Ultracentrifugation Flashcards
Quand les macromolécules commencent à sédimenter?
Lorsqu’elles sont assujetties à des accélérations énormes.
Qu’est-ce que l’ultracentrifugeuse?
C’est un type de centrifugeuse avec lequel il est possible d’atteindre des vitesses de rotations de 80 000 RPM qui donnent lieu à des forces dépassent 600 000X g
Avec la technique d’ultracentrifugation, qu’est-ce qui a pu être démontrer?
Que les protéines sont des macromolécules de composition homogène et qu’un grand nombre de protéines sont composées de sous-unités
De quoi dépend la vitesse avec laquelle une particule sédiments dans une ultracentrifugeuse
De sa masse
À quoi correspond la force de sédimentation?
À la force centrifuge qui s’exerce sur la particule moins la force due au déplacement de la solution par la particule (ou force de flottaison)
À quoi est opposée le déplacement d’une particule à travers une solution?
À une force qui représente la friction entre la particule et la solution
Sous l’influence d’une force centrifuge, une particule va accélérer jusqu’à ce que toutes les forces soient contrebalancée où on atteint la phase stationnaire. À quoi peut servir cette technique?
À mesurer la masse de macromolécules
Qu’est-ce que le coefficient de sédimentation S?
Le coefficient de sédimentation est analogue au coefficient de mobilité électrophorétique; sa valeur est exprimée en unités de 10^-13 sec qui sont connues sous forme de Svedbergs (S)
Vrai ou faux : Il est possible de déterminer la masse d’une particule, m=M/N, à partir de son coefficient de sédimentation S. Et de son coefficient de friction f.
Vrai
Bien que de nouvelles techniques sont maintenant utilisées pour mesurer la masse des macromolécules (______ et ______), l’analyse des complexes de macromolécules utilise toujours _________.
-Chromatographie en gel de filtration
-Électrophorèse SDS-PAGE
-Ultracentrifugation
Comment est exprimés la masse des constituants des complexes des macromolécules?
En Svedberg (S)
Pour quoi sont conçues les centrifugations préparatives?
Pour la préparation d’échantillons possédant des volumes significatifs
La sédimentation peut être faite dans quoi? Donner 2 exemples
La sédimentation peut être faite dans une solution inerte comme le saccharose ou de chlorure de césium (CsCl) dans lesquels la concentration et donc la densité augmente du haut vers le bas du rotor.
L’utilisation de gradients de densité augmente de façon significative le pouvoir de résolution de la centrifugeuse. Comment?
Ce type de gradient minimise l’agitation d’une solution par convection (qui peut nuire à la résolution).
Quelles sont les deux applications des gradients de densité?
1-Ultracentrifugation zonale ou en zones
2-Ultracentrifugation en gradient de densité à l’équilibre
Que permet l’ultracentrifugation en zones?
Cette technique permet la séparation des particules selon leurs coefficients
de sédimentation
Dans l’ultracentrifugation en zones, comment est déposée la solution de macromolécules?
Dans ce type de centrifugation, la solution de macromolécules est déposée sous forme de couche en haut d’un gradient de densité préparé au préalable
Qu’utilise-t-on pour former le gradient en ultracentrifugation en zones? Pourquoi?
On utilise le saccharose, qui est visqueux et biochimiquement inerte pour former le gradient
Selon quoi l’ultracentrifugation en zones sépare les macromolécules?
Puisque la vitesse de sédimentation est une fonction plus sensible à la forme d’une macromolécule qu’a sa densité, l’ultracentrifugation en zones sépare les macromolécules de forme similaire selon leur masse
Quel est le deuxième nom de l’ultracentrifugation par densité d’équilibre?
centrifugation
isopycnique
Selon quoi l’ultracentrifugation par densité d’équilibre sépare les macromolécules?
sépare les macromolécules selon leur densité
Pour quoi l’ultracentrifugation par densité d’équilibre est la technique préférée?
Technique préférée pour séparer des macromolécules qui possèdent une gamme de densités.
Différence entre la centrifugation de zone et la centrifugation isopycnique.
centrifugation
isopycnique, sépare les macromolécules selon leur densité
, utilisé cscl
Vs zones; Cettetechniquepermetlaséparationdesparticulesselonleurscoefficients
de sédimentation
Dans ce type de centrifugation, la solution de macromolécules est déposée sous forme de couche en haut d’un gradient de densité préparé au préalable
On utilise le saccharose, qui est visqueux et biochimiquement inerte pour former le gradient
Qu’utilise-t-on pour former le gradient en ultracentrifugation par densité d’équilibre (centrifugation isopycnique)? Pourquoi?
CsCl; substance dense qui diffuse relativement vite
Qu’est-il essentiel de faire lorsqu’on utilise des centrifugeuses à grandes vitesses (2)?
-bien balancer le rotor pour éviter tout débalancement lors de la centrifugation
- utilisez le bon rotor!
formule de s
s=v/w^2r= M(1- vmoy densite)/Nf
