VL 7 Flashcards
Experimente zur Aufklärung des Pathogenitätsmechanismus (Beteiligung von Bakterien, eine andauernde Anwesenheit von Bakterien ist nicht notwendig für das Tumorwachstum).
Gesunde Pflanzen geimpft mit A.t., nach einigen Tagen Bakterienzellen abgetötet, trotzdem Gallen
→unabhängig vom Pathogen nach 2 Tagen
Worauf beruht die Virulenz eines Agrobakterienstamms, welche Versuche wurden in diesem Zusammenhang gemacht?
DNA eines virulenten Stammes + avirulenter Stamm = virulenter Stamm und bildet Gallen
Anpassung zur Verwendung von Agrobacterium tumefaciens und von Ti-Plasmiden in der Gentechnik, binäres Vektorsystem.
Vektor 1: T-DNA
Vektor 2 = Helferplasmid mit vir-Genen
→ erleichtert Klonierung
(sonst ist Vektor zu gross)
Verschiedene Methoden bei denen Agrobakterien für die Transformation eingesetzt werden.
- Produktion genet. modifizierter Pflanzen z.B. Bt Toxin gegen Pathogene
- Transfer von T-DNA in Pilze, tierische Zellen
- Forschung: in vivo Studien von Pflanzengenen
- Transient expression studies: Short-term expression T-DNA bringt schneller Resultate als Erzeugung von Transgenen Pflanzen
Übertragung der T-DNA von A.t. in das Pflanzengenom! Welcher Mechanismus liegt zugrunde?
- Chemoattraktion + Aktivierung der Virulenz
- Ausschneiden der T-DNA
- Transport T-DNA in Pflanzenzelle
- Expression T-DNA + Pathogenität
Übertragung T-DNA: Welche Proteine sind beteiligt und welche Funktionen habe diese?
VirA-Rezeptor aktiviert von Pflanzenphenol
→ Dimerisierung → Phosphoryliert VirG
→ Aktiviert VirD2 = schneidet T-DNA aus + bindet und schützt vor Exonukleasen
VirD1 = Helikase hilft VirD2
VirE2 = bindet T-DNA + schützt vor Nukleasen
VirB1-B11, D4 = bildet Sekretionssystem T4SS
VirF für Integration in DNA
Was versteht man unter
a) Quorum Sensing
b) Autoinducer = Quorum sensor = Quormon?
a) = Fähigkeit eines Einzellers über chem. Kommunikation Zelldichte der Population zu messen
b) Oft Acyl-Homoserin-Lacton, induziert über pflanzl. Opine, bewirkt Plasmidkonjugation
Co-Evolution von Agrobacterium und Pflanze. Wie wehrt sich die Pflanze?
a) Signalintegration: Pflanzenvermittelte Signale zur Aktivierung der Vir-Gen Expression
b) Quorum quenching = Produktion von AHL Lactonase → baut AHL ab
c) Infizierte Zellen produzieren SA, IAA, ET → hemmen vir-Genexpression
d) Co-option = Virus hat pflanzl. Gene vereinnahmt für Anhaftung, Bewegung durchs Cytoplasma, Nuklearer Import, Integration
Andere Agrobacterium-Spezies? Was verursacht Agrobacterium rhizogenes?
- A. vitis Crown gall bei Trauben
- A. rubi Pathogen der „caneberries“ Himbeeren, Brombeeren
- A. radiobacter produziert antibiotische Verbindungen → Biocontrol agent
- A. rhizogenes induziert starkes Wurzelwachstum, daher Ri-Plasmid (Root inducing), nützlich für die Synthese von Naturprodukten, usw.
Welche Änderungen wurden an dem Ti-Plasmid für Transformationsversuche in Pflanzen vorgenommen?
Tumor-induzierendes Gen + Opin-Synthese-Gen ersetzt durch „gene of interest“ + Selektionsgen
Selektiongen muss wie Pflanzengen aussehen: Promotor, 5’/3’ UTRs
