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Biomol > Sesión 12 términos > Flashcards

Sesión 12 términos Flashcards

1
Q

Tecnología del ADN recombinante

A

Permiten aislamiento, amplificación, manipulación y caracterización de genes o fragmentos de ADN

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Q

ADN recombinante

A

ADN híbrido
Obtención in vitro por combinación de ADN de diferentes orígenes

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3
Q

Organismos transgénicos

A

Células u organismos que reciben ADN recombinante

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4
Q

Ingenieria genética

A

Aplicación práctica de las tecnologías del ADN recombinante a problemas biológicos, médicos y agrícolas específicos

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Q

Utilidad de ingenieria genética

A

Estudio de estructura y función
Aplicación de analisis molecular
Desarrollo de productos comerciales para diagnostico y tratamiento

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6
Q

Pasos esenciales para clonación de genes

A
  1. Formar molécula recombinante
  2. Clonación de moléculas recombinantes en célula
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7
Q

Pasos necesarios para formar molécula recombinante

A
  1. Aislar ADN de distintos origenes
  2. Obtener fragmentos de ADN
  3. Unión de fragmentos de ADN con vectores de lonación por ADN ligasa
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8
Q

Como se obtienen los fragmentos de ADN

A

Por enzimas de restricción

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9
Q

Enzimas de restricción

A

Endonucleasas de restricción
Proteínas que cortan el ADN en lugares específicos

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10
Q

Vectores de clonación

A

Moléculas de ADN que pueden llevar un fragmento de ADN foráneo y replicarlo dentro de una célula huésped
Plásmidos

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11
Q

Origen de enzimas de restricción

A

bacterias

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12
Q

Mecanismo de defensa de bacterias

A

Enzimas de restricción reconocen secuencias de ADN extraño y lo cortan en puntos específicos

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13
Q

Como se portegen las bacterias de sus propias enzimas de restricción

A

Metilación las vuelve resistentes a su acción nucleolitica

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14
Q

Clasificación de enzimas de restricción

A

Tipo I y III: Cortan ADN en puntos no especpificos
Tipo II: Corte específico en misma diana

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15
Q

Enzimas de restricción tipo I

A

Cortan lejos de secuencia de reconocimiento

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16
Q

Enzimas de restricción tipo III

A

Cortan 5-8 bases lejos de secuencia de reconocimiento
Necesita ATP

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17
Q

Enzimas de restricción tipo II

A

Cofactor Mg++
No ATP
Secuencias cortas
Simetria rotacional

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18
Q

Secuencia palindromica

A

Secuencia de bases es la misma cuando se lee en direcciones opuestas en las dos cadenas complementarias del ADN

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19
Q

Tipos de extremos producidos por enzimas de restricción

A

Extremos romos
Extremos cohesivos

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20
Q

Extremos romos

A

Corte de cadenas en mismo punto por el centro de la diana

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21
Q

Extremos cohesivos

A

Corte a pocos núcleotidos de distancia del eje de simetría

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22
Q

Isoesquizomeros

A

Enzimas de restricción específicas para misma secuenca de reconocimiento pero cortes diferentes

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23
Q

Sau3AI y Mbol

A

Diferentes enzimas de restricción que pueden reconocer y cortar misma secuencia de forma difernete

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24
Q

Smal y xmal

A

Reconocen misma secuencia pero cortan en diferentes puntos

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25
Q

ADN ligasa

A

Regenera el enlace covalente
Para unión de fragmenos de ADN recombinante

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26
Q

Transferasa terminal

A

Modifica extremos de ADN artificialmente
Puede construir extremos cohesivos
Une nucleotidos a extremos 3’
Puede formar fragmentos complementarios

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27
Q

Electroforesis en gel

A

Técnica bioquímica que permite separar moléculas según su
tamaño y carga eléctrica.

