Analyses A (OCQ) Flashcards

Question

POTASSIUM | (préanalytique)

Answer 1

_Préanalytique mesure du K+ :_ * Prélever patient en condition d'équilibre : * K+ ↑ en **chimio** (lyse cell) * K+ ↓ après **repas** * K+ ↓ en cas de **transfusion** importante (héparine, transitoire) * Tube : * Seringue héparinée sèche pour appareils à gaz * Pas de tube **EDTA** * Enlever **garrot** rapidement pour éviter hémolyse * Éviter **coagulation/caillots** : K+ ↑ * **Hyperplaquettose** et **hyperleucocytose** : * K+ ↓ dans un 1er temps : Glycolyse et entrée de K+ intracell * K+ ↑ dans un 2e temps : Lyse cell * Conserver tube à **T° pièce** et centrifuger rapidement

Answer 2

_Préanalytique HbA1c :_ * Préparation du patient : * Pas de condition de préparation particulière : pas de jeûne, pas de timing particulier * Conditions récentes qui diminuent le taux de HbA1c : * Hémorragie importante * Hémolyse importante * Pas de transfusion récente * Épisode récent d’hyperglycémie * Ne doit pas être congelé si méthode HPLC * Collecte de l’échantillon : tube EDTA * Prélèvement stable 1 semaine à 4°C ou 24h à température pièce (peut être spécifique à la méthode) * NE PAS CENTRIFUGER

Answer 3

_Méthodes de routine :_ 1. Immunoessais 2. Immunoturbidimétrie 3. Immunonéphélémétrie

Answer 4

**Méthode avec la meilleure sensibilité et spécificité pour Dx phéo** * Arrêt certains Rx * Position couché 30 mins idéalement (minimise les FP) * Éviter le stress * Prélèvement -20 mins * Prélever sur glace * Centri rapide * +/- jeûne * Dosage LC-MS/MS

Answer 5

_Méthode fréquente :_ 1. Électrophorèse sur gel : * Patron de migration (pH 8,6) : * CK-MM le plus près du point d'application (cathode) * CK-MB a une migration intermédiaire * CK-BB le plus loin du point d'application (vers l'anode) * Visualisation : * Réaction enzymatique avec formation de NADPH * Quantification de la fluorescence de NADPH par densiométrie (excitation à 360 nm) 2. Immunoessais avec Ab bloquant sous-unité M * Ne permet pas de quantifier les différents isoformes. Permet seulement de quantifier un isoforme en particulier (CK-MB)

Answer 6

_Méthodes de routine :_ 1. Réduction du NBT en formazan : * Tampon carbonate, pH alcalin * Fructosamine \<=\> forme énéaminol * Forme énéaminol + NTB -\> formazan * NTB: nitrobleu de tétrazolium (NBT) * Mesure de l’Abs à 530nm * Changement Abs proportionnel à [fructosamine] 2. Méthode enzymatique (fructosaminase) * Fructosamine -^{Protéinase K}-\> fragments glyqués * Fragments glyqués -^{fructosaminase}-\> libération de H2O2 * Quantification à partir de H2O2

Answer 7

_Préanalytique ACTH :_ * Préparation du patient : * Arrêt de la médication (glucocorticoïdes) * Éviter stress * Prélèvement : * Faire prélèvement seulement à l’hôpital * Tube EDTA pré-refroidit * Transport sur glace, centri à froid, congeler immédiatement * Envoi sur glace sèche * Standardiser l’heure du prélèvement : prélever le matin (circadien) * Noter l’heure du prélèvement

