VL 9 Flashcards
Komponenten zur Generierung von
a) miRNA
b) siRNA
a) MIR-Gen: Sense, linker, Antisense → Hairpin
RNA-Pol. II, DCL1 , AGO1
b) RNA-Pol. IV, dsRNA, DCL2-4, AGO1/4, evtl. RNA-Pol. V
Funktion von DCL-Proteinen?
= dicer-like Proteine
Schneiden lange dRNA in kurze RNA-Duplexe von 21-24 nt
Funktion von AGO-Proteinen?
= Hauptkomponenten von RISC
binden siRNA-Duplex → schneidet nicht-tragetierenden Strang
AGO1 schneidet komplementäre mRNA
AGO4 für DNA-Methylierung
Wie können mit siRNAs Viren bekämpft werden?
Viral induziertes Gen-Silencing (VIGS)
Meisten Pflanzenviren ssRNA → Replikation: dsRNA-Intermediat → siRNA gebildet aus viraler dsRNA → Virus-Replikation + Expression gesilenced
Beschreibe ein Experiment, dass zeigt das siRNA an SAR beteiligt ist.
SiRNA-Produktionsmutanten (mutiertes dcl2-4)
= anfälliger für Viren
Infektion von Arabidopsis mit Tabak-Rattle Virus:
- WT → keine Auswirkung
- dcl2-4 Mutante → erkrankt
Beschreibe ein Experiment, dass
a) Verbreitung der siRNA
b) Transport vom Spross zur Wurzel zeigt.
a) Blatt mit GFP leuchtet grün unter UV-Licht Gabe von GFP-encoding IR DNA → GFP über PTGS gehemmt → Um Injektionsstelle herum wieder rot → Verbreitung über Plasmodesmata
b) DCL2-4 Knockout in Wurzel + Spross
→ GFP-IR bewirkt kein Silencing in Wurzel + Spross
Triple Knockout nur in den Wurzeln
→ GFP-IR aus dem Spross: Silencing in Wurzel + Spross
Wie kann man testen, ob ein virales Protein ein Suppressor des RNA-Silencing ist?
Injektion in Pflanze mit silenced Reportergen z.B. GUS
→ zeigen sich blaue Flecken hemmt Protein siRNA
Was ist Cosuppression?
+ wie wurde sie entdeckt?
= Einfügen von Gen A in Zelle mit endogenem Gen A → Silencing von beiden
→ kein Protein A
Entdeckt über Experimente mit WT lila Petunien:
Zusätzliches einfügen von Gen für lila Farbstoff
→ weiße Blüten, entgegen den erwarteten dunkellilanen
Unterschied zwischen PTGS und TGS?
PTGS = post-transkriptionelles Gen-Silencing
→ mRNA wird geschnitten / Translation inhibiert
über siRNA / miRNA
TGS = transkriptionell
→ Methylierung der DNA /Modifikation der Histone
über siRNA
Wie wurde TGS entdeckt?
Über Experimente in denen mehr als 1 Transgen eingefügt wurde:
z.B. Kreuzen zweier Stämme mit jeweils Resistenz gegen Kanamycin / Hygromycin
→ 50 % noch gegen Kan resistent, 0% gegen Hyg
Funktion von miRNAs in der Entwicklung einer Pflanze?
miRNAs können Gene deaktivieren → können Phasenänderung bewirken
z.B. miRNA156 nimmt ab: juvenile → adulte Pflanze
miRNA hemmt sonst SPL
z.B. miRNA172 nimmt zu + hemmt AP2-like
→ Blühen
