Ärr Flashcards
Man kan nyttja gelfiltrering för
a. att byta buffert kring ett protein
b. för att bli av med ex ett salt man inte vill ha i sin
proteinlösning.
Redogör för hur man utför respektive försök.
Svar. a. Man ekvilibrerar gelfiltreringskolonnen med den buffert man vill att proteinet sedan skall befinna sig i. Man väljer en gel som har gelkorn med liten pordiameter så att proteinet går utanför kornen hela tiden medan buffertjoner går in i kornen och kommer ut senare. De buffertjoner som finns kring proteinet från början fördröjs alltså i kolonnen och proteinet kommer ut i den nya bufferten som finns i kolonnen – går med den sk voiden. De buffertjoner som finns överst i kolonnen av den nya bufferten kommer alltså att vandra in i kulorna och halkar efter proteinet som går snabbare igenom.
Svar b. Man väljer en likadan kolonn som i föregående fall, dvs en gel med små porer och ekvilibrerar kolonnen = låter 3 bäddvolymer (=volym av gelen i kolonnen) av ny buffert först rinna igenom kolonnen. Sedan sätter man på sitt saltinnehållande proteinprov.
De saltjoner som från början finns kring proteinet kommer alltså långt efter proteinet eftersom de går in i alla kulorna och har mycket längre väg att vandra än proteinmolekylerna som hela tiden går utanför kulorna - i voiden.
