Analyses A (OCQ)

Question 1

HDL-CHOLESTÉROL

(méthode)

Answer 1

Méthode de routine :

• Méthode enzymatique de dosage du CHOL total avec ajout de réactifs qui bloquent les lipoprotéines non-HDL et qui libèrent CHOL des HDL (cholestérol estérase/oxidase) :
  
  • Précipitation sélective des VLDL et LDL
    
    • Ex : Sulfate de dextran + MgSO4 (Vista)
  • CHOL-ester + H2O -^{<strong><u>cholestérol estérase</u></strong>}-> CHOL + ac gras
  • CHOL + O2 -^{<strong><u>cholestérol oxydase</u></strong>}-> Cholest-4-en-3-one + H2O2
  • H2O2 + phénol + 4-aminoantipyrine -^peroxydase-> quinone + H2O
  • Abs 500 nm

Question 2

FER

(méthode)

Answer 2

Méthode de routine :

1. Dosage colorimétrique :
   
   • Acidifier l’échantillon pour libérer le Fe3+ lié à la transferrine
   • Réduire le Fe3+ en Fe2+
   • Ajouter un chromogène (ferrozine).
   • Complexe entre ferrozine et fer produit un complexe qui absorbe à 550 nm.
   • Dosage directement proportionnel

Question 3

ALBUMINE URINAIRE

(méthodes)

Answer 3

Méthode de routine :

1. Méthode néphélémétrique
2. Méthode turbidimétrique
3. Principe de l’erreur protéique des indicateurs (bandelettes urinaires)
   
   • Protéine accepte les ions H+ de l’indicateur.
   • Changement de couleur dû à la présence de protéine à pH acide constant (de jaune à vert et bleu)

Question 4

CALCIUM IONISÉ

(Préanalytique)

Answer 4

Préanalytique dosage Ca2+ :

• Ne pas fermer le poing (↑ Ca2+)
• Éviter exercice (↑ Ca2+)
• Éviter stress (hyperventilation = ↑pH = ↓ Ca2+)
• Rythme circadien (Nuit < jour)
• Tube : Héparine balancé ou Sérum
  
  • Pas d’EDTA
  • Pas d’héparine liquide (dilue)
  • Correctement remplis (vide = ∆ pCO2 = ∆ pH)
• Éviter hémolyse (dilue et ∆ pH)
• Limiter l’effet du métabolisme cellulaire (∆ pH)
• Analyser rapidement :
  
  • Sang total : analyser en 1h (Tp) ou en 4h (4°C) maximum
  • Sérum/plasma : stable des heures à Tp et des jours à 4°C
    
    • Centrifugation fait ∆ pH

Question 5

ALT

(méthodes)

Answer 5

Méthode de routine :

• Méthode enzymatique :
  
  • pH 7,4 + Vit B6 (cofacteur)
  • L-alanine + a-kétoglutarate -^{<u><strong>ALT</strong></u>}-> Pyruvate + L-glutamate
  • Pyruvate + NADH + H+ -^{<u><strong>LDH</strong></u>}-> Lactate + NAD

Question 6

TRIGLYCÉRIDES

(méthode)

Answer 6

Méthode de routine :

• Dosage enzymatique avec plusieurs systèmes de détection disponibles (peroxydase et chromogène ou NADH):
  
  • TG -^{<u>lipase</u>}-> Glycérol + ac gras
  • Glycérol + ATP -^{<strong><u>glycérol kinase</u></strong>}-> Glycérol-3-P + ADP
  • Glycérol-3-P + O2 -^{glycérol-3-P oxydase}-> H2O2 + Dihydroxyacétone phosphate
  • H2O2 + 4-aminophènezone -^{<u><strong>peroxydase</strong></u>}-> quinone + H2O
  • Mesure à 500 nm

Méthode de référence :

• GC-IDMS

Question 7

ACIDE FOLIQUE

(méthode)

Answer 7

Méthodes de routine :

1. Immunoessais

Question 8

PHOSPHATASE ALCALINE (totale)

(méthode)

Answer 8

Méthode de routine :

1. Méthode enzymatique :
   
   • pH 10,25, Zn2+, Mg2+
   • p-nitrophénylphosphate + 2 amino-2-méthyl-1-propanol (AMP) -^{<strong><u>ALP</u></strong>}-> p-nitrophénol + AMP + PO4

Question 9

AMYLASE

(méthodes)

Answer 9

Méthodes de routine :

1. Méthode enzymatique avec substrat maltopentose
   
   • Maltopentoaose -^{<u><strong>amylase</strong></u>}-> Maltose + maltotriose
   • Maltose + maltotriose -^{<strong><u>a-glucosidase</u></strong>}-> Glucose
   • Glucose + ATP -^{<u><strong>hexokinase</strong></u>}-> Glucose-6-P + ADP
   • Glucose-6-P + NAD -^{<u><strong>glucose-6-P déshydrogénase</strong></u>}-> NADH + H+ + 6-phosphogluconate
2. Méthode enzymatique avec substrat maltotrétaose
   
   • Maltotréaose -^{<u><strong>amylase</strong></u>}-> Maltose
   • Maltose + phosphate -^{maltose phosphorylase}-> glucose + Glucose-1-P
   • Glucose-1-P -^{<u><strong>B-phosphoglucomutase</strong></u>}-> Glucose-6-P
   • Glucose-6-P + NAD -^{<u><strong>glucose-6-P déshydrogénase</strong></u>}-> NADH + H+ + 6-phosphogluconate

