Transferencia de blastocistos Flashcards
Transferencia de embriones: definición y fases
“Recogida, manejo y transferencia”
FASES: 1. Selección de hembras donantes. 2. Selección de hembras receptoras. 3. Aplicación de tratamientos de superovulación (donantes) e IA, y sincronización de celos (receptoras). 4. Recogida de blastocistos. 5. Valoración y selección de blastocistos. 6. Conservación de blastocistos. 7. Splitting o sexaje. 8. Transferencia de blastocistos.
Indicaciones ET
- Control de enfermedades: permite el tratamiento de embriones.
- Explota el material genético de reproductoras excelentes.
- Facilita de difusión de material de alto valor genético y libre de enfermedades.
- Adelanta la obtención de descendencia en hembras.
- Permite superar algunos casos de infertilidad.
- Preservar especies en peligro de extinción.
- Producción de gemelos idénticos para investigación.
- Producir descendencia del sexo deseado.
Principales costes de ET
- Productos y protocolos
- Materiales y técnicas
- 20-30€/receptora x 7 receptoras para 5 transferencias.
- Material del acto en sí y acto clínico
- Visitas del vet para superovulación
- Dosis de semen (suelen ser 3)
- Gastos de ET
- Gastos de desplazamiento
- Coste de sincronización
- Precio por embrión
Otras técnicas relacionadas
-OPU (Ovum pick-up): recogida de oocitos mediante punción-aspiración vía transvaginal de los folículos.
IVP (Producción in vitro) = IVM-IVF-IVC
ET fresco o congelado
SEXAJE: transferir fresco o congelado
SPLITTING: división y ET fresco
Selección de hembras
SELECCIÓN DE HEMBRAS DONANTES
• Valor genético alto.
• Buen estado de salud, sin enfermedades.
• Aptas como reproductoras.
• Fáciles de manejar, en la medida de lo posible
• Mejores resultados en hembras adultas.
SELECCIÓN DE HEMBRAS RECEPTORAS
• Buen estado de salud, sin enfermedades.
• Aptas como reproductoras y ciclicidad normal.
• Fáciles de manejar.
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Vacuno: las novillas tienen mejor fertilidad pero es más difícil atravesar el cuello. En vacas hay que esperar unos 60-70 días postparto,
comprobando así que los ciclos son de duración normal.
Yegua: entre 3 y 10 años. No usar el celo del potro.
Cerda: Nulíparas o multíparas.
Pequeños rumiantes: A partir de un año, siendo mejor durante la estación reproductiva.
Superovulación y sincronización de celos
- Superovulación: DONANTES
Obtener el máximo número de blastocistos viables.
FSH——————-eCG - Sincronización: RECEPTORAS
Conseguir ambientes uterinos similares/sincronizados.
PGF2a (cuando hay CL)
PROGESTÁGENOS (implantes o espirales intravaginales):
cuando no hay CL o se hace a ciegas.
**Controlar la formación de CLs antes de la transferencia
Técnica de recogida de blastocistos
A) METODOS QUIRÚRGICOS (Rowson et al., 1969- Cambridge)
- ANESTESIA GENERAL—Laparotomía media ventral
- ANESTESIA LOCAL——-Laparotomía por el flanco
B) METODOS NO QUIRÚRGICOS
-Anestesia epidural——-lavado uterino vía transcervical
• ¿Qué material usamos? Sondas tipo Foley de dos (Catéter de Rush) o tres vías
• ¿Cuándo?: en el día 7 del ciclo.
• ¿Qué esperamos recoger? Blastocistos
• ¿En qué parte del útero se encuentran? En la parte distal.
• ¿Con qué líquido lavamos el útero?
DPBS*, PBD, M16, Ham´s F10, TCM 199, TALP-HEPES.
PAUTA:
1- Anestesia epidural (5ml. procaína 2%) y limpieza aparato genital externo
2- Dilatar cuello uterino (no siempre)
3- Fijar la sonda en el cuerno ipsilateral
4- Introducir 300-500 ml. de líquido de lavado templado, pH = 7,2-7,5
(DPBS + 1% albúmina sérica bovina) y recoger.
-Mediante jeringa, decantando en botella.
-Mediante sistema cerrado de lavado con filtro (0,75 micrometros).
5- Lavar filtros sobre placa de Petri o decantar en botella.
6- Búsqueda de blastocistos, valoración, selección y envasado
(opcional la criopreservación, sexaje, splitting…)
7- Tratar a las donantes para evitar que queden gestantes mediante
PGF2a.
Iniciar un nuevo tratamiento de superovulación a los 60-70 DÍAS (2 ciclos).
DQTA (donor quick turn around): 40 DIAS
Valoración y selección de blastocistos recogidos
CIGOTO: 1 célula (día 0-1 postcelo) - ISTMO
BLASTOCITO: fase de desarrollo de 2/4/8 blastómeros (día 1-5 postcelo) .-> ISTMO O ISTMO-AMPOLLA
MÓRULA: 16 blastómeros (día 5-7 postcelo)
- > TEMPRANA: blastómeros de forma esférica
- > COMPACTA: blastómeros de forma poligonal
BLASTOCISTO: aparece cav. blastocélica ÚTERO
-> TEMPRANO (7-8 postcelo): tiene 100 células
-> EXPANDIDO (8-10 postcelo): tiene 120 células y la
zona pelucida se adelgaza.
ECLOSIONADO (9-11 postcelo): tiene 160 células.
