10. Bioanalytické metody Flashcards
detekční techniky pro bioanalytické metody
detekce průběhu reakce;
spektrofotometrická detekce = pro substráty a produkty s odlišnými absorpčními oblastmi v UV/Vis/IR, sledování úbytku/přírůstku absorbance;
fluorescenční detekce = tvorba fluorescenční sloučeniny v reakci, vyšší citlivost;
chemiluminiscenční detekce = stanovení emitovaného záření excitované molekuly;
polarimetrická detekce = měření optických izomerů;
elektrochemická detekce = využití ISE a Pt eltrod, kinetické měření při štěpení substrátu;
radiometrická detekce = sledování radioaktivně označeného substrátu/produktu, přesné stanovení chemické identity
spektrofotometická metoda stanovení enzymů kofaktory
sledování redox kofaktoru NAD+ přímo, redukovaná forma NADH silně absorbuje při 340 nm, oxidovaná NAD+ nikoliv; např stanovení laktátu poměřováním nárůstu absorbance v 340 nm - míra původní koncentrace laktátu
radioimunoanalýza a její detekce
imunochemické neprecipitační metody vycházející z interakcí imunoreaktantů, jeden značen radionuklidem;
kompetice radioaktivně značených antigenů a antigenů ve vzorku o vazbu k protilátce - měření radioaktivity (nepřímo úměrná koncentraci antigenu ve vzorku);
detektor ionizujícího záření (scintilační, polovodičové)
ELISA
metoda značení antigenů a protilátek enzymy, radioaktivními látkami, fluorescencí;
1) nekompetitivní přímá =imobilizace AG v pevném nosiči, převrstvení proteinem nevyvolávající specifickou imunoselektivní reakci, detekce produktu úměrná antigenu;
2) nekompetitivní nepřímá = imobilizovaný AG reaguje s protilátkou, po promytí se váže sekundární PL, koncentrace AG úměrná množství značené PL;
3) kompetitivní přímá = imobilizovaná PL interaguje s AG ve vzorku a se značeným AG, značený AG soutěží s neznačeným o vazbu, po promytí rovnovážného systému se měří enzymová aktivita;
4) kompetitivní nepřímá = imobilizovaný AG soutěží se stanovovaným nekotveným AG ze vzorku o vazbu k PL v systému, zjišťuje se množství zakotvené protilátky
diagnostické testy - laterální chromatografie
detekce přítomnosti analytu ve vzorku bez nutnosti přístrojů;
nanesení vzorku na podložku - vzorek vzlíná na konjugační zónu, kde se nachází imobilizovaná PL na barevné nanočástici - vznik barevného komplexu AG-PL - komplex vzlíná do testovací linie