Méthode de référence :

1. Méthode chromogène avec production de p-nitrophénol avec réaction enzymatique successives : Amylase et glucosidase

Question 10

OXALATE URINAIRE

(préanalytique)

Answer 10

Préanalytique oxalate urinaire :

• Adultes : collecte urinaire préacidifiée (HCl)
• Enfants : Miction
• Éviter de consommer de la vitamine C 48h avant le prélèvement
• Envoyer l’urine congelée
  
  • Stabilité réfrigéré (2-8 °C) : 7 jours
  • Stabilité congelé (-15 et -25 °C) :14 jours

Question 11

T4L

(méthode)

Answer 11

Immunoessais hétérogène compétitif

• Utilisation d’un analogue de T4 qui ne lie pas les protéines de liaison (pas de débalancement de l’équilibre) mais qui est reconnu par l’Ab de la méthode
• Pas de séparation des formes libres/liées
• Ab liés à un support solide ou billes magnétiques
• One step ou two steps
• SIgnal inversement proportionnel

Question 12

BILAN LIPIDIQUE

(Préanalytique)

Answer 12

Préanalytique qui influence le bilan lipidique :

• Position lors du prélèvement : ↓ de CHOL et TG si couché (hémodilution)
• Stress : ↑ TG et CHOL
• Garrot : ↑ TG et CHOL
• Glycérol élevé (crème, savon, alcoolisme) peut surestimer le dosage des TG (méthode passe par le dosage du glycérol pour quantifier les TG)
• Exercice : ↓ TG longtemps et ↑ HDL-C longtemps
• Alcool : ↑ TG longtemps, donc débalance HDL-C longtemps
• Grossesse : CHOL ↓ lors du 1er trimestre
• Jeûne : ↓ les TG (chylomicrons absents)

Question 13

RÉNINE

(préanalytique)

Answer 13

Préanalytique rénine :

• Préparation du patient :
  
  • Arrêt de la médication :
    
    • Cesser la prise de diurétiques, ß-bloquants, clonidine, IECA, ARA une semaine avant l’analyse.
    • Cesser la prise de spironolactone 6 semaines avant l’analyse.
  • Patient en position couchée 1h avant le prélèvement
• Prélèvement
  
  • Faire le prélèvement entre 7 et 11h AM
  • Tube EDTA
  • Noter l’heure, la position du patient et le site du prélèvement
  • Éviter hémolyse (RBC contiennent des angiotensinases)
• NE PAS REFROIDIR le tube! Conserver à Tp, centrifuger à Tp.
• Congeler rapidement et éviter les gel/dégel
• Dégeler rapidement

Question 14

SANG OCCULTE DANS LES SELLES

(méthode et comparaison des méthodes)

Answer 14

Méthodes de routine :

1. RSOSi : dosage immunologique de l’Hb
   
   • Ab spécifique à Hb humaine
   • 1 seul prélèvement
   • Plus sensible
   • Ne détecte pas l’Hb dénaturée (saignements digestifs hauts)
   • Méthode de choix pour le dépistage du cancer colorectal (lignes directrices)
   • Efficace pour les patients avec variants d’Hb?
2. Guaïac (RSOSg) : Dosage de l’Hb par l’activité pseudo-peroxydase de l’hème
   
   • Échantillon + H2O2 -> coloration bleue
   • Carton avec 2 sites de dépôt de selles :
     
     • À l’aide de spatules, étaler sur chaque carré (une spatule/carré) un fragment de selle (grosseur d’un grain de riz).
   • Interférences : Vit C, acide urique, myoglobine, viande rouge
   • Disponible en stat
   • Répéter le test 3x consécutives
3. Test de la porphyrine hémique
   
   • Fluorescence de la porphyrine détectée par spectrométrie
   • Pas spécifique : myoglobine interfère

Question 15

GLUCOSE

(méthodes)

Answer 15

Méthode de routine : MÉTHODE STANDARDISÉE

1. Hexokinase
   
   • Glucose + ATP -^{<u><strong>hexokinase, Mg</strong></u>}-> Glucose-6-P
   • G-6-P + NAD(P) -^{G-6-P déshydrogénase}-> NAD(P)H
   • Détection : NAD/NADH, NADP/NADPH. Mesure bichromatique en poind final
2. Glucose oxydase
   
   • Glucose + O2 -^{<u>glucose oxidase + mutarotase</u>}-> H2O2
   • H2O2 + chromogène réduit -^{<strong><u>peroxydase</u></strong>}-> chromogène oxydé
   • Méthode spécifique au bêta-D-glucose, mutarotase accélère conversion alpha -> bêta
   • Détection :
     
     • Chromogène H2O2 et peroxydase
     • Diminution consommation O2
     • Oxydation d’une électrode de platine par H2O2 (électrochimie, biosenseur, ampérométrie, appareils à gaz)
     • Semi-quantitatif sur bandelette urinaire
3. Glucose déshydrogénase
   
   • Glucose + NAD(P) -> NAD(P)H
   • Détection : NAD/NADH

Question 16

LDL-C

(préanalytique)

Answer 16

Préanalytique LDL-C :

• Jeûne 12h seulement si TG préalablement > 4,5 mmol/L (pour utiliser équation Friedewald)
• Position assise (couché = hémodilution)
• Retirer garrot rapidement (hémoconcentration)
• Pas d’alcool 3 jours avant (↑ TG longtemps, donc débalance HDL-C longtemps)
• Éviter exercice intense 3 jours avant (↓ TG longtemps et ↑ HDL-C longtemps)

