TLC Flashcards
Vad är TLC för typ av analytisk metod?
Vätskekromatisk
Vad används TLC till?
- Separera analyter i blandning
- Kontrollera en analyts renhet
- Rena upp prov - Preparativ TLC
- Följa förloppet under en kemisk reaktion
Vad står TLC för?
Tunnskiktskromatografi
Ge exempel på applikationer för TLC
- Klinisk diagnostik
- Drogsceening, dopingkontroller, metabolismstudier
- Separation och analys av oligosackarider
- Läkemedelsindustrin
- Produktion (identitetsoch renhetstester), kvalitetskontroller
- Lismedelsindustrin
- Innehåll i olika födoämnen, identifiera kosttillskott eller bekämpningsmedel.
- Homeopatisk läkemedelsindustri
- Identifikation, stabilitetstester, identifiera “förfalskning”
- Kosmetika industrin
- Screena för illegala ämnen eller konserveringsmedel
Skillnaden på en polär molekyl och en opolär molekyl?
Polär molekyl
Övervägande positiv i minst en ände och negativ i andra
Diploment= mått på deras polaritet.
Polära ämnen är ofta lösliga i andra polära ämnen och nästan helt olösliga i opolära föreningar.
En opolär molekyl
Motsattsen till en polär molekyl.
Laddningsfördelningen symmetrisk över hela molekylen.
En opolär molekyl har inga elektrisk laddade poler.
Vad består TLC av?
- Stationär fas
Någon form av adsorberande yta
- Mobil (rörlig) fas - vätska (ofta trekomponentsystem)
Vad är skillnaden på normal Phase och Reversed Phase kromatografi?
Normal phase
Separerar på grundvaö av hydrofila (polära) interaktioner
Reversed phase
Separerar på grundvaö av hydrofoba (ickepolära) interaktioner
Berätta om vad som används i stationär fas
En TLC-platta används innehållande:
Ett lager kiselgel (Sorbent) som täcker glas-,plast- eller aluminium platta.
Kiselgel= polymer av kiseloxid som är amorft, poröst och delvis hydratiserat.
I tillverkningen görs partiklar av olika storlekar:
HPTLC= high performance TLC: små kiselgorn för extra bra separation
Beskriv TLC
Hur snabbt föreningarna följer den mobila fasen beror på:
- Hur lösliga ämnena är i den mobila fasen
- Hur bra de adsorberas av den stationära fasen
Kapillärkrafterna gör att elueringen sker.
Kontinuerlig jämvikt ställer in sig under elueringen (vatten binds till kiseloxiden) och flödet pressar samtidigt föreingarna framåt.
- TLC separerar på grundval av hydrofilicitet
- En hydrofil (polär) förening adsorberar bra till stationära fasen (normal phase) och vandrar inte så långt
- Analyterna separeras pga av deras relativa affinitet till den stationära fasen.
- Mobila fasens polaritet påverkar elueringen.
Vad är Rf?
Rf är kvoten för sträckan som provet eluerat/sträckan som fronten har vandrat och skilher sig för samma föreningar om olika elueringsmedel eller plattor användts
Beskriv matrialet som används vid TLC
Beskriv utförandet av TLC
Berätta om TLC separation av färgade föreningar.
Hur många utvecklingsstadier finns de?
Vad är de gröna?
Vad är de gula?
Vad är karoten?
6 utvecklingsstadier
Grönt = klorofyll
Gult = Lutein
När använder du nedstående färgningar och varför?
Orcinolfärgning
Kopparacetat
Anisaldehyd
Fär färglösa föreningar utförs färgreaktion för att detektera analyterna genom UV-detektion (fluorescerande ämnen tillsätts)
Orcinolfärgning = infärgning av sockerinnehållande lipider
Kopparacetat = infärgning av organiska föreningar
Anisaldehyd = infärgning av lipider, olika lipidklasser ger olika färg.
Beskriv stegen från provapplikation till utvärdering
Du kan diagnostisera olika nedärvda lysosomala upplagringssjukdommar med TLC pga att de har specifika biomarkörer.
Vilken analys körs?
Varför kan man analysera detta?
Vilka är markörerna?
Vilka är sjukdommarna?
TLC används för att analysera oligosackarider (Sura och neutrala socker) inom den kliniska diagnostiken.
“Glykokonjugat i urin”- Screeninganalys för biomarkörer
Diagnostiken av olika nedärvda lysosomala upplagringssjukdomar kan analyseras då glykosylerade proteiner inte kan brytas ned i lysosomen.
Vad är detta?
s
HPTCL-analys av sura och neutrala socker i urin.
Beskriv
Kvalitativ TLC analys
Vad finns de för lipid klasser i plasma och erytrocyter?
