הפרדה וטיהור חלבונים (שיטות א)

Question 1

מהי משוואת בר-למברט?

Answer 1

log (i0/i) = epsilon *C *l

Question 2

מה אומר חוק בר-למברט?

במילים

Answer 2

יחס ישר בין יכולת הבליעה של חומר מסוים לריכוז שלו

Question 3

למה משמשת שיטת ספקטרופוטומטריה?

Answer 3

מדידת ריכוז חומר מסוים/חלבון בתמיסה לפי יכולת הבליעה שלו

Question 4

אלו שיטות קיימות ליצירת ליזאט תאים?

3

Answer 4

• הומוגנציה
• סוניקציה
• שימוש בדטרגנט

Question 5

מהי שיטת הומוגינציה?

Answer 5

שיטה ליצירת ליזאט העושה שימוש בכוח פיזי לשם שבירת ממברנות

Question 6

הומוגנציה נחשבת לשיטה טובה ליצירת ליזאט מאחר והיא משמרת את רב אברוני התא. אלו אברונים לא משתמרים בה בהכרח?
(2)

Answer 6

1. הממברנה הפלמטית

2. ER

Question 7

מהם מיקרוזומים?

Answer 7

וזיקולות של ממברנת ה
ER
ומרכיביו הנוצרות כתוצאה מפירוקו בתהליך יצירת הליזאט

Question 8

אלו שתי פאזות של מיקרוזומים נקבל ביצירת ליזאט?

Answer 8

1. sER

2. rER

Question 9

האם שימוש בדטרגנט לשם הכנת ליזאט מצליח לשמר אברונים? מתי נעשה בו שימוש?

Answer 9

• לא

- כאשר נרצה להפיק חלבונים ממברנאלים

Question 10

באלו שיטות ניתן להשתמש ע”מ להפריד ליזאט נתון לפרקציות?

2

Answer 10

• צנטריפוגה

- velocity sedimentation

Question 11

כיצד נקרא התרחיף שנוצר משימוש בצנטריפוגה?

Answer 11

sup

Question 12

כיצד נקרא החלק ששוקע בשימוש בצנטריפוגה?

Answer 12

pellet

Question 13

מהי שיטת

velocity sedimentation?

Answer 13

שימוש במבחנה עם גרדיאנט סוכרוז/קלציום כלוריד, המאפשרת הפרדת מרכיבי הליזאט לפי מסה, צפיפות ומבנה מרחבי של המולקולות

Question 14

למה משמשת שיטת הדיאליזה?

Answer 14

הפרדה גסה ואיטית בין חלבונים גדולים וקטנים

Question 15

כיצד עובדת שיטת הדיאליזה?

Answer 15

תמצית חלבונים מוכנסת לשקית עם חרירים בגודל ידוע ובעזרת כוח הדיפוזיה חלקיקים קטנים יוצאים ממנה עד להשוואת ריכוזים בעד חלקיקים גדולים לא

Question 16

מהי שיטת ה
size exclusion?
(ג’ל פילטרציה)

Answer 16

שיטה כומוטוגרפית המאפשרת הפרדה לפי גודל החלקיקים השונים ע”י שימוש בבידים עם חרירים בגודל מסוים

Question 17

מתי יצאו חלבונים גדולים ומתי יצאו חלבונים קטנים בשימוש בג’ל פילטרציה?

Answer 17

• גדולים יצאו בנפח אילוציה נמוך

- קטנים יצאו בנפח אילוציה גבוה

Question 18

כיצד ניתן לקבוע מסה של חלבון חדש ע”י שימוש בשיטת ג’ל פילטרציה?

Answer 18

מכינים עקומת כיול של logMw
לפי נפח אילוציה, עבור לפחות 3 חלבונים ידועים. לאחר מכן בודקים את נפח האילוציה של החלבון החדש ומוציאים את המסה המולארית שלו לפי עקומת הכיול.

Question 19

מהי כומוטוגרפיית מחליף יונים?