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28
Q

Funcionamiento de electroforesis en gel q

A

ADN migra a ánodo (carga positiva)

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29
Q

Marcador de peso molecular

A

Fragmentos de ADN de tamaño conocido
Permite determinar tamaño aproximado de fragmentos de interés

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30
Q

Clonación

A

Amplificación de moléculas recombinantes
Por medio de introducción a célula huesped que se reproduce y produce copias identicas

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31
Q

Principales carcaterísticas de vectores de clonación

A

Replicación autonoma
Marcador seleccionable
Sitios de restricción únicos

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32
Q

Replicación autonoma de vectores de clonación

A

Deben tener origen de replicación propio

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33
Q

Marcador seleccionable de vectores de clonación

A

Para que el huesped tenga un fenotipo facilmente identificable

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34
Q

Ejemplos de marcadores seleccionables

A

Genes de resistencia a antibioticos
Genes que codifiquen enzimas que los huespdes no tengan

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35
Q

Vectores de clonación más usados

A

Bacteriofagos
Cosmidos
Cromosomas artificiales

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36
Q

Plásmido

A

Molécula circular extracromosómica de ADN bicatenario presene en microorganismos

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37
Q

Inconveniente de plásmidos

A

Solo incorporan fragmentos de ADN pequeños

38
Q

características de plásmidos

A

Origen de replicación propio
Genes de resistencia antibioticos
Número de dianas únicas para enzimas de restricción comunes

39
Q

pUC

A

Plásmido mejorado

40
Q

Alfa complementación

A

-E. coli mutado sin péptido alfa de B-galactosidasa
-Enzima inactiva
-Bacterias no hidrolizan galactosa ni x-gal
-Transformació con vector pUC aporta péptido alfa

41
Q

Reconocimiento de bacterias transformados con pUC

A

Forman colonias azules en presencia de un substrato incoloro x-gal

42
Q

Por que las bacterias transformadas forman colonias azules

A

Cuando x-gal es hidrolizado por B-galactosidasa produce substancia azul insoluble en presencia de IPTG

43
Q

Colonias blancas

A

Al insertar un fragmento de ADN extraño
Se interrumpe fragmento del gen
No ocurre complementación alfa
B-galactosidas es inactiva

44
Q

Bacteriofagos

A

Vehículos naturales de transducción del ADN

45
Q

Fago lambda de E.coli

A

Más conocido
Empaqueta ADN flanqueado por secuencias cohesivas

46
Q

Complementariedad de extremos cos en lambda

A

Permite que cromosomas lambda adquiera forma circular al infectar a E.coli

47
Q

Tipos de bacteriofagos

A

Vectores lambda de inserción
Vectores de reemplazamiento

48
Q

Vectores lambda de inserción

A

Tiene lugares de restricción unicos para endonucleasa para fragmento de ADN exogeno

49
Q

Vectores de reemplazamiento o sustitución

A

Tamaño de fragmento de ADN debe ser de igual tamaño al frgamento de ADN de lambda sustituido

50
Q

Cósmidos

A

Son factores de clonación hibridos entre bacteriófagos y plasmidos
Utilizados para formar genotecas
Son encapsulados en fagos
Replicados como plásmidos en células huesped

51
Q

Secuencias cos de cósmidos

A

Secuencias cos de fago lambda en cósmidos permiten clonar fragmentos de mayor longitud

52
Q

Cromosomas artificiales de levadura (YAC)

A

Minicromosomas de levaduras
Usados para clonar fragmentos de ADN largos

53
Q

Compisición de cromosomas artificlaes de levadura YAC

A

Dos telomeros: para replicaciónn y protección

Un centromero: para correcta segregación en replicación

Un origen de replicación: para replicación independiente

Un marcados seleccionable: para identificar células que han recibido nuevo cromosoma

Dianas de restricción: para facilitar clonación de ADN foraneo

54
Q

Cromosomas BAC

A

Basados en plásmido F de E. coli

55
Q

Cromosomas PAC

A

Derivados de bacteriofago P1

56
Q

Vectores de expresión

A

Permite obtener producto proteíco de gen clonado
Promotor activo y regulable

57
Q

Transformación

A

Entrada directa de ADN recombinante por medio de un plásmido en una abcteria (E.coli)

