Conservación del esperma por especies

Question 1

Toro

Answer 1

Fresco a temperatura ambiente:
 Diluyente: Caprogen® gaseado con N.
 Mantenimiento a 25ºC
 Tiempo = 60-80 h.
 Tasa de no retorno a celo = 60-65%
 Uso: en países subdesarrollados y en cooperativas con circuitos de inseminación

Refrigerado:
 Diluyente: Biladyl® (Tris-acido citrico-glucosa) + Antib + yema de huevo 6%
 Mantenimiento a 5ºC
 Tiempo = 18-24 h.
 Tasa de no retorno a celo = 60%
 Uso: Poco usado
 Fases:
1. Diluir 1:2 en sol. temperada a 37ºC
2. Incubar 10 min. a temp. ambiente (22ºC) + Seminograma
3. Añadir diluyente:
i. 5 x106 spz móviles (MT)/dosis
ii. 2,5 x106 spz móviles (MT)/dosis
4. Refrigerar a 0,3ºC/min (aprox. 1 hora)
5. Envasar en pajuelas de 0,25 ml (bajo condiciones de refrigeración)
6. Almacenar a 5ºC

Congelado:
 Diluyente: (Triladil, Steridil, AndroMed, OptiXell, Bioxell, Bullxell)
 Triladyl® (Tris-acido citrico-glucosa-glicerol 10%) + Antib + yema huevo 6%
 Fases:
1. Diluir 1:2 en sol. temperada a 37ºC
2. Incubar 10 min. a temp. ambiente (22ºC) + Seminograma
3. Añadir diluyente: 15-20 x106 spz móviles (MT)/dosis
4. Refrigerar a 0,3ºC/min (aprox. 1 hora) hasta 5ºC
5. Equilibrado de 4-6 h
6. Envasar en pajuelas de 0,25 ml (bajo condiciones de refrigeración)
7. Congelación:
a) 10 min en vapores de NL, horizontal, 2-5 cm, luego meter en globelets.
b) Criocongelador:
i. De 5º a –15ºC: –25ºC/min
ii. De –15ºC a –120ºC: -10ºC/min
iii. Inmersión en NL a –196ºC
8. Control a la descongelación: ≥30% de MT

Question 2

Ovino

Answer 2

Se trabaja con mayor número de espermatozoides por dosis porque se deposita el semen en el fondo de la vagina. Solo si se hace una laparoscopia para depositar la dosis en el útero se emplean dosis más pequeñas.
Esta especie da muy malos resultados al congelado.

Fresco:
 Procedente de eyaculados recién obtenidos
 Añadir diluyente: 120-150 x106 spz móviles (MT)/dosis
 Alternativa en caso de machos con mala adaptación a la congelación

Refrigerado:
 Conservar a 15ºC 10 h o 5ºC 24 h.
 Diluyentes: lácteos y sintéticos (Byladil, TES, HEPES, OviXCell…).
 Añadir yema de huevo al 10%
 Fases
1. Diluir 1:2 en sol. temperada a 37ºC
2. Incubar 10 min. a temp. ambiente (22ºC) + Seminograma
3. Añadir diluyente y yema de huevo 10%: 200-300 x106 spz móviles (MT)/dosis
4. Refrigerar a 0,22ºC/min (aprox. 1 hora)
5. Envasar en pajuelas de 0,25/0,5 ml (bajo condiciones de refrigeración)
6. Almacenar a 5ºC

Congelado
 Diluyentes: lácteos y sintéticos (TRIS, TES, HEPES, Triladyl, Andromed…).
 Añadir yema de huevo al 10% + Glicerol al 7%
 Fases
1. Diluir 1:2 en sol. temperada a 37ºC con yema de huevo y glicerol
2. Incubar 10 min. a temp. ambiente (22ºC) + Seminograma
3. Añadir diluyente, yema de huevo y glicerol: 200 x106 spz móviles (MT)/dosis
4. Refrigerar a 0,22ºC/min (aprox. 1 hora)
5. Equilibrar durante 2-4 horas
6. Envasar en pajuelas de 0,25/0,5 ml (bajo condiciones de refrigeración)
7. Congelar: vapores (10min. a 16 cm y 3 min. a 4 cm) o criocongelador
8. Control a la descongelación: ≥30% de MT