Answer 19

כרומוטוגרפיה בה הבידים טעונים במטען הפוך ממטען חלבון המטרה

Question 20

כיצד משוחררים החלקיקים שנקשרו לבידים בכומוטוגרפיית מחליף יונים?

Answer 20

ע”י שימוש בריכוזי מלח גדלים

Question 21

מתי נשתמש במחליף אניונים?

Answer 21

כאשר נקצה לבודד חלבונים בעלי מטען שלילי

הבידים חיוביים

Question 22

מתי נשתמש במחליף קטיונים?

Answer 22

כאשר החלבונים שנרצה לבודד בעלי מטען חיובי

הבידים שליליים

Question 23

מהי כרומוטוגרפיית אפיניוט?

Answer 23

כרומוטוגרפיה בה הבידים מכילים חומר הידוע לקשור ספציפית את חלבון המטרה.

Question 24

כיצד משחררים את חלבון המטרה מהבידים בקולונת אפיניוט?

3

Answer 24

• שימוש בסובסראט חלופי שיתחרה איתו על הקישור לביד
• שימוש בריכוזי מלח גדולים
• שינוי ב
  pH
  (עלול להשפיע על טיב החלבון בצורה לא הפיכה)

Question 25

מהי שיטת

HPLC?

Answer 25

שיטה להגברת יעילות הכרומוטוגרפיה המשתמשת במשאבה המעבירה את התמיסה במהירות גבוהה יותר המאפשרת הפרדה טובה ויעילה יותר

Question 26

כיצד מבוצעת שיטת
immunopercipitation?
(4)

Answer 26

• הכנסת נוגדן כנגד חלבון המטרה בתמיסה
• בעת הצורך, הכנסת ביד/נוגדן שניוני שיקשר לנוגדן להעלאת מסת הקומפלקס שנוצר
• צנטריפוגה להשקעת הקומפלקס
• זריקת ה
  sup

Question 27

למה משמשת שיטת

immunopercipitation?

Answer 27

בידוד חלבון מטרה מתוך תמיסה נתונה

Question 28

למה משמשת שיטת
CO-IP?
כיצד היא מבוצעת?

Answer 28

• מציאת אינטראקציות חלבון-חלבון

- מבוצעת כמו אימונופרסיפיטציה עם נוגדן כנגד חלבון ידוע מהקומפלקס

Question 29

למה משמש הוספת
epitope tag
לחלבון המטרה?

Answer 29

לבידוד חלבון המטרה בעזרת הטאג הכללי במקום אפיטופ ספציפי

הוזלת עלויות

Question 30

His Tag

הינו טאג אפיטופי נפוץ. מה יש לחבר לבידים בכרומטוגרפיית אפיניוט בעת שימוש בו?

Answer 30

ניקל

Question 31

למה משמשת השיטה

florescence anisotropy?

Answer 31

מציאת
Kd
של רצפטור-ליגנד

Question 32

מהם שלבי השיטה

florescence anosotropy?

Answer 32

• קשירת הליגנד למולקולה פלורוסנטית
• הפלורוסנציה תלויה מכמות הליגנד ומה
  tumbling
  (סיבוביות)
• הוספת הרצפטור וקשירתו את הליגנד גורמת לירידה ב
  tumbling
  ובהתאם לירידה בפלורוסנציה
• ריכוז הרצפטור שגורם לדעיכת הפלורוסנציה ל50% הוא קבוע הדיסוציאציה

Question 33

למה משמשת השיטה

salting in/out?

Answer 33

הפרדת חלבונים

Question 34

על מה מבוססת שיטת

salting in/out?

Answer 34

מבוססת על העקרון שלכל חלבון יש ריכוז מלח אידיאלי עבור מסיסות

Question 35

מה זה

salting in?

Answer 35

המעבר של חלבון ממצב לא מסיס בריכוזי מלח נמוכים מאוד למצב מסיס

Question 36

מה זה

salting out?

Answer 36

המעבר של חלבון ממצב מסיס בריכוזי מלח מתאימים למצב לא מסיס בריכוזי מלח גבוהים הגורמים ליצירת אגרגטים שלו ולשקיעתו