Unidad 17 técnicas para análisis de ácidos nucléicos Flashcards
Técnicas utilizadas en la caracterización de fragmentos clonados de ADN
Electroforesis en gel
PCR
RT-PCR
Secuenciación
Técnicas utilizadas en el estudio de la expresión de genes a partir de fragmentos clonados de ADN
-Northern blotting
- Southern blotting
- Hibridación in situ
Uso de técnicas de analisis de acidos nucleicos
Clonación de ADN
Diagnostico medico
Analisis forense de ADN
separación de ADN clonado en un vector
Para manipular fragmento de ADN clonado
Por medio de enzimas de restricción
Electroforesis
Separa molécuñas de acuerdo a tamaño y función
Basado en el movimiento de moléculas cargadas electricamente
Geles para electroforesis
Geles de poliacrilamida: 10-2000 nucleotidos
Geles de agarosa: 200-20k nucleotidos
Funcionamiento de la electroforesis
Moléculas negativas van hacia el ánodo (+)
Moléculas positivas van hacia cátodo (-)
PCR
Permite amplificar un segmento de ADN
Proceso de PCR
Desnaturalización
Hibridación (templado)
Síntesis (elongación)
Elementos para PCR
-Muestra de moléculas dúplex de ADN.
-Enzima Taq polimerasa (ADNpol resistente a altas temperaturas).
-Oligonucleótidos (cebadores ó primers).
-Desoxinucléotidos (dNTP’s).
-Cofactores
RT-PCR
PCR con transcripción inversa
Permite amplificación de ADNc a partir de ARNm y la cantidad incial de ARNm
RT-PCR cuantitativa
Se determina la cantidad de secuencia de ADN de doble cadena producida en cada ciclo de amplificación
Como se estima la cantidad de ARNm incial
COn extrapolación de cantidades obtenidas
Que tecnica proporciona una de las medidas más precisas para seguir cambios en expresión génica
La RT-PCR
Que se necesita para completar carcaterización de un fragmento de ADN clonado
Determinar secuencia nucleotida
