אנליזה של חלבונים (שיטות א) Flashcards
1
Q
מה עושה החומר
SDS?
A
דטרגנט המקנה מטען שלילי לחלבונים ומבנה לינארי
2
Q
כמה ח”א קושרת מולקולת
SDS
אחת?
A
2
3
Q
באלקטרופורזה ללא שימוש ב
SDS
החלבונים ינועו לפי היחס-
A
מטען למסה
4
Q
ב
SDS-page
עם ג’ל העשוי מפולי-אקריל-אמיד החלבונים ינועו לפי-
A
מסה
5
Q
מה עושה החומר בטא-מרקפטו-אתנול?
A
מפרק קשרים די-סולפידים
6
Q
כיצד ניתן לקבוע גודל גודל של חלבון חדש תוך שימוש ב
SDS-page?
A
- בונים עקומת כיול של
logMw
לפי מרחק נדידה (סנטימטר) של חלבונים ידועים. - ע”י הכנסת מרחק הנדידה של החלבון הנעלם ניתן למצוא את המסה המולארית שלו
7
Q
כיצד מבוצעת שיטת הפוקוס האיזואלקטרי?
A
מכניסים תערובת חלבונים לג'ל עם גרדיאנט pH ומפעילים שדה חשמלי שיגרום להם להסתדר לפי ערך ה pI שלהם
8
Q
כיצד מבצעים אלקטרופורזה דו מימדית?
A
- תחילה מפרידים את החלבונים בפוקוס איזואלקטרי
- ולאחר מכן יופרדו לפי מסה ב
SDS page
9
Q
מה מאפשרת השיטה של אלקטרופורזה דו-מימדית?
A
אנליזת חלבונים לפי שני פרמטרים שונים במקביל-
- pI
- מסה
10
Q
למה משמשת שיטת
western blot?
A
זיהוי נוכחות של חלבון בתמיסה נתונה
11
Q
כיצד מבצעים
western blot?
A
- לאחר הפרדת חלבוני התמיסה לבנדים (אלקטרופורזה), מדגירים את הג’ל עם נוגדן ראשוני ומבצעים שטיפה
- מדגירים עם נוגדן שניוני + שטיפה (אופציונאלי)
- הוספת סובסראט לנוגדן השניוני המאפשר דיטקציה (מול’ רדיואקטיבית למשל)
12
Q
באילו נוגדנים מומלץ להשתמש ב
western blot?
מדוע?
A
- נוגדנים פוליקלונאליים
- ע”מ שנוכל להשתמש ב
SDS
ההורס את מבנה החלבון אך לא את הרצף
13
Q
למה משמשת שיטת
ELISA?
A
מציאת נוכחות נוגדן בתמיסה נתונה
14
Q
כיצד מבוצעת השיטה
ELISA?
A
- השריית התמיסה עםאנטיגן כנגד נוגדן המטרה (בד”כ בארית 96)
- שטיפה
- נוגדן שניוני + שטיפה
- סובסראט לנוגדן השניוני שיאפשר דיטקציה
15
Q
מהו מדד
EU
בטבלת טיהור?
A
- יחידות אנזים
- מדד לכמות אנזים המטרה בתערובת הכללית