Answer 8

_Méthodes de routine :_ 1. Réaction de Biuret * Réaction entre le réactif de Biuret (ions Cu2+ en milieu alcalin) avec les liens peptidiques des protéines 2. Réaction de Lowry * Réactif Folin (mélange d'acides molybdique et phosphotungstique et de cuivre alcalin) réagit avec les liaisons peptidiques, les résidus tyrosine et tryptophane * Production d'une couleur bleue (660 nm) 3. Méthode de Bradford * Utilisation du bleu de coomassie brillant. * Colorant se lie aux NH3 des protéines. * Abs à 595 nm 4. Méthode turbidimétrique * Ajout d’un agent précipitant les protéines (TCA, chlorure d’ammonium, chlorure de benzothélium) * Quantification du précipité par turbidimétrie 5. Pyrogallol rouge-molybdate * Réaction entre le complexe rouge pyrogallol-molybdate et la protéine * Provoque un shift du spectre d'absorption de 460 à 600 nm * Proportionnel à la concentration en protéines totales

Answer 9

_Préanalytique cholestérol total :_ * Position lors du prélèvement : couché ↓ CHOL * Garrot trop longtemps : CHOL ↑ * Stress, inflammation (infection) : CHOL ↑ * Variation biologique : * CHOL plus ↑ l’hiver * CHOL ↑ avec l’âge * Grossesse = ↓ du CHOL (1er trimestre) * Syndrome néphrotique et hypothyroïdie = CHOL ↑ * Interprétation du CHOL en fonction de la variation biologique : * Grande variation bio. Prélèv en série préférable pour la clinique. Au moins 2-3 semaines d’intervalle entre les dosages

Answer 10

_Méthode de routine :_**MÉTHODE STANDARDISÉE IFCC** 1. Créatinine Jaffé : * Picrate alcalin + créatinine -\> Chromogène (rouge) 2. Créatinine enzymatique : * **Créatinine** + H2O -**^{créatinine amidohydrolase}**-\> **créatine** * **Créatine** + H2O -**^créatinase**-\> urée + **sarcosine** * **Sarcosine** + O2 + H2O -**^{sarcosine oxydase}**-\> **H2O2** + formaldéhyde + glycine * **H2O2** + chromogène réduit -**^peroxydase**-\> **chromogène oxydé** + H2O _Méthode de référence :_ * ID-MS

Answer 11

_Méthode de routine :_ 1. Méthode activité : * Utilisation d’un anticorps spécifique à la sous-unité M qui inhibe l’activité de la SU * Dosage de l’activité de la CK: Pas d’activité de la CK-MM * pH 6,7 * Créatinine phosphate +ADP -^CK-\> créatinine + ATP * ATP + glucose -^hexokinase-\> Glucose-6-P + ADP * Glucose-6-P + NAD -^G6PD-\> 6-phosphogluconate + NADH + H+ * Mesure à 340 nm (NADH) 2. Méthode masse : * Immunoessais sandwich avec Ab spécifique à l'isoforme MB

Answer 12

_Méthode de routine :_ * Méthode immunologique (variable d’une compagnie à l’autre) * Directement proportionnel, utilisation de billes magnétiques * CLIA Hétérogène, 2 steps (Abbott) * LOCI Homogène, 2 step (Siemens)

Answer 13

_Méthode de routine :_ * Électrode ISE directe _Méthode de référence :_ * Photométrie de flamme _Méthode définitive :_ * ID-MS

Answer 14

* Jeûne 8h * Éviter alcool et café 24h avant * Éviter fumer 4h avant * Éviter certains Rx : benzo, opioïdes, cocaïne * Couché 30 minutes * Installer une canule * Éviter le stress * Tube pré-refroidit * Héparine Li ou EDTA-Na (spécial, Mayo) * Transport sur glace * Centri rapide * Décanter et congeler rapide

Answer 15

_Méthode de routine :_ 1. Cofacteur dans une réaction enzymatique (isocitrate déshydrogénase): * Acide d-isocitrique + NADP -**_^{isocitrate déshydrogénase, Mg2+}_**-\> 2-oxoglutarate + CO2 + NADPH * Signal à 340 nm (augmentation de NADPH) 2. Méthode colorimétrique : Bleu de méthylène (ou bleu de méthylthymol) * Mg2+ + Bleu méthylène -\> Complexe coloré (Abs 600 nm) * Effet de Ca2+ éliminé via ajout de Ba-EGTA 3. Méthode colorimétrique : Bleu de xylidyl * pH alcalin * Mg2+ + bleu de xylidyl -\> Complexe bleu (505 nm) _Méthode de référence :_ * Photométrie de flamme _Méthode définitive :_ * Dilution isotopique d'activation neutronique