Question 17

ISOENZYME LDH

(méthode)

Answer 17

5 isoenzymes : LDH 1 à 5

• Séparation par électrophorèse
  
  • LDH1 migre plus rapidement (plus vers anode)

Question 18

VITAMINE B12

(méthode)

Answer 18

Méthode de routine :

1. Immunoessais compétitif

Question 19

SATURATION DE LA TRANSFERRINE

(méthodes)

Answer 19

Méthodes de routine :

1. Calculé :
   
   • % sat Tf = fer / TIBC x 100

Question 20

Métanéphrines urinaies

(préanalytique)

Answer 20

• Collecte urinaire 24h acidifiée avant
  
  • Rejet si pH > 4
• Hydrolyse des métanéphrines nécessaire si dosage des métanéphrines totales
• Dosage LC-MS/MS, LC-ECD ou immunoessais

Question 21

RÉNINE

(Méthodes)

Answer 21

Méthodes de routine :

1. Méthodes masse :
   
   1. Immunoessais : réactivité croisée avec pro-rénine
      
      1. IRMA (sandwich) = CHUM
   2. MS possible
2. Méthodes activité (CUSUM) :
   
   • Généralités :
     
     • Utiliser des inhibiteurs de l’ACE ou des Ab contre l’Angiotensine I pour empêcher sa conversion en Angiotensine II (t1/2 beaucoup plus court).
     • Test d’activité basé sur la production d’angiotensine I
     • La majorité des méthodes activité utilisent du RIA pour quantifier l’angiotensine I, mais immunoessais enzymatiques et HPLC aussi possible
     • (!) Conditions analytiques influencent activité enz
   1. Utilisation de l’angiotensine intrinsèque
      
      • Substrat limitant : Réaction d’ordre 1
      • Prendre 2 échantillons du même prélèvement :
        
        • Incuber 1 éch à 37°C 3h
        • Incuber l’autre éch à 4°C pour bloquer l’activité de la rénine.
      • Quantifier l’angiotensine I après 3h dans les 2 échantillons (RIA)
      • La différence entre les 2 donne la quantité d’angiotensine I produit par h par mL de plasma.
      • L’échantillon à 4°C sert de blanc
   2. Utilisation de l’angiotensine extrinsèque
      
      • Réaction avec un excès d’angiotensinogène : vitesse de la réaction dépendante seulement de l’activité de la rémnine (réaction d’ordre 0).
      • Matériel de référence de rénine comme calibrateur.
      • Doser la production de l’angiotensine I (RIA)

Question 22

5-HIAA

(préanalytique)

Answer 22

• Collecte urinaire 24h acidifiée pour Dx
  
  • Miction non acidifiée pour dépistage
• Diète particulière 3 jours avant et pendant collecte
  
  • Bananes, avocats, noix, alcool, ananas, dattes
• Sexe et âge du patient requis pour interprétation
• Ajuster pH à 2-3 à la réception au labo
• Dosage LC-MS/MS
  
  • PréTx de l’échantillon selon la méthode

Question 23

TIBC

(méthode)

Answer 23

Méthodes de routine :

• Calculé : TIBC = 25,1 x Transferrine
• Dosé :
  
  • Ajout d’une quantité X de fer dans la réaction pour saturer tous les sites de la transferrine
  • Enlever l’excès de fer :
    
    • Colonne chromatographique ou précipitation/chélation
  • Doser le fer total :
    
    • Acidification de l’échantillon pour libérer le Fe3+
    • Réduction du Fe3+ en Fe2+
    • Ajout d’un chromogène (ferrozine) pour complexer le fer et former un complexe qui absorbe à 550 nm.
    • Mesure de l’absorbance à 550 nm

Question 24

POTASSIUM

(méthodes)

Answer 24

Méthodes de routine :

• Électrodes spécifiques (ISE) directe et indirecte:
  
  • Composante active = Valinomycine

Méthode de référence :

• Photométrie de flamme

Question 25

POTASSIUM

(préanalytique)

Answer 25

Préanalytique mesure du K+ :

• Prélever patient en condition d’équilibre :
  
  • K+ ↑ en chimio (lyse cell)
  • K+ ↓ après repas
  • K+ ↓ en cas de transfusion importante (héparine, transitoire)
• Tube :
  
  • Seringue héparinée sèche pour appareils à gaz
  • Pas de tube EDTA
• Enlever garrot rapidement pour éviter hémolyse
• Éviter coagulation/caillots : K+ ↑
• Hyperplaquettose et hyperleucocytose :
  
  • K+ ↓ dans un 1er temps : Glycolyse et entrée de K+ intracell
  • K+ ↑ dans un 2e temps : Lyse cell
• Conserver tube à T° pièce et centrifuger rapidement

Question 26

HbA1c

(préanalytique)

Answer 26

Préanalytique HbA1c :

• Préparation du patient :
  
  • Pas de condition de préparation particulière : pas de jeûne, pas de timing particulier
  • Conditions récentes qui diminuent le taux de HbA1c :
    
    • Hémorragie importante
    • Hémolyse importante
  • Pas de transfusion récente
  • Épisode récent d’hyperglycémie
  • Ne doit pas être congelé si méthode HPLC
• Collecte de l’échantillon : tube EDTA
• Prélèvement stable 1 semaine à 4°C ou 24h à température pièce (peut être spécifique à la méthode)
• NE PAS CENTRIFUGER

