnas la centrigfuation, qu est ce que le surnageant et le culot ?
surnageant–> proteines libres
culot = compartiments au fond
en fonction de quoi sont séparés les compartiments ?
en fonction de leur densité
–> visible grace au gradient de sucrose
grace a quoi se fait l immunodetection ?
anticorps
comment proceed t on si l on veut détecter une proteine au milieu d un mélange complique de proteines ?
on injecte a un lapin des anticorps qui reconnaissent spécifiquement cette proteine –> devient immun a cette proteine
comment trouver un anticorps ?
immunofluoresence directe ou indirecte
premiere etape de l immunofluoresence directe ?
fixation–> on transforme le milieu liquide en gel ( oeuf dur )
deuxième etape de l immunofluoresence directe ?
permeabilisation ( saponine)–> faire des trous dans la membrane pour laisser passer des anticorps
troisième etape de l immunofluorescence directe ?
anticorps fluorescents–> diffuse partout dnas la cellule , se lie a la proteine et donc on peut l observer
quatrième etape de l immunofluroescence directe ?
observation –> illumination avec une certaine longueur d onde –> proteine fluorescente réemet une longueur d onde plus forte –> localisation de la proteine dans la gelée ( cellule )
qu est ce que l. immunofluorescence indirecte
au lieu de mettre directement l anticorps, on utilise deux anticorps qui reconnaissent la proteine
comment fonctionne l immunofluorescence indirecte ?
anticorps primaire reconnait proteine d intérêt du lapin, puis on utilise un anticorps de chèvre qui reconnait tous les ac du lapin, dejamarque en fluorescence par partie constante
–> ne necessite pas de marquage
comment peut on amplifier le signal ?
en utilisant des ac secondaire car plusieurs secondaires se lient a un primaire–> signal plus fort
qu est ce que la double immunofluorescence indirecte ?
meme principe mais Avec 2ac qui reconnaissent soit proteines X ou Y–> repérer 2 protéines dnas la meme cellule pour voir si sont au meme endroit ou non
comment fonctionne la double immunofluorescence indirecte ?
1 ac de lapin qui reconnait X et 1 ac secondaire de chèvre qui reconnait lapin–> lumiere rouge
1 ac de souris qui reconnait Y et ac chèvre qui reconnait souris –> lumiere verte
pourquoi la fluorescence ne se voit pas en microscopie électronique ?
pas de photons
donc pour voir cela avec immunofluorescence on accroche des particules d or –> métaux lourds arrêtent les électrons
qu est ce que la microscopie confocale ?
concentration de la lumiere a un oint de l échantillon –> si fluorescence, émet de la lumiere rouge, sinon pas de lumiere
qu est ce qu un voxel?
pixel en 3D
qu est ce que GFP?
proteine responsabile notamment de la fluorescence sur les méduses –> permet de rende une proteine fluorescente
absorbe vers 395 nm et renvoie vers 475nm