Answer 16

_Méthodes de routine :_ 1. Dépression du point de congélation 2. Osmomètre à tension de vapeur * *N'inclus pas les substances volatiles dans le résultat de l'osmolalité*

Answer 17

_Méthode de routine :_ * Dosage enzymatique (**oxalate oxidase**) : * **Oxalate** + O2 -^{oxalate oxidase}→ CO2 + **H2O2** * **H2O2** + MBTH + DMAB -**^peroxidase**→ **Idamine coloré** + H2O * MBTH : 3-méthyl-2-benzothizlinone hydrazone * DMAB : 3-diméthyl amino benzoïque

Answer 18

_Méthode de routine :_ * Méthode de Jendrassik-Grof (SANS caféine) * Méthode diazo : * Bilirubine soluble + acide sulfanilique diazoté -\> Bilirubine-diazo (rouge) * Absorbance à 540 nm

Answer 19

_Méthodes de routine :_ 1. Estimation des LDL-C par l'équation de Friedewald : * LDL-C = CHOL total - HDL-C - TG/2,2 * Calcul non valable si TG \> 4,5 2. Méthode enzymatique directe : Principe similaire à HDL-C * Réactifs sélectifs bloquent HDL, VLDL et CM * LDL-C solubilisé par enzyme et surfactants -\> Cholest-4-en-3-one + H2O2 * H2O2 + 4-aminophènezone + HSDA + enzyme -\> couleur * *(!) : Non applicable pour patients avec dyslipidémie et moins performant lorsque TG \> 4,5. Recommandé de calculer CHOL non-HDL* 3. Mesure directe (bêta-quantification) * Ultracentrifugation et utilisation d’héparine + MnCl2

Answer 20

_Méthodes de routine_ : **MÉTHODE STANDARDISÉE** 1. Chromatographie d'affinité (boronate) * Hb glyquée se lie au boronate, Hb non glyquée ne se lie pas. * Détection par absorbance 2. Électrophorèse capillaire * La séparation des espèces d'hémoglobine est basée sur des différences de charge. 3. Chromatographie échangeuse d'ions (HPLC) * La séparation des espèces d'hémoglobine est basée sur des différences de charge. 4. Immunoessais : Immunoturbidimétrie compétitif * Ab vs portion N-terminale incluant la glycation (4 premiers aa) 5. Méthode enzymatique * Mesure de Hb total et HbA1c (via glycation clivée) * Mesure de HbA1c : * Clivage du résidu glyqué * Les valines glyquées servent de substrat pour la **fructosyl valine oxydase** dans une réaction couplée avec la **peroxydase** de raifort. * L'agent coloré résultant est mesuré par spectrophotométrie. _Méthode de référence_ : 2 méthodes * Mesure des peptides N-terminaux glyqués et non glyqués spécifiques de la chaîne bêta par HPLC et spectrométrie de masse ou électrophorèse capillaire. * HPLC + MS * HPLC + Électrophorèse capillaire (!) Pas de méthode définitive

Answer 21

_Préanalytique lactate :_ * Pas de **garrot** (↑ lactate) * Ne pas serrer le **poing** * Éviter **exercice**, même faible (↑ lactate) * **Glucose** ou **HCO3** IV ↑ lactate * **Repas** ↑ lactate * **Catécholamines** ↑ lactate * Prélèvement : * Héparine Na ou Li * Prélever et mettre immédiatement sur **glace** * Tube gris peut également être utilisé (stable 8h à Tp) * Transport et conservation : * Acheminer rapidement au laboratoire (\< 15 minutes) * Centrifuger en \< 1h