Question 27

TRANSFERRINE

(méthodes)

Answer 27

Méthodes de routine :

1. Immunoessais
2. Immunoturbidimétrie
3. Immunonéphélémétrie

Question 28

Métanéphrines libres plasmatiques

(préanalytique)

Answer 28

Méthode avec la meilleure sensibilité et spécificité pour Dx phéo

• Arrêt certains Rx
• Position couché 30 mins idéalement (minimise les FP)
• Éviter le stress
  
  • Prélèvement -20 mins
• Prélever sur glace
• Centri rapide
• +/- jeûne
• Dosage LC-MS/MS

Question 29

ISOENZYMES CK

(méthode)

Answer 29

Méthode fréquente :

1. Électrophorèse sur gel :
   
   • Patron de migration (pH 8,6) :
     
     • CK-MM le plus près du point d’application (cathode)
     • CK-MB a une migration intermédiaire
     • CK-BB le plus loin du point d’application (vers l’anode)
   • Visualisation :
     
     • Réaction enzymatique avec formation de NADPH
     • Quantification de la fluorescence de NADPH par densiométrie (excitation à 360 nm)
2. Immunoessais avec Ab bloquant sous-unité M
   
   • Ne permet pas de quantifier les différents isoformes. Permet seulement de quantifier un isoforme en particulier (CK-MB)

Question 30

FRUCTOSAMINE

(méthodes)

Answer 30

Méthodes de routine :

1. Réduction du NBT en formazan :
   
   • Tampon carbonate, pH alcalin
   • Fructosamine <=> forme énéaminol
   • Forme énéaminol + NTB -> formazan
     
     • NTB: nitrobleu de tétrazolium (NBT)
   • Mesure de l’Abs à 530nm
   • Changement Abs proportionnel à [fructosamine]
2. Méthode enzymatique (fructosaminase)
   
   • Fructosamine -^{<strong><u>Protéinase K</u></strong>}-> fragments glyqués
   • Fragments glyqués -^{<strong><u>fructosaminase</u></strong>}-> libération de H2O2
   • Quantification à partir de H2O2

Question 31

ACTH

(préanalytique)

Answer 31

Préanalytique ACTH :

• Préparation du patient :
  
  • Arrêt de la médication (glucocorticoïdes)
  • Éviter stress
• Prélèvement :
  
  • Faire prélèvement seulement à l’hôpital
  • Tube EDTA pré-refroidit
  • Transport sur glace, centri à froid, congeler immédiatement
  • Envoi sur glace sèche
  • Standardiser l’heure du prélèvement : prélever le matin (circadien)
    
    • Noter l’heure du prélèvement

Question 32

PROTÉINES TOTALES SÉRIQUES

(méthodes)

Answer 32

Méthodes de routine :

1. Réaction de Biuret
   
   • Réaction entre le réactif de Biuret (ions Cu2+ en milieu alcalin) avec les liens peptidiques des protéines
2. Réaction de Lowry
   
   • Réactif Folin (mélange d’acides molybdique et phosphotungstique et de cuivre alcalin) réagit avec les liaisons peptidiques, les résidus tyrosine et tryptophane
   • Production d’une couleur bleue (660 nm)
3. Méthode de Bradford
   
   • Utilisation du bleu de coomassie brillant.
   • Colorant se lie aux NH3 des protéines.
   • Abs à 595 nm
4. Méthode turbidimétrique
   
   • Ajout d’un agent précipitant les protéines (TCA, chlorure d’ammonium, chlorure de benzothélium)
   • Quantification du précipité par turbidimétrie
5. Pyrogallol rouge-molybdate
   
   • Réaction entre le complexe rouge pyrogallol-molybdate et la protéine
   • Provoque un shift du spectre d’absorption de 460 à 600 nm
     
     • Proportionnel à la concentration en protéines totales

Question 33

CHOLESTÉROL TOTAL

(Préanalytique)

Answer 33

Préanalytique cholestérol total :

• Position lors du prélèvement : couché ↓ CHOL
• Garrot trop longtemps : CHOL ↑
• Stress, inflammation (infection) : CHOL ↑
• Variation biologique :
  
  • CHOL plus ↑ l’hiver
  • CHOL ↑ avec l’âge
  • Grossesse = ↓ du CHOL (1er trimestre)
• Syndrome néphrotique et hypothyroïdie = CHOL ↑
• Interprétation du CHOL en fonction de la variation biologique :
  
  • Grande variation bio. Prélèv en série préférable pour la clinique. Au moins 2-3 semaines d’intervalle entre les dosages

Question 34

CRÉATININE SÉRIQUE

(méthodes)

Answer 34

Méthode de routine :MÉTHODE STANDARDISÉE IFCC

1. Créatinine Jaffé :
   
   • Picrate alcalin + créatinine -> Chromogène (rouge)
2. Créatinine enzymatique :
   
   • Créatinine + H2O -^{<u>créatinine amidohydrolase</u>}-> créatine
   • Créatine + H2O -^{<u>créatinase</u>}-> urée + sarcosine
   • Sarcosine + O2 + H2O -^{<u>sarcosine oxydase</u>}-> H2O2 + formaldéhyde + glycine
   • H2O2 + chromogène réduit -^{<u>peroxydase</u>}-> chromogène oxydé + H2O

Méthode de référence :

