Vacinas Flashcards
Vantagens e desvantagens das células de inseto (Sf9):
Vantagens:
* não necessitam de Co2 para crescer
* adaptam-se a culturas de suspensão de alta densidade, permitindo produção em larga escala
Desvantagem:
* produto não é inteiramente funcional, devido à falta de glicosilação
Desvantagens na utilização de células de mamíferos:
- Baixa resistência mecânica
- precisam de um meio de cultura complexo
- alta sensibildade a metabolitos tóxicos
- processo caro
Hoje, 60-70% das proteínas recombinantes farmacêuticas são produzidas em:
Células animal
Tipos de vacina:
Tradicionais (81% das vacinas no mercado):
* Conjugadas
* Inativadas - vírus inativado por calor, pH, radiação
* Atenuadas - vírus que infeta células humanas replicado em várias linhagens de células de outro animal, perdendo virulência
* Toxóide - utilização de uma toxina do vírus
Próxima geração (75% das vacinas em desenvolvimento):
* ácidos nucleicos
* de subunidade (proteínas do vírus, VLPs)
* vetores virais (ex: adenovírus que vão expressar um antigénio de outro vírus e apresentá-lo às células imune)
Produção de vacinas inativadas:
- Seleção da estirpe viral para produzir
- Seleção do sistema de expressão (bactéria, ovos, cultura de células, etc)
- Replicação do vírus no sistema de expressão num biorreator (ou ovos de plantas?)
- Purificação do vírus
- Inativação do vírus (calor, pH que desnatura proteínas da superfície, radiação, detergente, formaldeído, desnaturar RNA ou DNA)
Produção de vacinas de RNA:
- Identificação dos genes virais responsáveis pela ligação e fusão do vírus
- Extração do DNA ou RNA do vírus e sequenciação
- Amplificação do gene de interesse (geração de cDNA)
- Transcrição in vitro de cDNA em mRNA e estabilzação por capping (enzimático ou químico)
- Purificação para remover os componentes de reação (cromatina de afinidade) seguida de filtração estéril
Produção de vacinas baseadas em proteínas:
- Identificação dos genes virais responsáveis pela ligação e fusão do vírus
- Extração do DNA ou RNA do vírus e sequenciação
- Amplificação do gene de interesse (geração de cDNA)
- Inserção do fragmento de cDNA num plasmídeo
- Produção da proteína numa bactéria (transfecção) ou meio de cultura (infeção de células) usando biorreatores
- Purificação da proteína, seguida de filtração estéril
O que são VLPs?
Auto-montagem de complexos de proteínas que mimetizam a estrutura geral do vírus, mas que não contém material genético viral.
Vantagens de vacinas de VLPs:
- Os epítopes conformacionais são muito similares às partículas virais de origem
- Estruturas muito repetitivas e ordenadas que conferem uma resposta humoral e adaptativa potente
- Não contém material genético (seguras)
- Não infeciosas, não sendo necessária inativação
- Sem capacidade de replicação
Normalmente, que células e vírus se usam para a produção de VLPs?
Células de inseto e baculovírus (fáceis de modificar geneticamente)
Exemplo de vacina de VLP?
Vacina para influenza. Baculovirus expressa a ORF1629 que codifica a proteína M1 e HA do vírus do influenza, que quando expressas em conjunto conseguem formar a estrutura circular
Como se produzem vacinas de vetores virais?
- identificação dos genes virais responsáveis pela ligação e fusão do vírus
- Extração do DNA ou RNA e sequenciação
- Amplificação da zona de interesse e geração de cDNA
- Inserção de cDNA num plasmídeo
- Produção de vetores virais em células de cultura em bioreatores
- Inserção do DNA de interesse no vetor viral
- Purificação do vetor viral seguida de filtração estéril
Componentes finais de uma vacina.
- Princípio ativo: antigénio
- Imunomodulador (adjuvantes): compostos químicos usados para aumentar e potencializar a resposta imunitária
- Excepientes (estabilizadores): tampão, preservantes/antibióticos - preservar e estabilizar a proteina recombiante, aumentando o tempo de vida da vacina e mantendo a estrutura nativa da proteína
