Тема 2 - Култивиране (Среди) Flashcards
Какво е чиста култура? Ккаво е смесена култура?
- чиста култура съдържа МО от един единствен вид
- смесената култура съдържа МО от 2+ вида
Какво е обогатена култура и как се получава?
Култура, в която преобладават представителите на даден микробен вид или група МО. Проба от изходния материал се култивира при условия, благоприятни за развитието на желаните МО (подбор на елективни или селективни условия)
Същинско изолиране на чиста култура
1) Концепция: 1 КЛЕТКА = 1 вид (капков метод на ЛИндер с микроманипулатор или микроселектор)
2) Концепция: 1 КОЛОНИЯ = 1 вид (фракционен метод на Пастьор, изтощаващ разсев по Дригалски)
Фракционен метод на Пастьор
10-кратни разреждания и посяване на петри от последните
Метод на изтощаващия разсев по Дригалски
плътен посев в петри с шпатула или на щрих с йозе (пренасяне от петри в петри без стерилизация на инструмента)
Проверка на чистотата на ЧК
- макроскопски (визуален контрол)
- миксоскопски
- култивационен
Съхранение на чиста култура
- периодично препосяване
- под минерално масло
- лиофилизация
- ниски и свърхниски температури
Основни изисквания към хранителна среда
- въглероден и азотен източник
- макроелементи - фосфор, сяра, калий, калций, магнезий, натрий
- микроелементи като желязо и други редки метали
- фактори на растежа
Видове хранителни среди по състав
1) обикнвоени - месно-пентонен бульон (МПБ) и месно-бульонен агар (МПА)
2) сложни - към обикновените среди се добавят кръв, животински или човешки серум, глюкоза, белтъци и др.
Видове хранителни среди по състав
- природни (комплексен и неконтролиран състав)
- синтетични (определени химични вещества в известна концентрация)
- полусинтетични
Видове хранителни среди по предназначение
1) елективни - подпомагат развитие на търсени МО, но не пречат на останалите микробни видове (Льофлер за дифтерии)
2) селектвини - пречат на растежа на други МО (туберколозни бактерии)
3) диференциално-диагностични - служат предимно за култивиране на чревни бактерии в зависимот от промяна на вида и цвета на развиващите се върху тях колонии (Ендо за Е.коли)
Хранителни среди E. coli, L. mesenteroides, T. thioparus
4 среди, сред които 3 синтетични и една комплексна. 3те синтетични всяка е пригодена към 1 вид; комплексната поддържа E. coli и L. mesenteroides.
L. mesenteroides има изисквания за по-обогатена среда.
T. thioparus не изисква въглероден източник, тъй като си го набавя от въглеродния диоксид и запазва енергия от окислението на тиосулфата (има най-голям биосинтетичен капацитет)
Видове МО по отношение към кислород
- Облигатни аероби
- факултативни аероби
- микроарофили (аероби)
- аеротолерантни (анаероби)
- облигатни анаероби
Облигатни аероби
- задължително присъствие на кислород
- аеробно дишане
- Micrococcus luteus, кожа и прах
Факултативни аероби
- не изискват кислород, но растат по-добре при кислород
- аеробно и анаеробно дишане, ферментация
- E. coli
Микроаерофили
- задължително кислород, но в по-ниски нива от атмосферните
- аеробно дишане
- spirillum volutans, езера
Аеротолерантни
- ферментация
- Streprococcus pyogenes
Облигатни анаероби
- ферментации или анаеробно дишане
- археата Methanovacterium formicicum (езерни утайки и кал без кислород)
Култивиране на аероби
- нужно е екстензивно аериране (тъй като кислородът от въздуха не се обменя достатъчно бързо)
- енергично разклащане на клатачен апарат (най-добре) или продухване със стерилен въздух
Култивиране на анаероби
- в зависимост от чувствителност към кислорода
- при тези, които са толерантни: епруветки с гумени тапи (аноксични условия)
-редуктори, които реагират с кислорода за образуване на вода, като тиогликолат
Тиогликолатен бульон
- за тестване на организма за изискване към О2
- с малко агар; течен, но вискозен
- добавя се индикаторно редокс багрило ресазурин (розово при окислено състояние и безветно при редуцирано)
Как се разпределят аеробите и анаеробите в тиогликолатния бульон?
- облигатни аероби - само в горната част
- факултативни аероби - по цяата дължина, но най-вече горе
- микроаерофили - близо до гоена част, но не в кислородна зона
- облигатен анаероб - само на дъното
- аеротолерантен - цялата проба
Как се отстранява следи от кислород в хранителна среда след посявка?
поставя се в култивационни камери, в които кислородната атмосфера се замества със смес от Н2 и въглероден диоксид
- в присъствието на катализатор паладий следите от кислород в средата се превръшат във вода => АНОКСИ условия
Токсични форми на кислорода
Синглетен кислород (1СО2)
Супероскиден анион (О2-)
Водороден пероксид (Н2О2)
Хидроксилен радикал (OH*)