• ID-MS

Question 35

CK-MB

(méthode)

Answer 35

Méthode de routine :

1. Méthode activité :
   
   • Utilisation d’un anticorps spécifique à la sous-unité M qui inhibe l’activité de la SU
   • Dosage de l’activité de la CK: Pas d’activité de la CK-MM
     
     • pH 6,7
     • Créatinine phosphate +ADP -^{<strong><u>CK</u></strong>}-> créatinine + ATP
     • ATP + glucose -^{<strong><u>hexokinase</u></strong>}-> Glucose-6-P + ADP
     • Glucose-6-P + NAD -^{<u><strong>G6PD</strong></u>}-> 6-phosphogluconate + NADH + H+
     • Mesure à 340 nm (NADH)
2. Méthode masse :
   
   • Immunoessais sandwich avec Ab spécifique à l’isoforme MB

Question 36

FERRITINE

(méthodes)

Answer 36

Méthode de routine :

• Méthode immunologique (variable d’une compagnie à l’autre)
  
  • Directement proportionnel, utilisation de billes magnétiques
  • CLIA Hétérogène, 2 steps (Abbott)
  • LOCI Homogène, 2 step (Siemens)

Question 37

CALCIUM IONISÉ

(méthodes)

Answer 37

Méthode de routine :

• Électrode ISE directe

Méthode de référence :

• Photométrie de flamme

Méthode définitive :

• ID-MS

Question 38

Catécholamines plasmatique

(préanalytique)

Answer 38

• Jeûne 8h
• Éviter alcool et café 24h avant
• Éviter fumer 4h avant
• Éviter certains Rx : benzo, opioïdes, cocaïne
• Couché 30 minutes
• Installer une canule
  
  • Éviter le stress
• Tube pré-refroidit
• Héparine Li ou EDTA-Na (spécial, Mayo)
• Transport sur glace
• Centri rapide
• Décanter et congeler rapide

Question 39

MAGNÉSIUM

(méthodes)

Answer 39

Méthode de routine :

1. Cofacteur dans une réaction enzymatique (isocitrate déshydrogénase):
   
   • Acide d-isocitrique + NADP -^{isocitrate déshydrogénase, Mg2+}-> 2-oxoglutarate + CO2 + NADPH
   • Signal à 340 nm (augmentation de NADPH)
2. Méthode colorimétrique : Bleu de méthylène (ou bleu de méthylthymol)
   
   • Mg2+ + Bleu méthylène -> Complexe coloré (Abs 600 nm)
   • Effet de Ca2+ éliminé via ajout de Ba-EGTA
3. Méthode colorimétrique : Bleu de xylidyl
   
   • pH alcalin
   • Mg2+ + bleu de xylidyl -> Complexe bleu (505 nm)

​Méthode de référence :

• Photométrie de flamme

Méthode définitive :

• Dilution isotopique d’activation neutronique

Question 40

OSMOLALITÉ

(méthodes)

Answer 40

Méthodes de routine :

1. Dépression du point de congélation
2. Osmomètre à tension de vapeur
   
   • N’inclus pas les substances volatiles dans le résultat de l’osmolalité

Question 41

OXALATE URINAIRE

(méthodes)

Answer 41

Méthode de routine :

• Dosage enzymatique (oxalate oxidase) :
  
  • Oxalate + O2 -^{<u><strong>oxalate</strong> <strong>oxidase</strong></u>}→ CO2 + H2O2
  • H2O2 + MBTH + DMAB -^{<u>peroxidase</u>}→ Idamine coloré + H2O
    
    • MBTH : 3-méthyl-2-benzothizlinone hydrazone
    • DMAB : 3-diméthyl amino benzoïque

Question 42

BILIRUBINE CONJUGUÉE

(méthodes)

Answer 42

Méthode de routine :

• Méthode de Jendrassik-Grof (SANS caféine)
  
  • Méthode diazo :
    
    • Bilirubine soluble + acide sulfanilique diazoté -> Bilirubine-diazo (rouge)
    • Absorbance à 540 nm

Question 43

LDL-CHOLESTÉROL

(méthodes)

Answer 43

Méthodes de routine :

1. Estimation des LDL-C par l’équation de Friedewald :
   
   • LDL-C = CHOL total - HDL-C - TG/2,2
   • Calcul non valable si TG > 4,5
2. Méthode enzymatique directe : Principe similaire à HDL-C
   
   • Réactifs sélectifs bloquent HDL, VLDL et CM
   • LDL-C solubilisé par enzyme et surfactants -> Cholest-4-en-3-one + H2O2
   • H2O2 + 4-aminophènezone + HSDA + enzyme -> couleur
   • (!) : Non applicable pour patients avec dyslipidémie et moins performant lorsque TG > 4,5. Recommandé de calculer CHOL non-HDL
3. Mesure directe (bêta-quantification)
   
   • Ultracentrifugation et utilisation d’héparine + MnCl2

Question 44

HbA1c

(méthodes)

Answer 44

Méthodes de routine : MÉTHODE STANDARDISÉE

1. Chromatographie d’affinité (boronate)
   
   • Hb glyquée se lie au boronate, Hb non glyquée ne se lie pas.
   • Détection par absorbance
2. Électrophorèse capillaire
   
   • La séparation des espèces d’hémoglobine est basée sur des différences de charge.
3. Chromatographie échangeuse d’ions (HPLC)
   
   • La séparation des espèces d’hémoglobine est basée sur des différences de charge.
4. Immunoessais : Immunoturbidimétrie compétitif
   
   • Ab vs portion N-terminale incluant la glycation (4 premiers aa)
5. Méthode enzymatique
   
   • Mesure de Hb total et HbA1c (via glycation clivée)
   • Mesure de HbA1c :
     
     • Clivage du résidu glyqué
     • Les valines glyquées servent de substrat pour la fructosyl valine oxydase dans une réaction couplée avec la peroxydase de raifort.
     • L’agent coloré résultant est mesuré par spectrophotométrie.

