A.Methodes Flashcards
Expliquer les avantages et inconvénients de l’utilisation de tissu animal ou cellules en culture comme source de matériel pour la biologie cellulaire
Tissu animal : + grandes quantité de matériels pour étude biochimique mais - difficile a manipuler
Cellules en culture: +facile a manipuler et visualiser mais - compliquer a faire pousser avec matériel limité
Différentier cellule primaire, immortalisée et transformée. Quels sont les avantages et inconvénients de chacun ?
- Primaires: prélevé directement du tissu donc se rapproche de la réalité (pres de cellules a l’interieur de l’organisme) mais privé de leur milieu de vertus ainsi limité dans la division cellulaire et difficile a cultivé
- Immortalisé: Se divise indéfiniment donc s’éloigne de la réalité, spontané(gène dérégulant le cycle cellulaire) mais ne forme pas de tumeurs
- Transformées: se reproduisent indéfiniment mais manque de contrôle, mutations oncogeniques donc formation des tumeurs ( HeLa)
Définir protéine, enzyme, site actif, ligand, substrat et produit
- Protéine: Macromolécules composé d’une chaines polypeptidiques linéaires et repliées dans une forme tridimensionnel dans son état natif, biologiquement actif
- Enzyme: protéine qui catalyse une réaction chimique particulière impliquant un substrat
- site actif: région spécifique d’un enzyme qui lit la molécule a un substrat favorisant la modification chimique de ce dernier
- Substrat: molécule sur laquelle s’exerce l’activité catalytique d’une enzyme
- produit: substance issu d’un mélange chimique
- ligand: molécule qui se lit de manière réversible a une macromolécule ciblée jouant un rôle fonctionnel
Décrire brièvement (une phrase sur l’utilité, pas de détail méthodologique) les différentes méthodes utilisées pour étudier les enzymes et organites cellulaires
Source de la cellule
mesurer son activité
visualiser
Pour les étudier nous devons prendre connaissance de leur structure afin de les visualiser et connaitre leur mouvement et mesurer l’activité cellulaire. tout sa est permis par differentes methodes (une colometrie et fluometrie avec notre molecule)
Expliquer les limites physiques de la microscopie photonique et de la microscopie Électronique
- Electronique:propriété de la lumière ( resol max 0.2 micromètre) spectre de lumière minime requiert plus de préparation et de connaissance
- Photonique: résolution et transparence de l’échantillon
Différentier microscope électronique à transmission et à balayage (connaitre les principes) (SEM et TEM)
Microscope électronique :
Offre une résolution de beaucoup supérieure à la microscopie optique
Utilise des électrons plutôt que de la lumière
Deux types → Microscope électronique à transmission (TEM) et Microscope électronique à balayage (SEM)
-Microscope électronique à transmission
Processus complexe de préparation des échantillons
Chambre du microscope sous vide
Nécessite fixation et la coloration de l’échantillon
Sections très minces (Faible pénétrance des électrons dans le tissu)
Échantillon déshydraté
-Microscope électronique à balayage
Similaire à TEM
Permet d’obtenir une image 3D de la surface de l’échantillon
Utilisé pour analyser la surface de cellule ou d’organisme plutôt que de structures intracellulaires
L’échantilon est couvert de métaux lourds
Les électrons dispersés sont collectés
Expliquer les différentes méthodes permettant de visualiser les cellules par microscopie photonique (contraste de phase, colorants, fluorescence)
- contraste de phase est un microscope qui exploite les changements de phase d’une onde lumineuse traversant un échantillon
- Colorants : On peut colorer des échantillons (tissus) avec des colorants pour marquer les différents éléments que l’on veut observer
-Fluorescence, Permet de détecter des molécules spécifiques (proteines, ions) et de marquer des organelles
Utilise la propriété de certaines molécules d’absorber et d’émettre des photons à des longueur d’ondes spécifiques
*immunoflorescence (Fluorescence couplé au anti corps)
Utilisation d’un anticorps spécifique pour une protéine cellulaire
Visualisation du complexe anticorps-protéine à l’aide d’un anticorps secondaire couplé à une molécule fluorescente
Expliquer l’utilité et les limitations de l’utilisation d’anticorps couplés à une molécule fluorescente et de protéines fluorescentes (type GFP)
Immunofluorescence a une spécificité anticorps – antigène. On attaque la seconde avec molécule fluorescence. Raison :
Anticorps acheté ne sont pas marqué
Amplifie la détection car anticorps secondaire sera plusieurs attaché
GFP : C’est une protéine fluorescente isolée de Aequoria victoria
Elle peut être fusionnée a d’autre proteine
Permet de visualiser des protéines dans des cellules vivantes
Différentes variantes (CFP, YFP) ont été créées par mutagénèse •
Existance d’autres protéines fluorescentes
Expliquer l’utilité de la déconvolution et de la microscopie confocale.
Étant donné que la résolution du microscope optique est limitée par l’épaisseur du spécimen.
Ces deux techniques permettent d’obtenir des images claires à partir d’un spécimen épais.
Déconvolution (Traitement d’image d’un microscope optique) : la déconvolution est un procédé algorithmique destiné à inverser les effets de la convolution.
La déconvolution permet d’améliorer la résolution et le bruit des images en microscopie de fluorescence1. La déconvolution nécessite normalement la connaissance de la fonction d’étalement du point / PSF, qui est propre à l’instrument (c.-à-d. au microscope)
Microscope confocal : est un microscope optique qui a la propriété de réaliser des images de très faible profondeur de champ (environ 400 nm) appelées « sections optiques »
Le microscope confocal fonctionne en lumière réfléchie ou en fluorescence
Nommer les différents organismes modelés utilisés en recherche
- les levures
- les drosophiles
- bactéries tels que E.Coli
- mammifères: souris , rats
- vegetaux
- vers C elegans