Answer 22

_Méthodes de routine :_ 1. Méthode par **gravimétrie** : * Extraction des gras par un solvant. Évaporation du solvant et pesée de l’échantillon correspond aux graisses * Désavantage : Solvant extrait des molécules hydrophobes autres que des graisses. Surestimation de la collecte 2. Méthode par **titrimétrie** : * Ajout de KOH et d’alcool dans l’échantillon. * Acidification et extraction des acides gras * Évaporation du solvant et dissolution des résidus dans l’alcool. * Titration avec NaOH (indicateur = bleu de thymol) * Désavantage : peut sous-estimer les acides gras à moyennes chaines. Long et manuel 3. **Méthode qualitative** * **Coloration au Sudan III** * Chauffer échantillon et observer goutelettes de lipides au microscope * Interprétation subjective

Answer 23

_Méthode de routine :_ 1. Méthode colorimétrique : * Ajout d’une quantité X de fer dans la réaction pour saturer tous les sites de la transferrine * Doser le fer non lié : NE PAS ACIDIFIER l’échantillon * Réduction du Fe3+ libre en Fe2+ * Ajout d’un chromogène (ferrozine) pour complexer le fer et former un complexe qui absorbe à 550 nm. * Mesure de l’absorbance à 550 nm * L’UIBC est déduit : UIBC = fer initial – fer mesuré

Answer 24

HPLC * Prétraitement * Méthode manuelle * Méthode prévilégiée : HPLC-ECD

Answer 25

_Préanalytique ammoniac :_ * Augmentation NH3 * Cigarette * Exercice * Diète riche en protéine * Tx contenant glutamine * Rx : barbituriques, VPA, opioïdes * Serrer le poing, garrot * Site de ponction mal nettoyé * Coagulation de l’échantillon (sérum) * GGT élevée * Pas de garrot * Éviter hémolyse * Tube prérefroidit, transport sur glace * Tube mal rempli ou ouvert à l’air libre (NH3 volatil, diminution) * Envoyer au laboratoire rapidement (\< 15 minutes) * NH4 augmente dans plasma et sang total * Centrifuger dès la réception, décanter * Congeler à -70°C si non analysé immédiatement

Answer 26

_Méthode de routine :_ * Test au nitroprusside (urine) : spécifique à acétone et acétoacétate * **Réactif + Ac/AcAc -\> composé coloré** * B-hydroxybutyrate déshydrogénase (sang) : * Réaction à pH 8,5 : * **B-HBT + NAD⁺ -\> Acétoacétate + NADH + H⁺ + é** * Courant généré par la réaction redox détecté par un détecteur électrochimique.

Answer 27

_Méthode de routine :_ 1. **Électrode ISE** : * Acidification du milieu pour libérer le Ca2+ lié aux protéines * Membrane sélective au Ca (potentiométrie) * Échantillon maintenu à 37°C 2. **o-crésolphtaléine complexone (CPC) :** * Échantillon dilué dans solution acide pour libérer le Ca2+ lié * Réaction à pH alcalin : * **CPC + Ca -\> produit coloré (570-580 nm)** 3. **Arsesano III** * Rxn à pH acide (pH 6) : * **Arsenazo III + Ca -\> produit coloré (650 nm)** * Imidazole utilisé pour tamponner la rxn : (!) Propriétés spectrales de Arsenazo sont dépendantes du pH _Méthode de référence :_ * Photométrie de flamme _Méthode définitive :_ * ID-MS

Answer 28

_Méthodes de routine :_ 1. Colorimétrique : Bromocrésol vert (Abs 628 nm) 2. Colorimétrique : Bromocrésol pourpre (Abs (603 nm) 3. Immunoessais, Turbidimétrie, néphélémétrie 4. Électrophorèse 5. Méthode dosage UV _Méthode de référence :_ * Néphélémétrie

