Тема 2 - Култивиране (Среди)

Question 1

Какво е чиста култура? Ккаво е смесена култура?

Answer 1

• чиста култура съдържа МО от един единствен вид
• смесената култура съдържа МО от 2+ вида

Question 2

Какво е обогатена култура и как се получава?

Answer 2

Култура, в която преобладават представителите на даден микробен вид или група МО. Проба от изходния материал се култивира при условия, благоприятни за развитието на желаните МО (подбор на елективни или селективни условия)

Question 3

Същинско изолиране на чиста култура

Answer 3

1) Концепция: 1 КЛЕТКА = 1 вид (капков метод на ЛИндер с микроманипулатор или микроселектор)
2) Концепция: 1 КОЛОНИЯ = 1 вид (фракционен метод на Пастьор, изтощаващ разсев по Дригалски)

Question 4

Фракционен метод на Пастьор

Answer 4

10-кратни разреждания и посяване на петри от последните

Question 5

Метод на изтощаващия разсев по Дригалски

Answer 5

плътен посев в петри с шпатула или на щрих с йозе (пренасяне от петри в петри без стерилизация на инструмента)

Question 6

Проверка на чистотата на ЧК

Answer 6

• макроскопски (визуален контрол)
• миксоскопски
• култивационен

Question 7

Съхранение на чиста култура

Answer 7

• периодично препосяване
• под минерално масло
• лиофилизация
• ниски и свърхниски температури

Question 8

Основни изисквания към хранителна среда

Answer 8

• въглероден и азотен източник
• макроелементи - фосфор, сяра, калий, калций, магнезий, натрий
• микроелементи като желязо и други редки метали
• фактори на растежа

Question 9

Видове хранителни среди по състав

Answer 9

1) обикнвоени - месно-пентонен бульон (МПБ) и месно-бульонен агар (МПА)
2) сложни - към обикновените среди се добавят кръв, животински или човешки серум, глюкоза, белтъци и др.

Question 10

Видове хранителни среди по състав

Answer 10

• природни (комплексен и неконтролиран състав)
• синтетични (определени химични вещества в известна концентрация)
• полусинтетични

Question 11

Видове хранителни среди по предназначение

Answer 11

1) елективни - подпомагат развитие на търсени МО, но не пречат на останалите микробни видове (Льофлер за дифтерии)
2) селектвини - пречат на растежа на други МО (туберколозни бактерии)
3) диференциално-диагностични - служат предимно за култивиране на чревни бактерии в зависимот от промяна на вида и цвета на развиващите се върху тях колонии (Ендо за Е.коли)

Question 12

Хранителни среди E. coli, L. mesenteroides, T. thioparus

Answer 12

4 среди, сред които 3 синтетични и една комплексна. 3те синтетични всяка е пригодена към 1 вид; комплексната поддържа E. coli и L. mesenteroides.
L. mesenteroides има изисквания за по-обогатена среда.
T. thioparus не изисква въглероден източник, тъй като си го набавя от въглеродния диоксид и запазва енергия от окислението на тиосулфата (има най-голям биосинтетичен капацитет)

Question 13

Видове МО по отношение към кислород

Answer 13

• Облигатни аероби
• факултативни аероби
• микроарофили (аероби)
• аеротолерантни (анаероби)
• облигатни анаероби

Question 14

Облигатни аероби

Answer 14

• задължително присъствие на кислород
• аеробно дишане
• Micrococcus luteus, кожа и прах

Question 15

Факултативни аероби

Answer 15

• не изискват кислород, но растат по-добре при кислород
• аеробно и анаеробно дишане, ферментация
• E. coli

Question 16

Микроаерофили

Answer 16

• задължително кислород, но в по-ниски нива от атмосферните
• аеробно дишане
• spirillum volutans, езера

Question 17

Аеротолерантни

Answer 17

• ферментация
• Streprococcus pyogenes

Question 18

Облигатни анаероби

Answer 18

• ферментации или анаеробно дишане
• археата Methanovacterium formicicum (езерни утайки и кал без кислород)

Question 19

Култивиране на аероби

Answer 19

• нужно е екстензивно аериране (тъй като кислородът от въздуха не се обменя достатъчно бързо)
• енергично разклащане на клатачен апарат (най-добре) или продухване със стерилен въздух

Question 20

Култивиране на анаероби

Answer 20

• в зависимост от чувствителност към кислорода
• при тези, които са толерантни: епруветки с гумени тапи (аноксични условия)
  -редуктори, които реагират с кислорода за образуване на вода, като тиогликолат

Question 21

Тиогликолатен бульон

Answer 21

• за тестване на организма за изискване към О2
• с малко агар; течен, но вискозен
• добавя се индикаторно редокс багрило ресазурин (розово при окислено състояние и безветно при редуцирано)

Question 22

Как се разпределят аеробите и анаеробите в тиогликолатния бульон?

Answer 22

• облигатни аероби - само в горната част
• факултативни аероби - по цяата дължина, но най-вече горе
• микроаерофили - близо до гоена част, но не в кислородна зона
• облигатен анаероб - само на дъното
• аеротолерантен - цялата проба

Question 23

Как се отстранява следи от кислород в хранителна среда след посявка?

Answer 23

поставя се в култивационни камери, в които кислородната атмосфера се замества със смес от Н2 и въглероден диоксид
- в присъствието на катализатор паладий следите от кислород в средата се превръшат във вода => АНОКСИ условия

Question 24

Токсични форми на кислорода

Answer 24

Синглетен кислород (1СО2)
Супероскиден анион (О2-)
Водороден пероксид (Н2О2)
Хидроксилен радикал (OH*)

Question 25

Ензими за обезвереждане на водороден пероксид

Answer 25

каталаза, пероксидаза

Question 26

ензими за обезвреждане на супероксиден анион

Answer 26

• супероксид дисмутаза
• супероксид редуктаза (уникален ензим, при някои Археи, като Pyrococcus furiosus)

Question 27

Как действа супероксид редуказата?

Answer 27

обезврежда супероскидния анион без производство на кислород
- донорът на електрони за супероксид редуктазата е желязо (серния белтък рубредоксин, който е с нисък редокс потенциал)

Question 28

Как P. furiosus остранява водороден пероксид?

Answer 28

• липсва каталаза
• чрез пероксидазо-подобни ензими
• превръща във вода