7. Immunoistochimica

Question 1

Cos’è l’immunoistochimica?

Answer 1

è una tecnica che si basa sull’utilizzo di una sonda (un anticorpo) che viene creato in una specie diversa dall’uomo che è stato immunizzato con l’antigene che voglio l’anticorpo riconosca.

Question 2

Come si riconosce il legame tra antigene ed anticorpo?

Answer 2

Per vedere la reazione, bisogna marcare l’anticorpo con una sonda, che può essere un enzima o con una sostanza fluorescente.

Question 3

Come si crea un anticorpo monoclonale?

Answer 3

Si prendono i linfociti T dalla milza di un topo e si legano alle cellule del mieloma e vengono prodotti gli anticorpi per un determinato antigene

Question 4

Come avviene il legame antigene-anticorpo?

Answer 4

il tessuto con gli anticorpi è fissato in formalina, quindi deve subire un processo di smascheramento che permette di rompere i legami aldeidi che si sono formati durante la fissazione.

Question 5

Come funziona l’immunoenzimatica?

Answer 5

SI usa un microscopio ottico normale per vedere il legame tra antigene-anticorpo. Comunemente si usa la perossidasi, insieme all’acqua ossigenata e alla tiamina benzedrina (cromogeno) che favorisce la colorazione.

Question 6

Cosa si può fare con l’immunoistochimica?

Answer 6

-Diagnosi
-Istogenesi di un tumore (e capire se è primitivo o una metastasi) tramite ricerca di marker
-Classificazione dei linfomi
-HER2 mammella (FISH se +2)
-Traslocazioni
-Prognosi (p67)

Question 7

Quali sono i limiti dell’immunofluorescenza?

Answer 7

-Perdita dei dettagli morfologici
-Necessità di microscopio a fluorescenza
-Autofluorescenza dei tessuti
-Rapido decadimento dei fluorocromi

Question 8

Quali sono i vantaggi dell’immunofluorescenza?

Answer 8

-Maggiore sensibilità e risoluzione
-Rapidità di esecuzione