Answer 29

_Méthodes de routine :_ 1. Électrode ISE * Éch + tampon à pH 10,4 produit libération NH4+ (gaz) * Gaz diffuse vers membrane semi-perméable * Produit un changement de pH (électrode de verre) * Détection par potentiométrie 2. Méthode enzymatique (+ fréquent) * NH4+ + 2-oxoglutarate + NADH + H+ -^{glutamate déshydrogénase}→ NAD+ + glutamate + H2O * Proportionnel à diminution de l’Abs à 340nm 3. Chromatographie échange ionique * Résine échangeuse de cations * NH3 éluée et mesurée avec la réaction de Berthelot 4. Chimie séche * Éch + tampon pH 9,2 (Borate) = libération NH4+ (gaz) * NH4 diffuse à travers une membrane semi-perméable dans une couche contenant un indicateur de pH * Changement de couleur de l’indicateur de pH mesuré par réflectance * Vitros : Bleu de bromophénol (600 nm) _Pas de méthode de référence_

Answer 30

_Méthode de routine_ : * Méthode de Jendrassik-Grof (avec caféine) * Solubilisation de la bili non-conjuguée : caféine, benzoate, acétate, EDTA * Méthode diazo : * Bilirubine soluble + acide sulfanilique diazoté -\> Bilirubine-diazo (rouge) * Absorbance à 540 nm

Answer 31

_Méthodes de routine :_ 1. Méthode enzymatique : * Urée +H2O -^uréase-\> NH3 + CO2 * NH3 + α-kétoglutarate + NADH -^{glutamate déshydrogénase}-\> L-glutamate + NAD 2. Méthode conductimétrique : * Urée +H2O -^uréase-\> NH3 + CO2 * Mesure du changement de conductivité

Answer 32

_Méthode de routine :_ * **Prétraitement** : Quantification des porphyrines par multiples extractions et séparation par HPLC : * Protocole général d’extraction : Phase aqueuse + phase organique * Molécules solubles récupérées dans la phase aqueuse * Back extraction de la phase organique avec une phase aqueuse et une phase organique acidifiée * Changement de pH modifie la solubilité des porphyrines (pH \< 2 = protonation des porphyrines) 1. Méthode qualitative : * Analyse spectrofluorométrique : Scan de la phase aqueuse pour quantifier porphyrines totales 2. Méthode quantitative : HPLC avec détecteur fluorescence * Phase stationnaire aliphatique et phase mobile aqueuse * Permet la quantification individuelle des porphyrines.

Answer 33

_Méthodes de routine :_ 1. Méthode enzymatique : * pH 6,7, EDTA, Mg2+ * Creatine phosphate + ADP -^CK→ creatine + ATP * ATP + glucose -^HK→ glucose-6-P + ADP * Glucose-6-P + NADP+ -^G6PD→ 6-phosphogluconate + NADPH + H+ * Mesure formation NADPH (bichromatique : 340 et 540 nm) _Méthode de référence :_ * Variante de méthode de routine

Answer 34

_Méthode de routine :_ 1. Méthode turbidimétrique ou néphélémétrique * Suivi de la consommation du substrat 2. Méthode enzymatique (préférée) * Sels biliaires, colipase, CaCl2 * Chromogène 6'-méthyl-résorufine ester -^Lipase-\> intermédiaire instable * Intermédiaire instable + H2O -\> Acide glutarique + méthyl-résorufine * Abs à 577 nm

Answer 35

_Préanalytique folate :_ * Jeûne 8h * Pas de suppléments d’acide folique depuis 2 semaines * Autorisation requise par un hématologue ou un biochimiste (certain centre)

Answer 36

_Méthodes de routine :_ * Électrodes spécifiques (ISE) directes et indirectes * Composante active: Sels d’ammonium quaternaires lipophiles _Méthode de référence :_ * Coulométrie

Answer 37

Différentes formes de l'ALP : os, foie, placenta, rein, intestin (\*Comigration de ALP foie et os sur électrophorèse). Migration - → + 1. Traitement à la **neuraminidase** * Retrait de l'acide syalique terminal de l'ALP hépatique * Permet séparation de ALP foie et os (modifie charge) 2. Traitement à la **chaleur** * Inactivation de ALP foie, os et intestin * Dosage activité résiduelle * Activité résiduelle = ALP placenta, foetale et oncofoetale 3. Ajout d'une **lectine** * Lectine retarde l'ALP osseuse. Permet sa séparation de l'ALP hépatique

