Biología de las células cultivadas in vitro

Question 1

¿A qué se deben fundamentalmente los cambios ultraestructurales?

Answer 1

A que debido a la alteración metabólica no persisten los modelos de diferenciación y biosíntesis

Question 2

¿Cuáles son los cambios que suceden a nivel ultraestructural?

Answer 2

1. Incremento respiración (aumentan nº mitocondrias y actividad enzimas por [azúcares] y TºC óptima)
2. Desaparición productos de reserva (no hacen falta)
3. Incremento síntesis de ARN y proteínas (aumentan ribosomas y polirribosomas)
4. Pérdida de capacidad fotosintética (retroinhibición por sustrato)

Question 3

¿Cómo se convierten líneas heterótrofas en líneas autótrofas?

Answer 3

Mediante pases de luz y procesos de selección en atmósferas enriquecidas en CO2

Question 4

¿Cómo cuantificamos el crecimiento de un callo?

Answer 4

Peso fresco (pesasustancias estéril), peso seco (se corta la mitad, se deseca y se calcula el % humedad) y nº de células (citometría de flujo)

Question 5

¿Cómo es el modelo general de crecimiento de un callo?

Answer 5

Sigue una curva sigmoidal con 3 fases.
Latencia: aumenta śintesis ARN y ribosomas sin división
De división: lineal luego exponencial
Estacionaria (se agotan nutrientes y fitohormonas). bajan las divisiones y aumenta la diferenciación, la vacuolización y la producción de metabolitos 2º.

Question 6

¿Por qué disminuye el peso fresco en fase estacionaria?

Answer 6

Células adultas tienen más cantidad de paredes y fibras que no acumulan agua

Question 7

¿Por qué disminuye el tamaño celular en la fase de división?

Answer 7

Se dividen más rápido que crecen

Question 8

¿Cuáles son las condiciones del cultivo in vitro que afectan a las células?

Answer 8

Mayor humedad, [azúcares], [nutrientes minerales], menor mvto. del aire al no haber turbulencias y menor intercambio O2/CO2.

Question 9

¿Cuáles son las alteraciones maś importantes en las células in vitro?

Answer 9

1. Escaso desarrollo cera cuticular y epicuticular: (alta humedad, baja radiación)
2. Estomas redondeados (pierden forma arriñonada)
3. Disfunción estomática (produce marchitamiento ex vitro)
4. Cloroplastos con escaso desarrollo de membranas y con bajo contenido en clorofila.
5. Células hiperhidratadas (citoplasma= fina película adosada a la pared, con una vacuola central de mayor tamaño.
6. Grandes espacios intercelulares llenos de agua (vitrificación o hiperhidratación)
7. Bajo porcentaje de materia seca.
8. Baja densidad estomática
   9 y 10. Poco desarrollo del parénquima (lagunar y empalizada y del tejido vascular entre la raíz y el vástago.
9. Baja capacidad fotosintética (- actividad enzimática)
10. En leñosas segregan fenoles que producen pardeamiento oxidativo (peroxidasas y fenolasas)

Question 10

¿Cuáles son las alteraciones maś importantes a nivel de planta entera?

Answer 10

1. Bajos niveles de crecimiento y desarrollo.
2. Tallos suculentos o hiperhidratados con alteraciones fisiológicas y morfológicas, tales como hojas abarquilladas, deficiencias de elementos minerales, que dañan a la planta al ser trasplantada a condiciones ex vitro.
3. Desarrollo radical incompleto con pocas raíces 2º: raíces in vitro tienden a morir y desaparecer en la semana siguiente al trasplante.
4. Alta variación de tamaño, forma y estadios de desarrollo (heterogeneidad de los explantes, a los gradientes de la cámara de cultivo y reguladores exógenos del crecimiento)

Question 11

¿Qué aspectos se cuidan en la aclimatación?

Answer 11

• Se aumenta gradualmente la intensidad luminosa y se disminuye la humedad relativa
• No exponer a gradientes elevados de TºC, radiación, humedad o [nutrientes]