58
Q

Tipos de células receptoras utilizadas en ingenieria genética

A

Bacterias
Saccharomyces cerevisia
Células de mamiferos

59
Q

Bacterias como células receptoras

A

Primero y más usados
E.coli el más usado

60
Q

Saccharomyces cerevisiae

A

Célula receptora
Levadura del pan

61
Q

Células de mamíferos

A

Células recpetoras

62
Q

Tranferencia de genes a células de mamiferos

A

Endocitosis de ADN en liposomas
YAC
Vectores basados en retrovirus

63
Q

Genotecas

A

Archivos del genoma de una especie cortado en segmento

Almacenado en vector de clonación dentro de célula huesped

Mantiene separados fenes de un organismo para su facil acceso

64
Q

Clasificación de genotecas

A

Segun origen de ADN clonado
Genomicas
ADNc
Expresión

65
Q

Genotecas genomicas

A

Representan genoma completo de un individio

66
Q

Genotecas de ADNc

A

Copias de ARNm de detrminado tejido o tipo celular

67
Q

Genotecas de expresión

A

Uso de vectores de expresión
Permiten expresión de gen insertado

68
Q

Construcción de genoteca genómica

A

-Extracción de ADN
-Digestión con enzima de restricción
-Clonación selectiva de todos los fragmentos

69
Q

Vectires usados por genotecas

A

Fagos lambda
Cósmidos
BAC
YAC

70
Q

En los humanos existen genotecas de cada uno de los cromosomas

71
Q

Construcción de genoteca de ADNc

A

-Purificación de ADN
-Retrotranscripción de ARNm a ADNc
-Sintesis de segunda cadena de ADN

72
Q

PCR

A

Permite amplificar y selccionar ADN

73
Q

Que se necesita para una PCR

A

Conocer secuencia de nucleotidos en extremos de fragmentos de ADN a copiar

74
Q

Proceso de PCR

A

Desnaturalización del ADN
Emparejamiento de cebadores
Sintesis de ADN con Taq polimerasa

75
Q

Hibridación de ácidos nucleicos

A

Fundamento del uso de sondas
Dos cadenas de ADN o ARN de dieferente origen se unen

76
Q

Sonda marcada

A

Permite detección de hibridación de acido nuceloticos

77
Q

Formas de marcacón de sondas

A

Nucleotidos unidos a atomo radioactivo
Nucleotidos unidos a moleculas identificadas por reacciones quimicas
dNTPs marcados con fluoresencia

78
Q

Cribado

A

Identificar un gen en las genotecas
Por hibridación por sonda
Por PCR

79
Q

Tecnicas inmunologicas en cribado

A

Union de anticuerpo marcado a proteína permite identificar colonias de bacterias importadoras del gen que las sitetiza

80
Q

Hibridación in situ

A

Tecnica para determinar donde y cuando esta expresado un gen

Usa sonda de ADN o ARN marcado que es complementario al ARNm a estudiar

81
Q

Proceso de hibridación in situ

A

Fijación de célula
Desnaturalización de cromosomas
Adición de sonda marcadp

82
Q

FISH

A

Hibridación in situ por fluoresencia
Permite analisis de varios elementos

83
Q

Transferencia de Southern

A

Para identificar secunecia genética especifica de fragmnetos resultantes de digestión de ADN

84
Q

Proceso de transferencia de Southern

A

Digestión de ADN
Electroforesis en gel de agarosa
Desnaturalización de fragmentos
Hibridación con sonda marcada
Lavado de filtro
Exposición a rayos X

85
Q

Técnica de Northern

A

Basada en técnica de Southern
Usa ARN
Util para obtener información de patrón de expresión de genes

86
Q

Secuenciación del ADN

A

Permite leer información genética en ADN
Busca determinar orden de nucleótidos en secuncia de ADN

87
Q

Metodos de secunciación

A

Químico (maxam y gilbert): modificación quimica y escisión de bases
Enzimático (sanger): uso de ddNTps, elongación de cadena

88
Q

Secuenciación enzimática

A

Sintesis de cadena de ADN complementaria a la que se quiere secuenciar

89
Q

Secuenciación automatica

A

Más rapido
Menos riesgo
Traducción de bases con detector laser

90
Q

Mutagenesis dirigida

A

Tecnica para cambiar propiedades de genes
Hace sustituciones en aminoacidos en proteína codificada por gen
Cambia función de proteína

91
Q

Proceso de mutagenesis dirigida

A

Obtención de cadena simple y oligonicleotido
Hibridación de oligonucleotido y se replica
Uso de oligonucleotido como sonda
Se secuencia región de interes para confirmar mutación

Biomol (16 decks)

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