Answer 38

_Méthode de routine :_ 1. Appareil à gaz sanguin (sang total héparine) * Biosenseur avec lactate oxydase entre 2 membranes avec perméabilité spécifique (lactate et H2O2). * Oxydation à l’anode de platine. Production d’un courant (signal ampérométrique proportionnel) 2. Méthode enzymatique (lactate oxydase) : * Lactate+ O2 -^{Lactate oxydase}-\> H2O2 * H2O2 + chromogène réduit -^Peroxydase-\> chromogène oxydé * Pas entièrement spécifique au lactate (oxalate, glycolate) 3. Méthode enzymatique (lactate déshydrogénase) : * pH alcalin * Lactate + NAD -**_^{Lactate déshydrogénase}_**-\> pyruvate + NADH * Mesure à 340 nm

Answer 39

_Méthodes de routine_ : * Électrodes spécifiques (ISE) directes et indirectes * Composante active : pointe de céramique sensible au Na+ _Méthode de référence_ : * Photométrie de flamme

Answer 40

_Amylase pancréatique vs salivaire_ * Specific measurement of pancreatic amylase activity involves the use of two monoclonal antibodies that **bind and inhibit the salivary amylase enzyme** in vitro. * Prior to immunoinhibition for specific measurement of pancreatic amylase activity, amylase isoenzymes were separated using electrophoresis

Answer 41

_Méthode de routine :_ * Méthode enzymatique : Méthode recommandée IFCC * pH 7,8 + Pyridoxal-5-phosphate (cofacteur) * L-aspartate + a-kétoglutarate -^AST-\> **oxaloacétate** + L-glutamate * Oxalacétate + **NADH** + H+ -^{malate déshydrogénase}-\> Malate + **NAD**

Answer 42

_Méthode de routine :_**STANDARDISATION PAR LE NCEP** * Méthode enzymatique (cholestérol estérase/oxidase) : * **CHOL-ester** + H2O -^{cholestérol estérase}-\> **CHOL** + ac gras * **CHOL** + O2 -**^{cholestérol oxydase}**-\> Cholest-4-en-3-one + **H2O2** * **H2O2** + phénol + 4-aminoantipyrine -^peroxydase-\> **quinone** + H2O * Abs 500 nm _Méthode de référence_ : * Méthode Abell‐Levy‐Brodie‐Kendall (ALBK) * Extraction de cholestérol avec du Zéolite * Hydrolysation chimique des esters de cholestérol (saponification) * Mesure du cholestérol total par la réaction Liebermann‐Burchard * Cholestérol extrait =\> réagit avec acide sulfuric et de l’acide acétique anhydride * Formation d’un complexe coloré (410nm) acide cholestahexaene‐sulfonic _Méthode définitive :_ * ID-MS

Answer 43

_Méthodes de routine :_ 1. **Méthode uricase/peroxydase** * **Acide urique** + O2 -**^uricase**→ **H2O2** + CO2 + allantoine * **H2O2** + chromogène réduit -**^peroxydase**→ chromogène oxydé * Suivi de la réaction par : * Consommation de l’acide urique (293 nm) * Consommation de l’O2 * Production de H2O2 (peroxydase) 2. **Méthode uricase** (biosenseur et mesure consommation O2) * Urate + O2 -**^uricase**→ allantoin + H2O2 + CO2 * Mesure de la consommation d'O2 3. Méthode chimique (**acide phosphotungstique**) * Urate + acide phosphotungstique → allantoin + CO2 + bleu de tungstène (Abs 700 nm)

Answer 44

_Méthode de routine :_ * Immunoessais IRMA

Answer 45

_Méthodes de routine :_ 1. Méthode LC-MS/MS * Chromatographie échangeuse d'ions 2. Essai enzymatique fluorométrique

Answer 46

_Méthode de routine :_ 1. Méthode de phosphomolybdate : * Molybdate de Na + PO4 -\> Phosphomolybdate * Phosphomolybdate + PMAPS + NaHSO3 -^{pH 1,6}-\> Complexe phosphomolybdate réduit * Abs à 340 nm