9. PCR

Question 1

Cos’è la PCR?

Answer 1

è una tecnica che serve ad amplificare frammenti di DNA in copia singola o poche copie, generando fino a milioni di copie della sequenza stessa.

Question 2

Quali sono le indicazioni della PCR?

Answer 2

-Clonaggio e sequenziamento del DNA
-Studiare la filogenesi del DNA
-Studiare la funzionalità di un gene
-Diagnosi di malattie ereditarie conoscendo i geni ereditati
-Fingerprint del DNA

Question 3

Cosa serve per una reazione di PCR?

Answer 3

-DNA templato
Primer di 15-20pb complementari alla sequenza target
-DNA polimerasi (termos aquaticus)
-Deossinucluotidi, tutti e 4
-ione magnesio o manganese
-soluzione tampone 7pH

Question 4

Come avviene la reazione?

Answer 4

-Denaturazione: 94º
-Anellamento: circa 60º per l’ibridazione dei primer al DNA
-Estensione: 70º
-Colorazione con bromuro d’etidio

Question 5

Cos’è la RT-PCR?

Answer 5

è una tecnica che permette di amplificare il DNA a partire da un filamento di RNA. Si sfrutta la capacità dei retrovirus, ma si usano anche delle retrotrascrittasi che funzionano da polimerasi.

Question 6

Cos’è la PCR quantitativa?

Answer 6

è una tecnica che ci permettere di confrontare caratteristiche di espressione genica di un tessuto leso rispetto al tessuto normale

Question 7

Cos’è l’end-point-PCR?

Answer 7

è una tecnica semiquantitativa che permette di individuare mutazioni nel DNA sfruttando delle sonde specifiche che vengono disegnate per andare a cercare la mutazione stessa