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repro ii > bloque II: criobiología > Flashcards

bloque II: criobiología Flashcards

1
Q

qué tipo de célula se puede refrigerar

A

espermatozoides

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Q

qué tipo de célula se puede congelar rápidamente

A

espermatozoides

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3
Q

qué tipo de célula se puede congelar lentamente en equilibrio

A

espermatozoides y embriones

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4
Q

qué tipo de célula se puede vitrificar

A

ovocitos y embriones

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5
Q

temperatura de conservación en la refrigeración

A

4-5ºC
15ºC en porcino

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6
Q

objetivos refrigeración

A

previo IA como alternativa a la monta natural

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7
Q

especies en las que se utiliza la refrigeración

A
  • equino
  • porcino
    estos 2 porque no tienen buenos resultados con la congelación
  • ovino - porque si se congela, la IA sería invasiva
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8
Q

en bovino la refrigeración se usa poco

A

verdadero

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9
Q

métodos para minimizar/proteger frente al shock por frío

A
  • añadir protector/estabilizador de membrana al medio de refrigeración
  • velocidad lenta de descenso de temperatura
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10
Q

añadir protector/estabilizador de membrana al medio de refrigeración

A

sustancias que no penetran la membrana que estabilizan la bicapa mejorando su fluidez
yema de huevo, leche descremada, caseínas

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11
Q

composición medio de refrigeración

A
  • medio isotónico y tamponado
  • protectores de membrana
  • fuente de nutrientes y energía
  • antibióticos
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12
Q

función del medio isotónico en los medios de refrigeración

A
  • mantener pH neutro y presión osmótica adecuada
  • proporcionar volumen adecuado de IA
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13
Q

función protectores de membrana

A

estabilizar membrana plasmática
proteger de shock por frío

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14
Q

los primeros cristales de hielo aparecen en el medio EC porque

A
  • probabilidad de inicio de nucleación directamente relacionado con el tamaño del compartimento
  • membrana actúa como barrera que detiene el proceso de nucleación
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15
Q

cuando el medio IC se deshidrata y aumenta la concentración de solutos, su punto crioscópico

A

desciende

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16
Q

la criorresistencia depende de…

A

elementos intrínsecos y extrínsecos

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17
Q

los elementos intrínsecos de los que depende la criorresistencia son

A
  • relación superficie de membrana/volumen celular
  • composición y permeabilidad
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18
Q

el área disponible de membrana para el intercambio con el medio EC es mayor en

A

espermatozoides>embriones>ovocitos

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19
Q

respecto a la criorresistencia, qué tiene que ver la composición de la membrana

A

en función del número, tipo y distribución de acuaporinas, las células serán más o menos resistentes al proceso de congelación

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20
Q

qué acuaporinas son importantes en la congelación y por qué

A

las acuagliceroporinas - permiten el paso de glicerol, que es el crioprotector más usado en congelación de semen

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21
Q

los elementos extrínsecos de la criorresistencia dependen de

A

el protocolo de congelación

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22
Q

elementos extrínsecos de criorresistencia son

A
  • curva de descenso de Tº empleada
  • tipo y concentración de crioprotectores
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23
Q

elementos extrínsecos: por qúe es importante la curva de descenso de Tº

A

porque a menor Tº menor permeabilidad - y si llega a hacerse impermeable se detiene el proceso de deshidratación, aumentando la probabilidad de formar cristales IC (porque hay agua dentro de la célula)

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24
Q

elementos extrínsecos: por qué es importante la concentración de crioprotectores

A

porque determinan la concentración que haya en el medio EC y por tanto el movimiento de gradiente (EC->IC o IC->EC)

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25
Q

según la velocidad de enfriamiento, ocurren 2 fenómenos

A
  • formación de cristales IC
  • estrés osmótico y deshidratación
26
Q

formación de cristales de hielo IC ocurren porque…

A

cuando la Tº de descenso es muy rápida, no da tiempo a la célula a deshidratarse bien, de forma que cuando se llegue a la Tº de nucleación IC, el agua remanente que queda comienza a formar cristales de hielo, pudiendo dañar la célula

27
Q

estrés osmótico y deshidratación ocurren porque…

A

cuando la velocidad de descenso es muy lenta, hay una deshidratación muy intensa, que provoca deformación celular y reducción de tamaño

28
Q

cuando la velocidad de descenso de temperatura es muy lenta…

A

la célula de deshidrata mucho - deformación celular + reducción tamañ

29
Q

cuando la velocidad de descenso de temperatura es muy rápida

A

la célula no se deshidrata bien: cristales IC

30
Q

la velocidad de enfriamiento óptima es

A

aquella en la que los fenómenos de formación y de hielo IC, y el estés osmótico se minimizan, aumentando la posibilidad de supervivencia de la célula

