VL5 Mikroskopie und Fluoreszenzmikroskopie

Question 1

Was passiert bei der Fluoreszenzmikroskopie?

Answer 1

-

Question 2

Was ist ein Fluorophor?

Answer 2

• ein Molekül, das Fluoreszenzlich emittiert
• geht durch Fluoreszenz von angeregten Singulettzustand in Grundzustand zurück

Question 3

Warum kommt es zur Rotverschiebung bei der Fluoreszenz?

Answer 3

-wegen Franc condon Prinzip-> Anregung in höheren Schwingungszustand->internal conversion zu Schwingungsgrundzustand und dann erst Fluorenzenz

Question 4

Wie ist ein Fluoreszenzmikroskop aufgebaut?

Answer 4

Question 5

Was ist die Numerische Apertur?

Answer 5

• dimensionslose Größe, die das Vermögen eines optischen Elements beschreibt, Licht zu fokussieren.
• große numerische Apertur-> gutes Auflösungsvermögen

Question 6

Was ist der Vorteil der Fluoreszenzmikroskopie?

Answer 6

• ein hoher Kontrast
• es lassen sich bestimmte Strukturen/Moleküle spezifisch beobachten
• Quantitativ->Fluoreszenzstärke gibt Auskunft über Menge des zu untersuchenden Objektes
• und erlaubt imaging in lebenden Zellen

Question 7

Was lässt sich zur Wellenlänge des Absorptions und Emsissionslichts bei der Fluorescence Mikroskopie sagen?

Answer 7

-es kommt zum Stokes Shift->Rotverschiebung

Question 9

Was ist tau?

Answer 9

-Lebensdauer des angeregten Zustands

Question 10

Wie wird in einem Fluoreszenzmikroskop Anregungslicht und Emissionslicht getrennt?

Answer 10

• Filter für Anregungslicht-> spezielle Wellenlänge
• Dichroitischer Spiegel-> Anregungslicht wird gespiegelt und auf Probe refklektiert
• Fluoreszierendes Licht aus Probe kann durch Dichroitischen spiegeln strahlen
• Fluoreszenzfilter der sämtliches Streulicht abfängt und nur Floreszenzlich durchlässt

Question 11

Welche Probleme können bei Fluoreszenzfarbstoffen auftreten? Lösung?

Answer 11

• Photobleaching
• weniger Intesität(ca.50%)
• Umgebung->Sauerstoff fördert Photobleaching

Question 12

Anwendungen Fluoreszenzmikroskopie?

Answer 12

-Ca-Imaging-> Neuronen->Anzahl Calcium-Ionen durch Fluoreszenzintesität

Question 13

Was ist FRET?

Answer 13

• Form der Fluoreszenzlöschung
• resonante Energieübertragung zwischen zwei Chromophoren/Fluorophoren über direkte Kopplung der Dipole des Donor und Akzeptormoleküls
• zwischen 1,5 und 10nm

Question 14

Was ist ein FRET-paar?Wofür

Answer 14

• Donor-Akzeptor-Farbstoffkombinationen, die nach Anregung des Donors strahlungslosen Energietransfer zeigen
• für Abstandsmessungen
• nur wenn sich Donor und Akzeptor treffen kommt es zur Emission

Question 15

Was verseht man unter der Auflöung?

Answer 15

-minimaler Abstand zwischen zwei Bildpunkten der gerade noch getrennt werden kann

Question 16

Was sind chromatische und spärische Aberrationen?

Answer 16

-entsteht durch unterschiedlich starke Brchnung des Lichts an Linsen abhängig von der wellenlänge