aula 1 Flashcards
o que é a imunocitoquimica e imunohistoquimica
Conjunto de técnicas que têm como objectivo os anticorpos identificarem selectivamente estruturas celulares e tecidulares (antigénios) especificas como um sinalizador através da interacção antigénio-anticorpo, de forma a caracterizar a molécula logo no seu local de origem
Qual o objetivo da Imunohistoquímica (IHQ) e da Imunocitoquímica (ICQ)?
identificar antigénios específicos em células e tecidos por meio da ligação anticorpo-antigénio, visualizando essas estruturas no seu local de origem.
pq foi importante a imunohistoquimica para a anatomia patologica
identifica de forma especifica os componentes celulares e teciduais ajudando a identificar doenças como o cancros, infeções e doenças autoimunes.\
o que é o epitopo
É a parte específica de um antigénio à qual um anticorpo se liga.
resumidamente como se faz imunohistoquimica
a técnica usa anticorpos como reagentes para reconhecer determinados componentes celulares ou teciduais (são os antigenios) e ligar-se a eles. Essa ligação pode então ser visualizada por meio de um marcador, que pode ser uma substância fluorescente ou uma enzima que gera uma reação colorimétrica. Dessa forma, conseguimos observar ao microscopio a presença e a distribuição dessas moléculas no tecido sem comprometer a integridade da amostra.
o marcador causa danos à ligação específica estabelecidade entre o Ac-Ag ?
Na prática resulta na possibilidade de combinar um marcador com um anticorpo, sem provocar qualquer tipo de dano à ligação específica estabelecidade entre o Ac-Ag que entretanto formou um coomplexo.
que tipo de tecidos usa a imunohistoquimica
recorrem a blocos de células ou de coágulos preparados a partir de materiais citológicos e hematológicos.
passo a passo da imunohistoquimica
- O tecido é removido do ser vivo e conservado/fixado por congelação ou por métodos químicos (formaldeído);
- É embebido em parafina;
- São obtidas secções muito finas, de cerca de 4μm, a partir do material congelado ou incluído em parafina e colocadas em lâminas de vidro.
Como a marcação é visualizada?
Por um marcador ligado ao anticorpo, como uma substância fluorescente ou enzima com reação colorimétrica.
A técnica permite a deteção de diversas estruturas biológicas, incluindo:
Proteínas
Polissacarídeos
Células específicas
Organelos celulares
Estruturas teciduais
Microorganismos
O que identifica o anticorpo Anti-CK?
Citoqueratinas, proteínas do citoesqueleto das células epiteliais.
Para que serve o anticorpo CAM5.2?
Identificar citoqueratinas de baixo peso molecular, útil para tumores epiteliais (carcinomas).
Que células são marcadas com CD20?
: Linfócitos B.
Que células são marcadas com CD3?
Linfócitos T.
Quais os principais fatores que afetam a qualidade da marcação em IHQ/ICQ?
A. Fase pré-analítica (fixação/processamento)
B. Recuperação antigénica
C. Sensibilidade do sistema de deteção
principaais aplicaçoes de IMC e IMH
Tem as suas principais aplicações no estudo de neoplasias, doenças infecciosas e doenças degenerativas, podendo ser aplicada no estudo de muitas outras patologias.
Q: Qual a principal diferença entre ICQ e IHQ?
A: ICQ é usada em células isoladas; IHQ em cortes de tecido.
Q: Quais são os tipos de amostras usadas em ICQ?
Esfregaços citológicos, preparações citocentrifugadas (cytospin™) ou monocamada (thinprep®).
Para que servem os controlos positivos?
Garantir que a técnica está a funcionar corretamente (amostras que expressam o marcador).
Para que servem os controlos negativos?
Confirmar que não há marcação falsa (sem o antigénio-alvo).
Por que se usa permeabilização em ICQ?
A: Para permitir que os anticorpos entrem nas células e atinjam alvos intracelulares PQ A maioria da matriz extracelular e o estroma não estão presentes, deixando apenas as células inteiras e isoladas ou em pequenos agregados,
diferença entre imunocitoquimica e histoquimica
imunocitoquimica- Usa anticorpos para identificar proteínas específicas dentro das células-
-Identificação de um grande numero de substancias
-Visualização de resultados no fim da técnica
-Muito específica, porque cada anticorpo reconhece apenas a sua proteína
hsitoquimica: Usa reações químicas para marcar estruturas gerais no tecido
- Identificação reduzida de no de substâncias
-Visualização passo a passo dos resultados
-Afinidade não específica
Pré-requisitos tanto da tecnica de Imunohistoquimica como de Imunocitoquimica:
1- antigénio deve estar disponível no seu local original, isto é, deve permanecer insolúvel e reconhecível pelos anticorpos. Isso pode envolver o uso de métodos de recuperação de antigénios, se necessário, para garantir que o antigénio permaneça acessível ao anticorpo.
Ligação específica Ac-Ag
2- marcação específica, ou seja, o anticorpo deve ser capaz de se ligar exclusivamente ao antigénio de interesse. Para isso, é fundamental que a sequência de ligação entre o anticorpo e o antigénio (Ac-Ag) seja bem conhecida, garantindo que não haja ligações não específicas ou interações indesejadas
3-Anticorpo caracterizado- Deverão ser conhecidos todos os elementos teciduais a que o anticorpo se pode ligar,deverá ser conhecida toda a sequência de ligação Ac-Ag e as características do Ac devem ser conhecidas (classe, subclasse, produção)
4-método de marcação deve permitir a visualização do resultado, utilizando marcadores visíveis, como enzimáticos, fluorescentes, metálicos ou radioativos
Q: Qual a importância da lâmina carregada positivamente, que é das diferenças fundamentais na técnica de imunohistoquímica ?
Essa característica é importante porque permite que as amostras de tecido ou células se liguem de forma mais eficaz, facilitando a interação com os anticorpos durante a reação. Facilita a adesão do tecido ou célula, melhorando a reação Ac-Ag.