31
Q

crioprotectores no penetrantes tienen un peso molecular

A

alto

32
Q

los crioprotectores no penetrantes ejercen su función:

A
  • aumentando la concentración osmótica promoviendo el paso de agua del medio IC al EC
  • desvitrificación/descongelación - se usan en pases/lavados de concentración decreciente para contrarrestar el hinchazón osmótico inicial (pasa agua muy rápido dentro de la célula)
33
Q

crioprotectores no penetrantes más usados son

A

sacarosa
glucosa
PVP
PEG

34
Q

los crioprotectores penetrantes tienen un PM

A

bajo - pasan la membrana

35
Q

los crioprotectores penetrantes ejercen su función crioprotectora

A
  • aumentar la osmolaridad IC - disminuye punto de congelación IC - menos cristales
  • reducen el gradiente osmótico al que está sometido la célula: menor estrés osmótico
  • disminuye la concentración de electrolitos IC por debajo de niveles tóxicos
  • disminuye la concentración de agua
  • aumenta viscosidad - menor movilidad de las moléculas de agua
36
Q

todos los crioprotectores son tóxicos

A

FALSO - solo los penetrantes: citotóxicos

37
Q

la citotoxicidad de los crioprotectores penetrantes es proporcional a

A
  • tiempo de exposición
  • temperatura de exposición
  • concentración
38
Q

los crioprotectores penetrantes más usados

A
  • propanodiol PROH
  • dimetilsulfóxido DMSO
  • etilenglicol
  • glicerol
39
Q

daños celulares en el proceso de congelación

A
  • 1º: refrigeración - shock térmico
    -2º: cristales de hielo EC (daño mecánico) + IC (disfunción mecánica) además de: estrés osmótico, citotoxicidad y recristalización
40
Q

el estrés osmótico y deshidratación se puede producir por

A
  • cristales EC
  • crioprotectores
  • daño celular
41
Q

el daño celular que se produce durante el estrés osmótico será:

A
  • desnaturalización de proteínas + pérdida de lípidos
  • pérdida de permeabilidad
  • pérdida de la capacidad de expansión durante la rehidratación de la descongelación
42
Q

la congelación usando vapores N2L es una congelación

A

rápida no en quilibrio

43
Q

la congelación usando un biocongelador es

A

lenta programada en equilibrio

44
Q

la congelación rápida se consigue usando

A

vapores N2L

45
Q

la congelación usando vapores N2L se usa en especies como

A

para el semen de toro

46
Q

la congelación con el biocongelador se usa para

A

embriones y espermatozoides, en ovocitos da malos resultados

47
Q

qué tipo de proceso de conservación nos permite hacer el seeding

A

la congelación lenta en equilibrio programada usando un biocongelador

48
Q

qué es el seeding

A

una inducción de la cristalización EC

49
Q

el seeding solo se emplea para la congelación de

A

embriones, no semen

50
Q

por qué usamos una descongelación rápida

A

para evitar la congelación durante el calentamiento o recristalización, es decir, que durante la descongelación, a medida que se vayan liberando las moléculas de agua, evitar que estas en lugar de quedar libres vayan a formar parte de un cristal de hielo ya formado, aumentando de tamaño y produciendo daño celular.

51
Q

objetivo congelación semen

A

es la interrupción temporal del metabolismo del espermatozoide sin alterar su futura función fecundante

52
Q

ventajas congelación semen

A
  • creación bancos semen - peligro de extinción + estirpes/líneas de interés
  • sanidad
  • facilidad de transporte
53
Q

desventajas congelación semen

A
  • mayor coste congelación que refrigeración
  • daños celulares - shock, citotoxicidad, estrés osmótico y recristalización
  • fertilidad semen congelado menor que refrigerado
54
Q

objetivo criopreservación de ovocitos y embriones

A

interrupción temporal del embrión/ovocito sin pérdida de su futura capacidad de desarrollo

55
Q

ventajas criopreservación de ovocitos y embriones

A
  • sanidad
  • importación/exportación
  • bancos de germoplasma
56
Q

desventajas criopreservación de ovocitos y embriones

A
  • daños celulares comunes spz: alteración en viabilidad celular + daños en la cromatina
  • daños específicos -
57
Q

daños específicos en la criopreservación de ovocitos y embriones

A
  • mayor riesgo de cristales IC por su baja relación de superficie de membrana/volumen celular
  • depolimerización en ovocitos metafase II + aneuploidías por presencia de huso mitótico
58
Q

requisitos para vitrificación

A
  • velocidad de enfriamiento muy rápida
  • poco volumen de muestra
  • elevada osmolaridad
59
Q

daños celulares en vitrificación

A
  • elevada citotoxicidad
  • mayor estrés osmótico y deshidratación
60
Q

las concentraciones de crioprotectores en vitrificación y congelación son los mismos

A

FALSO - mayor en vitrificación

repro ii (5 decks)

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