Méthode de référence : 2 méthodes

• Mesure des peptides N-terminaux glyqués et non glyqués spécifiques de la chaîne bêta par HPLC et spectrométrie de masse ou électrophorèse capillaire.
  
  • HPLC + MS
  • HPLC + Électrophorèse capillaire

(!) Pas de méthode définitive

Question 45

LACTATE

(Préanalytique)

Answer 45

Préanalytique lactate :

• Pas de garrot (↑ lactate)
• Ne pas serrer le poing
• Éviter exercice, même faible (↑ lactate)
• Glucose ou HCO3 IV ↑ lactate
• Repas ↑ lactate
• Catécholamines ↑ lactate
• Prélèvement :
  
  • Héparine Na ou Li
  • Prélever et mettre immédiatement sur glace
  • Tube gris peut également être utilisé (stable 8h à Tp)
• Transport et conservation :
  
  • Acheminer rapidement au laboratoire (< 15 minutes)
  • Centrifuger en < 1h

Question 46

GRAISSES DANS LES SELLES

(méthode)

Answer 46

Méthodes de routine :

1. Méthode par gravimétrie :
   
   • Extraction des gras par un solvant. Évaporation du solvant et pesée de l’échantillon correspond aux graisses
   • Désavantage : Solvant extrait des molécules hydrophobes autres que des graisses. Surestimation de la collecte
2. Méthode par titrimétrie :
   
   • Ajout de KOH et d’alcool dans l’échantillon.
   • Acidification et extraction des acides gras
   • Évaporation du solvant et dissolution des résidus dans l’alcool.
   • Titration avec NaOH (indicateur = bleu de thymol)
   • Désavantage : peut sous-estimer les acides gras à moyennes chaines. Long et manuel
3. Méthode qualitative
   
   • Coloration au Sudan III
   • Chauffer échantillon et observer goutelettes de lipides au microscope
   • Interprétation subjective

Question 47

UIBC

(méthode)

Answer 47

Méthode de routine :

1. Méthode colorimétrique :
   
   • Ajout d’une quantité X de fer dans la réaction pour saturer tous les sites de la transferrine
   • Doser le fer non lié : NE PAS ACIDIFIER l’échantillon
   • Réduction du Fe3+ libre en Fe2+
   • Ajout d’un chromogène (ferrozine) pour complexer le fer et former un complexe qui absorbe à 550 nm.
   • Mesure de l’absorbance à 550 nm
   • L’UIBC est déduit : UIBC = fer initial – fer mesuré

Question 48

Catécholamines plasmatiques

(méthode)

Answer 48

HPLC

• Prétraitement
• Méthode manuelle
• Méthode prévilégiée : HPLC-ECD

Question 49

AMMONIAC

(préanalytique)

Answer 49

Préanalytique ammoniac :

• Augmentation NH3
  
  • Cigarette
  • Exercice
  • Diète riche en protéine
  • Tx contenant glutamine
  • Rx : barbituriques, VPA, opioïdes
  • Serrer le poing, garrot
  • Site de ponction mal nettoyé
  • Coagulation de l’échantillon (sérum)
  • GGT élevée
• Pas de garrot
• Éviter hémolyse
• Tube prérefroidit, transport sur glace
• Tube mal rempli ou ouvert à l’air libre (NH3 volatil, diminution)
• Envoyer au laboratoire rapidement (< 15 minutes)
  
  • NH4 augmente dans plasma et sang total
• Centrifuger dès la réception, décanter
• Congeler à -70°C si non analysé immédiatement

Question 50

CORPS CÉTONIQUES

(méthodes)

Answer 50

Méthode de routine :

• Test au nitroprusside (urine) : spécifique à acétone et acétoacétate
  
  • Réactif + Ac/AcAc -> composé coloré
• B-hydroxybutyrate déshydrogénase (sang) :
  
  • Réaction à pH 8,5 :
    
    • B-HBT + NAD⁺ -> Acétoacétate + NADH + H⁺ + é
  • Courant généré par la réaction redox détecté par un détecteur électrochimique.

Question 51

CALCIUM TOTAL

(méthodes)

Answer 51

Méthode de routine :

1. Électrode ISE :
   
   • Acidification du milieu pour libérer le Ca2+ lié aux protéines
   • Membrane sélective au Ca (potentiométrie)
   • Échantillon maintenu à 37°C
2. o-crésolphtaléine complexone (CPC) :
   
   • Échantillon dilué dans solution acide pour libérer le Ca2+ lié
   • Réaction à pH alcalin :
     
     • CPC + Ca -> produit coloré (570-580 nm)
3. Arsesano III
   
   • Rxn à pH acide (pH 6) :
     
     • Arsenazo III + Ca -> produit coloré (650 nm)
   • Imidazole utilisé pour tamponner la rxn : (!) Propriétés spectrales de Arsenazo sont dépendantes du pH

Méthode de référence :

