Tecnicas De Reproduccion Asistida

Question 1

Tecnicas de reproducción asistida

Answer 1

IA + control hormonal + evaluación seminal

• Sexaje de espermatozoides para trabajar con semen a la carta.
• Transferencia embrionaria
• Producción de embriones in vitro
• Predeterminación sexo embrionario.
• Inyección intracitoplasmática de spz -> usado en yeguas.
• Transgénesis.
• Clonación.

Question 2

Producción in vitro de embriones, pasos

Answer 2

• Recogida de oocitos
• Maduración in vitro oocito
• Fertilización in vitro
• Cultivo in vitro

Question 3

Recogida de oocitos

Answer 3

1. Corte del ovario en matadero. Cortes en superficie del ovario, lavamos con un medio de cultivo y se recoge. de ese medio.
   TCM 199: medio de cultivo con complejos cúmulo-oocito dentro.
2. Ovum pick up (OPU): Aspiración transvaginal de oocitos guiado por ecografía.
   Ecógrafo con aguja de aspiración, atravesamos pared de vagina. Se realiza en mujeres, vacas y yeguas.
   Lo hacemos en animales vivos y podemos hacerlo 1 o 2 veces/semana, en animales gestantes y en pre/púberes.
   A los animales prepúberes no podemos preñarlos pero sí extraer ovocitos.
3. Lavado de trompas.
4. Aspiración folicular: En ovarios de matadero, 6-8h desde sacrificio al laboratorio a 25ºC inmersos en solución salina + medio de cultivo.
   Vamos a aspirar folículo x folículo.
   Folículos de la porción + externa del ovario ya que los que están en el interior son folículos primordiales.
   Oocitos en folículos entre 2-8mm.
   Células del cúmulo sujetan al oocito -> recogemos el complejo cúmulo-oocito.
   Aspiramos x el hilio de ovario: foliculos en superficie desde el interior porque podemos romper el folículo y perder el oocito.
   Hacemos presión negativa y vamos moviendo la aguja.

Question 4

Valoracion de oocitos

Answer 4

Grado 1: núcleo homogéneo con muchas células del cúmulo. Bueno.
Grado 2: 1-4 capas de células del cúmulo.
Grado 3: Oocito expandido, granulado, muy grande, poco grosor de la zona pelúcida.
Grado 4: Oocito desnudo sin células del cúmulo.

Question 5

Maduracion de oocitos

Answer 5

Parte de los procesos que se producen en el estado vesícula germinal que conduce a completar la 2ª división meiótica -> 1er corpúsculo polar. 
CONDICIONES
39ºC
Atm 5% CO2 
HR: 90-100%
Tiempo de cultivo: 24-48 horas.
Medio de maduración: TALP, TCM 199

Question 6

Fertilizacion in vitro

Answer 6

Capacitación del esperma (sperm-up, percole)
Co-cultivo de oocitos maduros.
5-10 oocitos con 1 M o 2 M de espermatozoides.
Los spz tienen que estar en grupo para trabajar mejor.
Se cubre con parafina o aceite para que la solución acuosa no se evapore -> evitamos así la concentración de solutos y la muerte.
CONDICIONES
39ºC
Atm 5% CO2
HR: 90-100%
Tiempo de cultivo: 12- 24horas.
Medio de maduración: TALP, TCM 199

Question 7

Cultivo in vitro

Answer 7

de cigotos/embriones.
CONDICIONES
39ºC
Atm 5% CO2 + 5% O2 + 90%N2
HR: 95-100%
Tiempo de co-cultivo: una semana (6-8d)
Medio de maduración: TCM 199, SOFT

Transferimos o congelamos el blastocisto

Question 8

Aplicaciones de produccion in vitro de embriones

Answer 8

• Tto de infertilidad
• Mejora genética de una población
• Obtención de crías en animales valiosos
• Valoración de la capacidad fertilizante de los gametos