Zechel

Question 1

Was enthält ein typischer Vektor?

Answer 1

• Ori
• Multile Cloning Site (MCS)
• Selektionsmarker

Question 2

Welche Plasmidsysteme gibt es und welche Anwendungen finden diese?

Answer 2

• pTOPO: Proteinexpression
• pUC: Proteinexpression
• pET (His-Tag): Kristallographie
• pGEX (GST-Tag): Funtionsanalysen

Question 3

Phagenvektor vs. Cosmidvektor?

Answer 3

Phagenvektor: Infektion als Phage & rekombinanter Klon ist auch ein Phage

Cosmidvektor: Infektion als Phage & rekomb. Klon ist ein Bakterium

Question 4

Welche Gene können in der Phagen DNA ersetzt werden?

Answer 4

Gene für den lysogenen/nicht-lytischen Weg können ersetzt werden, Phage schlägt dann immer den lytischen Weg ein

Question 5

Welche Eigenschaften haben YACs?

Answer 5

Yeast artificial Chromosomes:

tragen Hefespezifische Selektionsmarker für bestimmte Metabolite oder Aminosäuren

Question 6

Welche Eigenschaften haben Typ 2 Restriktionsenzyme?

Answer 6

Erkennungsstelle = Spaltstelle

Question 7

Welche Gruppe von Restriktionsenzymen könne unterschieden werden?

Answer 7

• Isoschizomere: erkennen gleiche Sequenz und erzeugen gleiche Überhänge
• Neoschizomere: erkennen gleiche Sequenz, erzeugen versch. Überhänge
• Isocaudomere: erkennen verschiedene Sequenzen, erzeugen gleiche Überhänge

Question 8

Welch eukaryotischen RNAPs gibt es und welche Funktion haben diese?

Answer 8

RNAP I: prä rRNA
RNAP II: prä mRNA, prä microRNA
RNAP III: tRNA, 5S rRNA, snRNA

Question 9

Phasen der Transkription (basale TFs)?

Answer 9

TFIID bindet Kernpromoter, Bindung von TFIIA, dann von TFIIB (TFIID und TFIIB haben DNA Kontakt) => Ausbildung des DAB-Komplexes
Rekrutierung der RNAP, Eintritt von TFIIF
TFIIE und TFIIH treten ein

Question 10

Funktionen von TFIID?

Answer 10

enthält:

• TBP
• TAFs
• Histonacetyltransferase
• Ubiquitinligase

Question 11

Funtionen von TFIIH?

Answer 11

• 2 Helikasen: XPD und XPB
• Kinase CDK7: phosphoryliert Ser5 im CTD
• Mat1 (Kinase)

Question 12

Welcher Faktor entscheidet über eine erfolgreiche Transkription?

Answer 12

TFIIB -> Konkurrenz zwischen TFIIB und Elongationsprodukt nach der Verknüpfung von etwa 5-6 Resten

Question 13

Welche Kinasen phosphorylieren die CTD in den entscheidenden Resten?

Answer 13

1. Ser5: CDK7 aus der TFIIH

2. Ser2: PTEFb (enthält CDK9)

Question 14

Welche Funktionen erfüllt PTEFb?

Answer 14

• Phosphorylierung von Ser2 im CTD

- Phosph. von NELF und DSIF (Inhibierung neg. Elongationsfaktoren)

Question 15

Was ist zur Öffnung des geschossenen PIC nötig?

Answer 15

Hydrolyse von ATP

Question 16

Welche Funktion erfüllt der Mediatorkomplex?

Answer 16

Interaktionen mit den basalen Transkriptionsfaktoren

• modularer Aufbau (neg. und pos. Module
• Head-, middle-, tail- und Kinase-Modul
• inasemodul enthält CDK8 ( kann Ser2 und vor allem Ser5 im CTD phoph.)

Question 17

Welche Kondensierungsgrade gibt es im Chromatin?

Answer 17

• Heterochromatin (silent)

- Euchromatin (active)

Question 18

Welche Histonmodifikationen überwiegen in welchem Chromatinzustand?

Answer 18

• Histonacetylierungen überwiegend in aktiven Loki

- Histonmethylierungen überwiegend in stillen Loki

Question 19

Welches Enzym verwandelt die transiente Repression des Chromatins in eine stabile?

Answer 19

MeCP2 bindet Methylcytosin und rekrutiert Reprssorkomplexe

Question 20

Welche Kranlheit wird durch Mutationen im MeCP2-Protein ausgelöst?

Answer 20

Rett-Syndrom