• Photométrie de flamme

Méthode définitive :

• ID-MS

Question 52

ALBUMINE (sérum)

(méthodes)

Answer 52

Méthodes de routine :

1. Colorimétrique : Bromocrésol vert (Abs 628 nm)
2. Colorimétrique : Bromocrésol pourpre (Abs (603 nm)
3. Immunoessais, Turbidimétrie, néphélémétrie
4. Électrophorèse
5. Méthode dosage UV

Méthode de référence :

• Néphélémétrie

Question 53

AMMONIAC

(méthodes)

Answer 53

Méthodes de routine :

1. Électrode ISE
   
   • Éch + tampon à pH 10,4 produit libération NH4+ (gaz)
   • Gaz diffuse vers membrane semi-perméable
   • Produit un changement de pH (électrode de verre)
   • Détection par potentiométrie
2. Méthode enzymatique (+ fréquent)
   
   • NH4+ + 2-oxoglutarate + NADH + H+ -^{<u><strong>glutamate déshydrogénase</strong></u>}→ NAD+ + glutamate + H2O
   • Proportionnel à diminution de l’Abs à 340nm
3. Chromatographie échange ionique
   
   • Résine échangeuse de cations
   • NH3 éluée et mesurée avec la réaction de Berthelot
4. Chimie séche
   
   • Éch + tampon pH 9,2 (Borate) = libération NH4+ (gaz)
   • NH4 diffuse à travers une membrane semi-perméable dans une couche contenant un indicateur de pH
   • Changement de couleur de l’indicateur de pH mesuré par réflectance
   • Vitros : Bleu de bromophénol (600 nm)

Pas de méthode de référence

Question 54

BILIRUBINE TOTALE

(méthodes)

Answer 54

Méthode de routine :

• Méthode de Jendrassik-Grof (avec caféine)
  
  • Solubilisation de la bili non-conjuguée : caféine, benzoate, acétate, EDTA
  • Méthode diazo :
    
    • Bilirubine soluble + acide sulfanilique diazoté -> Bilirubine-diazo (rouge)
    • Absorbance à 540 nm

Question 55

URÉE

(méthodes)

Answer 55

Méthodes de routine :

1. Méthode enzymatique :
   
   • Urée +H2O -^{<u><strong>uréase</strong></u>}-> NH3 + CO2
   • NH3 + α-kétoglutarate + NADH -^{<strong><u>glutamate déshydrogénase</u></strong>}-> L-glutamate + NAD
2. Méthode conductimétrique :
   
   • Urée +H2O -^{<u><strong>uréase</strong></u>}-> NH3 + CO2
   • Mesure du changement de conductivité

Question 56

PORPHYRINES

(méthode)

Answer 56

Méthode de routine :

• Prétraitement : Quantification des porphyrines par multiples extractions et séparation par HPLC :
  
  • Protocole général d’extraction : Phase aqueuse + phase organique
  • Molécules solubles récupérées dans la phase aqueuse
  • Back extraction de la phase organique avec une phase aqueuse et une phase organique acidifiée
  • Changement de pH modifie la solubilité des porphyrines (pH < 2 = protonation des porphyrines)

1. Méthode qualitative :
   
   • Analyse spectrofluorométrique : Scan de la phase aqueuse pour quantifier porphyrines totales
2. Méthode quantitative : HPLC avec détecteur fluorescence
   
   • Phase stationnaire aliphatique et phase mobile aqueuse
   • Permet la quantification individuelle des porphyrines.

Question 57

CRÉATININE KINASE

(méthodes)

Answer 57

Méthodes de routine :

1. Méthode enzymatique :
   
   • pH 6,7, EDTA, Mg2+
   • Creatine phosphate + ADP -^{<strong><u>CK</u></strong>}→ creatine + ATP
   • ATP + glucose -^{<strong><u>HK</u></strong>}→ glucose-6-P + ADP
   • Glucose-6-P + NADP+ -^{<strong><u>G6PD</u></strong>}→ 6-phosphogluconate + NADPH + H+
   • Mesure formation NADPH (bichromatique : 340 et 540 nm)

Méthode de référence :

• Variante de méthode de routine

Question 58

LIPASE

(méthodes)

Answer 58

Méthode de routine :

1. Méthode turbidimétrique ou néphélémétrique
   
   • Suivi de la consommation du substrat
2. Méthode enzymatique (préférée)
   
   • Sels biliaires, colipase, CaCl2
   • Chromogène 6’-méthyl-résorufine ester -^{<u><strong>Lipase</strong></u>}-> intermédiaire instable
   • Intermédiaire instable + H2O -> Acide glutarique + méthyl-résorufine
   • Abs à 577 nm

Question 59

Donner les CV analytiques du NCEP pour les différentes analyses du bilan lipidique

Answer 59

Question 60

ACIDE FOLIQUE

(préanalytique)

Answer 60

Préanalytique folate :

• Jeûne 8h
• Pas de suppléments d’acide folique depuis 2 semaines
• Autorisation requise par un hématologue ou un biochimiste (certain centre)

Question 61

CHLORURES

(méthodes)

Answer 61

Méthodes de routine :

• Électrodes spécifiques (ISE) directes et indirectes
  
  • Composante active: Sels d’ammonium quaternaires lipophiles

​Méthode de référence :

• Coulométrie

Question 62

ISOENZYME ALP

(méthode)

Answer 62

Différentes formes de l’ALP : os, foie, placenta, rein, intestin (*Comigration de ALP foie et os sur électrophorèse). Migration - → +