Question 3

Caprino

Answer 3

Por su fisiología, las glándulas anejas secretan fosfolipasas y lectinasas. Estas sustancias hidrolizan algunas proteínas de la yema de huevo y la leche, obteniendo ácidos grasos y lisolecitinas. Esto disminuye la capacidad de congelación y motilidad de los espermatozoides y aumenta las reacciones en los acrosomas.
Hay dos soluciones a este problema:
 Reducir los porcentajes de estos crioprotectores
 Centrifugar y retirar el plasma seminal antes de añadir la yema de huevo

Fresco
 Procedente de eyaculados recién obtenidos
 Añadir diluyente: 120-150 x106 spz móviles (MT)/dosis
 Alternativa en caso de machos con mala adaptación a la congelación

Refrigerado
 Diluyentes: Lácteo, Sintéticos + yema de huevo
 Fases
1. Diluir 1:2 en sol. temperada a 37ºC
2. Centrifugar semen
3. Incubar 10 min. a temp. ambiente (22ºC) + Seminograma
4. Añadir diluyente y yema de huevo 12-20%:
100-200 x106 spz móviles (MT)/dosis
5. Refrigerar a 0,22ºC/min (aprox. 1 hora)
6. Envasar en pajuelas de 0,25/0,5 ml (bajo condiciones de refrigeración)
7. Almacenar a 5º C
8. Utilizar en 12 h.

Congelado
 Diluyentes: Lácteo, Sintéticos + yema de huevo + glicerol
 Fases
1. Diluir en excipiente lácteo, DPBS, Biladyl a 1:5 o 1:10.
2. Centrifugar semen 500 g/15 min.
3. Incubar 10 min. a temp. ambiente (22ºC) + Seminograma
4. Añadir diluyente (excipiente + glicerol 4-7% + yema de huevo 20%)
100-200 x106 spz móviles (MT)/dosis
5. Refrigerar a 0,22ºC/min (aprox. 1 hora)
6. Equilibrado durante 1-4 h.
7. Envasar en pajuelas de 0,25/0,5 ml (bajo condiciones de refrigeración)
8. Congelar: vapores (10min. a 16 cm y 3 min. a 4 cm) o criocongelador
9. Control a la descongelación: ≥30% de MT

Question 4

Porcino

Answer 4

Refrigerado
Es el método más empleado en esta especie. Hay centros de machos donde se les saca semen cada dos días y luego se manda a explotaciones de hembras.
En Europa el 80% de las IA se hacen con semen refrigerado.
 Diluyente: Preparados comerciales de base acuosa y láctea. Se les añade potasio para mantener la actividad de la bomba sodio-potasio y mejorar la motilidad. Los de larga duración añaden protectores del acrosoma y son diluyentes más caros.
 Mantenimiento a 15º-20ºC
 Tiempo = hasta 8 días
 Fertilidad = igual o mejor que MN.
 Uso: 99% de las inseminaciones
 Problemas:
o Muy sensible al frío, se mantiene entre 15 y 20 ºC
o Efecto dilución: reduce la concentración de potasio y de proteínas plasmáticas
o Coste de los diluyentes de larga duración
o Antibióticos necesarios por la contaminación durante la recogida del semen. Penincilina + estreptomicina, kanamicina, gentamicina, neomicina, ceftiofur…
 Disminuyen la motilidad
 Dan aglutinación espermática
 Dan alteraciones acrosómicas
 Reducen el pH
o Directiva 90/429 CEE eficaz contra leptospiras y micoplasmas
Para reducir el uso de antibióticos se puede someter la muestra a rayos UV antes de la dilución o reducir la carga bacteriana mediante gradientes de densidad.
 Fases:
1. Recogida fraccionada o centrifugación y diluir 1:2 en sol. temperada a 37ºC
2. Incubar 20 min. a 32-35 ºC + Seminograma
3. Añadir diluyente: 3000 x106 spz móviles (MT)/dosis
4. Refrigeración lenta durante unas 2 horas a 15ºC
5. Envasar en botes de 70-100 ml (bajo condiciones de refrigeración)
6. Almacenar a 15ºC (Controles a partir del 2º día) Hay que mover los botes para evitar la sedimentación de espermatozoides.