Tipos de blastocistos
GRADO 1=EXCELENTE—————–> 60-80% GESTACIONES
Perfectamente simétrico
Granulación uniforme
Coincide su estado de desarrollo con la edad
Espacio perivitelino uniforme
GRADO 2= BUENO———————–> 50-70% GESTACIONES
Ligeras asimetrias (p.e. zona pelucida oval)
Granulación uniforme
Coincide su estado de desarrollo con la edad
Espacio perivitelino no totalmente uniforme
GRADO 3= REGULAR——————-> 30-40% GESTACIONES
Signos de degeneración en algunos blastómeros
No es simétrico
Menor tamaño que el que le corresponde por su desarrollo
Blastocele colapsado
GRADO 4= POBRE————> 12-20% GESTACIONES. NO SE TRANSFIERE.
No es simétrico
Granulación no uniforme
Blastómeros vesiculados
Ausencia de compactación en los blastómeros
Menor tamaño
GRADO 5= DEGENERADO————> NO SE TRANSFIERE
Degeneración pronunciada
Puede que no sea posible determinar su fase de desarrollo
Conservación de blastocistos
-> TRANSFERIR
-> CONSERVAR:
- Refrigerados: 0-4ºC durante 24h
Congelados
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CONGELACIÓN CONVENCIONAL: Método lento (0,5ºC/min)
Etilenglicol 1,5 M, equilibrar 20 min. y cargar en pajuela de 0,25 ml.
Glicerolización: Glicerol 10% en PBS + 0,4% BSA, equilibrar 20 min y cargar en paj. de 0,25 ml
PAUTA DE CONGELACIÓN
-5,5ºC durante 1-3 min. (baños de metanol)
Seeding
Equilibrado a –5,5 ºC /15 min
Descenso a 0,5ºC/min hasta llegar a –32ºC
Meter en NL
VITRIFICACIÓN:
Método rápido (30.000ºC/min)———–NL + presión negativa
Método Lento (8.000ºC/min)————-NL
Descongelación de blastocistos
- Etilenglicol: descongelar 20 seg. a 30ºC y hacer transferencia directa.
- Glicerol: descongelar 20 seg. a 30ºC, pasar el blastocisto a:
a) soluciones decrecientes de glicerol (6,6%, 3,3% y 0% en PBS + 10% Suero fetal
bovino) + 0,3 M sucrosa, durante 5 minutos.
b) única solución de sucrosa 34,2 p/v (hipertónica) durante 1 minuto y lavamos 3
veces en DPBS.
-Vitrificación: descongelar 5-10 seg. a 20ºC y transferir.
Técnica de transferencia
- Método no quirúrgico (transcervical).
- Anestesia epidural (opcional)
- Limpieza de recto y zona vulvar.
- Colocación de funda de protección.
- Introducción del catéter con aperturas laterales.
Metálico
Funda desechable - Técnica similar a la IA.
- Tasa de gestación: 50-60%
CUIDADOS:
- Reducir al máximo el stress.
- Evitar cambios de alimentación, de ubicación, antiparasitarios, etc. Al menos 3
semanas antes
ET en cerdas
• DIFUSIÓN DE MATERIAL GENÉTICO ENTRE GRANJAS
• ELIMINAR EL RIESGO SANITARIO AL INTRODUCIR NUEVAS LÍNEAS GENÉTICAS
• ADAPTACIÓN DE LOS LECHONES AL NIVEL DE ENFERMEDAD
Selección de donantes:
- Nulíparas (esperar al 3º celo)
- Multíparas (mayor número de embriones)
- Selección de receptoras
- Superovulación
eCG: dosis única 1000 UI/A en el día 15-16 (inicio fase folicular)
Altrenogest (18 días) + eCG (d19) + HCG (d22) - Recogida de embriones
Método quirúrgico: lavado de trompas (d2) o de cuernos (d 5-6). Puede hacerse cada 3 semanas. - Transferencia
- Método no quirúrgico:
Catéter Universidad de Murcia-Missouri, Colorado
Acortando los cuernos. - Método quirúrgico:
Laparotomía media ventral. - Congelación
Vitrificación, delipidación, congelación lenta.
ET en oveja y cabra
- Selección de donantes
Jóvenes (4-6 años), buen estado reproductivo, en la estación. - Selección de receptoras
En el mismo estado que la donante, buen estado reproductivo - Superovulación
eCG: 1.000 UI – 24 h. antes de retirar las esponjas
FSH:
20 mg de FSHp repartida en 3 días (cada 12 h.)
8 mg de FSHo repartida 3 días (cada 12h). - Recogida de embriones
Sacrificio y lavado de cuernos y oviductos.
Quirúrgico: laparotomía y lavado retrógrado de oviductos.
No quirúrgico: laparoscopia y exteriorización o transcervical. - Transferencia
- Quirúrgica: laparotomía media ventral
- No quirúrgica: laparoscopia
- Congelación
Ver vacuno
ET en yegua
DEFECTOS REPRODUCTIVOS-SUBFERTILES POTRAS DE DOS AÑOS: UNA CRIA POR AÑO YEGUAS DE GENÉTICA SUPERIOR YEGUAS DE COMPETICIÓN YEGUAS QUE PAREN AL FINAL DE LA ESTACIÓN
- Selección de donantes
Buen estado reproductivo, jóvenes. - Selección de receptoras
Yeguas de entre 3-10 años, cíclica, sin patologías reproductivas
Fácil manejo, buena capacidad maternal y lactacional - Superovulación
Malos resultados - Recogida de embriones
No quirúrgico (flushing)-día 7 - Transferencia
Yeguas ovariectomizadas
No quirúrgica-cuerpo del útero - Congelación.
Limitada
