Transcrição em eucariotas Flashcards
Diferenças entre eucromatina e heterocromatina:
- Eucromatina - cromatina descondensada → ativação da transcrição
- Heterocromatina - cromatina condensada → inativação da transcrição
Qual a função de CRC (complexos de remodelação da cromatina)
Tendo em conta a organização do DNA, para o tornar acessível para a transcrição CRCs e enzimas (como HATs, histonas-acetil-transferases) atuam na heterocromatina e vão ter um efeito de “relaxamento”, ou seja, descondensado-a e transformando-a em eucromatina.
Quantas bases de DNA estão associados ao nucleossoma
146 bp
Montagem de um nucleossoma:
- Forma-se de um tetrâmero de duas H3 e duas H4
- Tetrâmero de H3/H4 liga-se ao dsDNA
- Ligação recruta dois dímeros de H2a e H2b
- Formação de um octâmero com duas histonas de cada.
A acetilação de resíduos nas caudas N-terminais por HAT provoca:
A diminuição da afinidade das histonas para o DNA → cromatina menos compacta → acesso da maquinaria de transcrição
Exemplos de complexos remodeladores de cromatina:
- SWI/SNF
- ISWI
Como é que as diferentes remodelações da cromatina afetam a transcrição:
- Acetilação → transcrição
- Desacetilação → silenciamento de genes
- Metilação → repressão de transcrição
Ordem de ligação dos fatores de transcrição para formar o complexo de pré-iniciação (PIC):
TFIID → TFIIA → TFIIB → TFIIF + RNA Pol II → TFIIE → TFIIH → melting do promotor
O melting do promotor requer a hidrólise de:
ATP mediada por TFIIH → formação do complexo aberto com fosforilação do domínio C-terminal da subunidade Rpb1 da RNAPII, que leva ao início da transcrição.
Que fatores de transcrição gerais se ligam a estas regiões no promotor:
* BRE
* TATA
* Inr
* DCE, DCEII, DCEIII
* DPE
- BRE - TFIIB
- TATA - TBP (TFIID)
- Inr - TFIID
- DCE, DCEII, DCEIII - TFIID
- DPE -TFIID
- TFIIF liga-se à polimerase, ajudando o seu recrutamento para o promotor
- TFIIE liga-se a TFIIH e ajuda o seu recrutamento à região promotora. TFIIH é necessário para fazer o melting do promotor (separação das cadeias)
Que proteínas se ligam e facilitam a pausa da polimerase após a iniciação?
DSIF e NELF
O que ocorre durante a pausa da polimerase?
Recrutamento da enzima capping e de uma RNA metiltransferase(na Ser5 fosforilada no domínio C-terminal da Polimerase) que adicionam um guanosina (guanina ligada a um anel de ribose) metilada à extremidade 5’ do RNA
Como é que a polimerase sai da pausa e entra na elongação produtiva?
- P-TEFb medeia a fosforilação de DSIF, NELF e Ser2 da CTD da Polimerase, estimulando a elongação produtiva → NELF diassocia-se do complexo transcricional mas DSIF, TFIIS e P-TEFb continuam ligados ao longo do gene
- o capping do RNA também estimula a saída da Polimerase da Pausa
O que promove a fuga da Polimerase ao promotor:
Fosforilação da serina5 no CTD pelo TFIIH → destabilização do PIC e a polimerase liberta-se das ligação com o núcleo do promotor. Contudo, muitos GTFs permanecem ligados aos promotores para facilitar rondas subsequentes de transcrição.
O que ocorre ao padrão de fosforilação de CTD da polimerase ao longo da elongação produtiva:
Forma-se um gradiente de fosforilação entre Ser5 e Ser2. A fosforilação de Ser5 diminui ao longo do gene e a fosforilação de Ser2 aumenta ao longo do gene → na extremidade 5’ há mais quantidade de ser5 fosforilada e na extremidade 3’ há mais quantidade de ser2 fosforilada → este padrão é importante pois é o responsável pelo recrutamento das proteínas necessárias a cada fase.