Congelado
Solo en inseminaciones profundas. Empleado en centros de alta genética y para conservar razas amenazadas.
 Yema huevo 20% + glicerol 6% + ↑↑azucares + detergentes
 Fases:
1. Recogida fraccionada o centrifugar; diluir 1:2 en sol. temperada a 37ºC
2. Incubar 20 min. a 32-35 ºC + Seminograma
3. Añadir diluyente: 15-20 x106 spz móviles (MT)/dosis
4. Refrigerar a 0,3ºC/min (aprox. 1 hora) hasta 5ºC
5. Equilibrado de 4-6 h
6. Envasar en pajuelas de 0,5 ml o macrotubos (bajo cond. de refrigeración)
7. Congelación:
a) 10 min en vapores de NL, horizontal, 2-5 cm, luego meter en globets.
b) Criocongelador:
i. De 5º a –15ºC: -25ºC/min
ii. De –15ºC a –120ºC: -10ºC/min
iii. Inmersión en NL a -196ºC

Question 5

Perro

Answer 5

Fresco:
 No es necesario diluir: recoger e inseminar.
 Recomendado diluir en caso de transporte >2-3 h. (4ºC)
 Diluyente:
o leche desnatada-glucosa
o Tris-acido cítrico-glucosa (CaniPlus Chill, CANiXcell)
 Añadir diluyente: 150-200 x106 spz móviles (MT)/dosis
 Dosis: 5-10 ml.

Refrigerado:
 Conservar a 4ºC durante 12-24 h. (hasta 4 d)
 Diluyentes: lácteos y sintéticos (TRIS). CaniPlus Chill, CANiXcell
 Añadir yema de huevo al 10-20%
 Fertilidad: 45-70%
 Fases
1. Recogida fraccionada y centrifugación (300-700 g /5 min) + Seminograma
2. Resuspender pellets con 2-5 ml de diluyente a 37ºC
3. 200 x106 spz móviles (MT)/dosis
4. Refrigerar a 5ºC durante 30-45 min
5. Almacenar a 4ºC
6. Utilizar 5-10 ml

Congelado
 Diluyentes: lácteos y sintéticos (TRIS) CANIFreeze, CaniPlus Freeze, Triladil Canine
 Añadir yema de huevo al 20% + Glicerol al 6-8%
 Fertilidad: vaginal=35%; intrauterina=52%
 Fases
1. Recogida fraccionada y centrifugación (300-700 g /5 min) + Seminograma
2. Resuspender pellets con 2-5 ml de diluyente a 37ºC
3. 100-200 x106 spz móviles (MT)/dosis
4. Refrigerar a 0,3ºC/min (aprox. 1 hora) hasta 5ºC
5. Equilibrar durante 2-4 horas
6. Envasar en pajuelas de 0,25-0,5 ml (se utilizan 2-4 para IA)
7. Congelar: vapores (8 min. a 4 cm) o criocongelador
a. -2ºC/min desde +4 a -7ºC
b. -50ºC/min desde -7 a -100ºC
c. -25ºC/min desde -100 a -180ºC
8. Control a la descongelación: ≥30% de MT

Question 6

Caballo

Answer 6

Fresco
 Procedente de eyaculados recién obtenidos
 Añadir diluyente: 300 x106 spz móviles (MT)/dosis
Refrigerado
 Diluyentes: Lácteo, Sintéticos + yema de huevo 10-20% (INRA96, Andromed-E, EquiPlus…)
 Fertilidad: similar a MN.
 Fases
1. A) Recogida fraccionada y diluir 1:2 en sol. temperada a 37ºC
B) Recoger, centrifugar semen y diluir
2. Incubar 10 min. a temp. ambiente (22ºC) + Seminograma
3. Añadir diluyente y yema de huevo 10-20%: 300 x106 spz móviles (MT)/dosis
4. Refrigerar a 0,3ºC/min (aprox. 1 hora)
5. Envasar en jeringas de 10-40 ml. (bajo condiciones de refrigeración)
6. Almacenar a 5º C
7. Utilizar en 12 h.(24h.)
Congelado
Un 25% de los caballos no admiten la congelación.
 Diluyentes: Lácteo/Sintético + yema de huevo 20% + Glicerol 4% (INRAFreeze, Gent, EquiPlus Freeze)
 Fertilidad: muy variable y se debe controlar mucho el momento de la ovulación de la yegua antes de inseminarla.
 Fases
1. Diluir 1:2 en diluyente.
2. Centrifugar semen 500 g/15 min.
3. Reconstituir con excipiente + glicerol 4% + yema de huevo 20%
4. Incubar 10 min. a temp. ambiente (22ºC) + Seminograma
5. Añadir diluyente: 300-500 x106 spz móviles (MT)/dosis
6. Refrigerar a 0,3ºC/min (aprox. 1 hora)
7. Equilibrado durante 1-4 h.
8. Envasar en pajuelas de 0,25/0,5/4 ml. (bajo condiciones de refrigeración)
9. Congelar: vapores (10 min. a 4 cm) o criocongelador
10. Control a la descongelación: ≥30% de MT