1. Traitement à la neuraminidase
   
   • Retrait de l’acide syalique terminal de l’ALP hépatique
   • Permet séparation de ALP foie et os (modifie charge)
2. Traitement à la chaleur
   
   • Inactivation de ALP foie, os et intestin
   • Dosage activité résiduelle
   • Activité résiduelle = ALP placenta, foetale et oncofoetale
3. Ajout d’une lectine
   
   • Lectine retarde l’ALP osseuse. Permet sa séparation de l’ALP hépatique

Question 63

LACTATE

(méthodes)

Answer 63

Méthode de routine :

1. Appareil à gaz sanguin (sang total héparine)
   
   • Biosenseur avec lactate oxydase entre 2 membranes avec perméabilité spécifique (lactate et H2O2).
   • Oxydation à l’anode de platine. Production d’un courant (signal ampérométrique proportionnel)
2. Méthode enzymatique (lactate oxydase) :
   
   • Lactate+ O2 -^{<strong><u>Lactate oxydase</u></strong>}-> H2O2
   • H2O2 + chromogène réduit -^{<strong><u>Peroxydase</u></strong>}-> chromogène oxydé
   • Pas entièrement spécifique au lactate (oxalate, glycolate)
3. Méthode enzymatique (lactate déshydrogénase) :
   
   • pH alcalin
   • Lactate + NAD -^{Lactate déshydrogénase}-> pyruvate + NADH
   • Mesure à 340 nm

Question 64

SODIUM

(méthodes)

Answer 64

Méthodes de routine :

• Électrodes spécifiques (ISE) directes et indirectes
  
  • Composante active : pointe de céramique sensible au Na+

​Méthode de référence :

• Photométrie de flamme

Question 65

ISOENZYME AMYLASE

(méthode)

Answer 65

Amylase pancréatique vs salivaire

• Specific measurement of pancreatic amylase activity involves the use of two monoclonal antibodies that bind and inhibit the salivary amylase enzyme in vitro.
• Prior to immunoinhibition for specific measurement of pancreatic amylase activity, amylase isoenzymes were separated using electrophoresis

Question 66

AST

(méthodes)

Answer 66

Méthode de routine :

• Méthode enzymatique : Méthode recommandée IFCC
  
  • pH 7,8 + Pyridoxal-5-phosphate (cofacteur)
  • L-aspartate + a-kétoglutarate -^{<u><strong>AST</strong></u>}-> oxaloacétate + L-glutamate
  • Oxalacétate + NADH + H+ -^{<b><u>malate déshydrogénase</u></b>}-> Malate + NAD

Question 67

CHOLESTÉROL TOTAL

(méthode)

Answer 67

Méthode de routine :STANDARDISATION PAR LE NCEP

• Méthode enzymatique (cholestérol estérase/oxidase) :
  
  • CHOL-ester + H2O -^{<u><strong>cholestérol</strong> <strong>estérase</strong></u>}-> CHOL + ac gras
  • CHOL + O2 -^{<u>cholestérol oxydase</u>}-> Cholest-4-en-3-one + H2O2
  • H2O2 + phénol + 4-aminoantipyrine -^{<u><strong>peroxydase</strong></u>}-> quinone + H2O
  • Abs 500 nm

Méthode de référence :

• Méthode Abell‐Levy‐Brodie‐Kendall (ALBK)
  
  • Extraction de cholestérol avec du Zéolite
  • Hydrolysation chimique des esters de cholestérol (saponification)
  • Mesure du cholestérol total par la réaction Liebermann‐Burchard
  • Cholestérol extrait => réagit avec acide sulfuric et de l’acide acétique anhydride
  • Formation d’un complexe coloré (410nm) acide cholestahexaene‐sulfonic

Méthode définitive :

• ID-MS

Question 68

ACIDE URIQUE

(méthodes)

Answer 68

Méthodes de routine :

1. Méthode uricase/peroxydase
   
   • Acide urique + O2 -^{<u>uricase</u>}→ H2O2 + CO2 + allantoine
   • H2O2 + chromogène réduit -^{<u>peroxydase</u>}→ chromogène oxydé
   • Suivi de la réaction par :
     
     • Consommation de l’acide urique (293 nm)
     • Consommation de l’O2
     • Production de H2O2 (peroxydase)
2. Méthode uricase (biosenseur et mesure consommation O2)
   
   • Urate + O2 -^{<u>uricase</u>}→ allantoin + H2O2 + CO2
   • Mesure de la consommation d’O2
3. Méthode chimique (acide phosphotungstique)
   
   • Urate + acide phosphotungstique → allantoin + CO2 + bleu de tungstène (Abs 700 nm)

Question 69

ACTH

(méthodes)

Answer 69

Méthode de routine :

• Immunoessais IRMA

Question 70

PBG

(méthodes)

Answer 70

Méthodes de routine :

1. Méthode LC-MS/MS
   
   • Chromatographie échangeuse d’ions
2. Essai enzymatique fluorométrique

Question 71

PHOSPHATE

(méthodes)

Answer 71

Méthode de routine :

1. Méthode de phosphomolybdate :
   
   • Molybdate de Na + PO4 -> Phosphomolybdate
   • Phosphomolybdate + PMAPS + NaHSO3 -^{<strong><u>pH 1,6</u></strong>}-> Complexe phosphomolybdate réduit
   • Abs à 340 nm