Ultracentrifugation Flashcards
Quand les macromolécules commencent à sédimenter?
Lorsqu’elles sont assujetties à des accélérations énormes.
Qu’est-ce que l’ultracentrifugeuse?
C’est un type de centrifugeuse avec lequel il est possible d’atteindre des vitesses de rotations de 80 000 RPM qui donnent lieu à des forces dépassent 600 000X g
Avec la technique d’ultracentrifugation, qu’est-ce qui a pu être démontrer?
Que les protéines sont des macromolécules de composition homogène et qu’un grand nombre de protéines sont composées de sous-unités
De quoi dépend la vitesse avec laquelle une particule sédiments dans une ultracentrifugeuse
De sa masse
À quoi correspond la force de sédimentation?
À la force centrifuge qui s’exerce sur la particule moins la force due au déplacement de la solution par la particule (ou force de flottaison)
À quoi est opposée le déplacement d’une particule à travers une solution?
À une force qui représente la friction entre la particule et la solution
Sous l’influence d’une force centrifuge, une particule va accélérer jusqu’à ce que toutes les forces soient contrebalancée où on atteint la phase stationnaire. À quoi peut servir cette technique?
À mesurer la masse de macromolécules
Qu’est-ce que le coefficient de sédimentation S?
Le coefficient de sédimentation est analogue au coefficient de mobilité électrophorétique; sa valeur est exprimée en unités de 10^-13 sec qui sont connues sous forme de Svedbergs (S)
Vrai ou faux : Il est possible de déterminer la masse d’une particule, m=M/N, à partir de son coefficient de sédimentation S. Et de son coefficient de friction f.
Vrai
Bien que de nouvelles techniques sont maintenant utilisées pour mesurer la masse des macromolécules (______ et ______), l’analyse des complexes de macromolécules utilise toujours _________.
-Chromatographie en gel de filtration
-Électrophorèse SDS-PAGE
-Ultracentrifugation
Comment est exprimés la masse des constituants des complexes des macromolécules?
En Svedberg (S)
Pour quoi sont conçues les centrifugations préparatives?
Pour la préparation d’échantillons possédant des volumes significatifs
La sédimentation peut être faite dans quoi? Donner 2 exemples
La sédimentation peut être faite dans une solution inerte comme le saccharose ou de chlorure de césium (CsCl) dans lesquels la concentration et donc la densité augmente du haut vers le bas du rotor.
L’utilisation de gradients de densité augmente de façon significative le pouvoir de résolution de la centrifugeuse. Comment?
Ce type de gradient minimise l’agitation d’une solution par convection (qui peut nuire à la résolution).
Quelles sont les deux applications des gradients de densité?
1-Ultracentrifugation zonale ou en zones
2-Ultracentrifugation en gradient de densité à l’équilibre